NY∕T 3282.3-2018 真菌微生物农药 金龟子绿僵菌 第3部分：金龟子绿僵菌可湿性粉剂(农业).pdf

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1、ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3282.3-2018 真菌微生物农药金龟子绿僵菌第3部分:金龟子绿僵菌可湿性粉剂Fungal pesticides-Metarhizium anisopliae一Part 3:Metarhiziumnisopliae wettable powder(WP)2018一07-27发布2018-12-01实施.孙中华人民共和国农业农村部发布NY/T 3282.3一2018目。吕Y/T 3282(真菌微生物农药金龟子绿僵菌分为3个部分:一一第1部分:金龟子绿僵菌母药;一-第2部分:金龟子绿僵菌油悬浮齐1;一一第3部分:金龟子绿

2、僵菌可湿性粉剂。本部分为NY/T3282的第3部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由农业农村部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位:农业农村部农药检定所、重庆大学、重庆重大生物技术发展有限公司。本部分主要起草人:郭明程、王中康、杨峻、殷幼平、王晓军、李向英、胡丽。I NY/T 3282.3-2018 1 范围真菌微生物农药金龟子绿僵菌第3部分:金龟子绿僵菌可湿性粉剂本部分规定了真菌微生物农药金龟子绿僵菌可湿性粉剂的术语和定义、要求、试验方法、产品的检验和验收，以及标志、标签、包装、储运、安全和保质期。本部分适用于由真菌农药母药与适宜的助剂和填料加工而成的金龟子绿僵菌

3、可湿性粉剂。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志GB/T 1601 农药pH值的测定方法GB/T 1604 商品农药验收规则GB/T 1605 商品农药采样方法GB 3796 农药包装通则GB/T 5451 农药可湿性粉剂润湿性测定方法GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T 14825 农药悬浮率测定方法GB/T 16150 农药粉剂、可湿性粉剂细度测定方法Y/T 3282.1 真菌微生物农药金龟子绿

4、僵菌第1部分:金龟子绿僵菌母药3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 金龟子绿僵菌可湿性粉荆Metarhizium aniso pliae wettable powder(WP)由金龟子绿僵菌母药与适宜的填料及助剂加工成的可分散于水中形成的悬浮液的粉状制剂。3.2 润湿时间wetting time 将一定量的可湿性粉剂从规定的高度倾入盛有一定量标准硬水的烧杯中，测定其完全润湿的时间。3.3 含于包量spore content 每单位金龟子绿僵菌可湿性粉剂样品中所含金龟子绿僵菌抱子的数量。3.4 活于包率percentage of Iiving spor臼即抱子萌发率，指在一定培养条件

5、下，萌发的金龟子绿僵菌抱子数占总抱子数的百分率。3.5 菌落形成单位colony forming units(CFU)l NYjT 3282.3-2018 以涂布方法，使单个分生抱子分散生长在营养琼脂培养基上，每一活抱子形成一个菌落，即为菌落形成单位CCFU)。3.6 杂菌率rate of microbial contaminants 金龟子绿僵菌母药样品中除绿僵菌抱子外，其他菌(真菌和细菌等)量与总菌量的百分率。3.7 储存稳定性storage stability 金龟子绿僵菌可湿性粉剂样品在室温或低于室温下存储-定时间后，产品的活抱数与其标明值的相对百分率。4 要求4.1 组成和外观金龟子

6、绿僵菌可绿色均匀疏松粉末5 试验方法5.1 一般规定除非另有说明，试5.2 抽样按照GB/T1605规定进300 g。采样时，应特别注意样品的代集后，应立即检验。若不能立即检验，可储存在40C冰箱中。5.3 菌种鉴别试验有效成分的特征描述参见附录A。将可湿性粉剂湿润、稀释后，均匀涂布在萨氏培养基1/4SDAY平板上，选择典型单菌落菌株作为代表菌株，并按照附录B进行菌种鉴别。5.4 含抱量测定按照NYjT3282.1中5.4的规定进行测定。5.5 活抱率测定按照附录B的规定进行测定。5.6 杂菌率测定按照NY/T3282.1中5.4的规定测定样品的杂菌率。5.7 干燥减量测定按照NY/T3282

7、.1中5.7规定的方法测定样品的干燥减量。5.8 细度测定按照GB/T 16150的规定进行测定。5.9 pH测定按照GB/T 1601的规定执行。5.10 湿润时间测定按照GB/T 5451的规定执行。5.11 悬浮率的测定5.11.1 方法提要NY/T 3282.3-2018 将试样于具塞量筒中，在C30+2)OC恒温箱内静置30min后，通过分别测定底部1/10悬浮液与上悬浮液的含抱量，计算绿僵菌可湿性粉剂样品的悬浮率。5.11.2 仪器及设备三角瓶:250mL。磨口具塞玻璃量筒:250mLC内径38.5 mm40 mm，刻度间距20.0 cm21.5 cm,250 mL刻度线与瓶塞底部

8、间距4cm6 cm)。真空泵。恒温箱:控温误差+20C。光学显微镜:目镜物镜=40O倍。水平振荡仪:转速二注兰孔10Or旷/min亮线血球计数板:25X16。微量移液器:0.2 mLl.0 mL。手动计数器:19 999。5.11.3 试验步骤将250mL试样充分摇匀后倒人250mL具塞量筒，盖上瓶塞在1min内上下颠倒30次，使之充分均匀。直立量筒，打开塞子，静置约30秒。用微量移液器快速从量筒中取样(约5mL)，按照 NY/T3282.1中5.4的规定测定悬浮液的含抱量Cj。再将具塞量筒放人C30:!:2)OC超级恒温器中静止恒温30min。轻轻取出，并用一接有真空泵的吸管将瓶中菌液由上液

9、面逐渐向下吸出225mL，盛于三角瓶中(此为上悬液)。控制整个操作过程在15s30 s内完成。量筒中所剩子包子悬浮液为下悬液，测定量筒底部剩余的25mL悬浮液，按照NY/T3282.1中5.4 的规定测定其含抱量C2，计算悬浮率。5.11.4 测定结果试样的总悬浮率Wj按式(1)计算。Wj=1AO X 50Cj一25c2V 1 _ 100 X(10Cj一句)925OC12100=9Cl(1)式中:W1一-试样的总悬浮率，单位为百分率C%);Cj 一-静置前悬浮液含抱量，单位为亿抱子每毫升(千乙抱子/mL);。一一-静置后底部1/10悬浮液含抱量，单位为亿抱子每毫升(亿抱子/mU。3 NY/T

10、3282.3-2018 5.12 储存稳定性5.12.1 方法提要将试样密闭放置于50C储存12个月或150C250C储存6个月后，按照附录B规定的方法测定活抱率。储存后不低于活抱率初始值的80%。5.12.2 仪器及设备冰箱:50C。样品柜:室内控温范围150C250C。棕色磨口玻璃瓶:带有磨口瓶塞，确保样品密闭。5.12.3 试验步骤将20g试样放在玻璃瓶中，使其铺成平滑均匀层。密封后，置于50C冰箱中放置12个月或150C250C恒温箱中放置6个月。最后，按照附录B的规定测定活抱率。6 产品的检验和验收应符合GB/T1604的规定。极限数值处理应按照GB/T8170中4.3.3的要求执行

11、。7 标志、标签、包装、储运安全和保质期7.1 标志、标签应符合GB3796的规定，同时注明储运条件。7.2 包装应符合GB3796和GB/T191的规定。7.3 储运储运时，应防止日晒及350C以上高温，置于阴凉干燥处。运输时，注意轻放，防止破损。不得与有毒有害物质混装、混运。7.4 安全在使用说明书或包装标签上应注明毒性、防护措施等。7.5 保质期在本部分的储存条件下，质量保证期从生产日期算起，12个月内产品活抱率不低于标示值。4 NY/T 3282.3-2018 A.1 中文通用名称金龟子绿僵菌。A.2 拉丁文学名Metarhizium anisoLiae A.3 生物学分类地位附录A(

12、资料性附录)金龟子绿僵菌有效成分描述菌物界、子囊菌门Ascomycota、盘菌亚门Pezizomycotina、粪壳菌纲Sordariomycetes、肉座菌亚纲Hypocreomycetidae、肉座菌目Hypocreales、麦角菌科Clavicipitaceae、绿僵菌属Metarhizium、金龟子绿僵菌MetarhiziumanisopLiae。A.4 生物学特性A.4.1 菌落特征在1/4SDAY培养基上菌落初期白色，背面可见?炎黄色色素，后期产抱后呈暗绿色，分生抱子聚集成堆。菌株可以在SDAY上280C生长1周，直径可达3.5 cm。A.4.2 形态特征菌丝具分枝分隔，粗1.4m

13、2.1m。瓶梗型产抱细胞，大小幅度为(2.12.9)mX(7.1 7.5)m;从瓶梗顶端产生分生抱子链;抱子链连接点倾斜度小;分生抱子单细胞，长椭圆形至近柱状，两端钝圆形。分生抱子有时单生于菌丝分枝末端;分生于包子长度大于15m。A.4.3 核糖体基因分子鉴定结果通过菌株总DNA扩增、克隆转化、测定绿僵菌菌株的ITS1-5.8S rDNA-ITS2的特征序列(见图A.1)。金龟子绿僵菌菌株的ITS1-5.8S rDNA-ITS2目的基因序列全长为552bp.其中5端包含部分18SrRNA基因序列:149为部分18SrRNA基因序列。3端包含部分28S rRNA基因序列:520552为部分28S

14、rRNA基因序列。其余的则 为ITS区:50 195为ITS1区域全序列.196342为5.8SrRNA基因全序列.343519为ITS2区域的全序列。综合培养性状及形态特征以及ITS1-5.8-ITS2 rDNA分子克隆测序比对结果，鉴定该菌株为金龟子绿僵菌(MetarhiziumalSOliae)。TTTTrGCTTTAATTCAGCGGGTAGTCCTACCTGAJTCGAGGTCAACTrAAAAAGTTGGGGGTTTT TACGGCAGTGGACCGCGCCGGGCTCCTGTTGCGAGTGTTTTACTACTGCGCAGAGGAGGGCCACG GCGAGACCGCCAATCA

15、ATTTAAGGGACGGCTGTGCTGGAAAACCAGCCTCGCCGAJCCCCAACAC CAAGTCCACAGGGGACTTGAGGGGCGTAATGACGCTCGAACAGGCAJGCCCGCCAGAATACTGAC GGGCGCAATGTGCGTTCAAAGrTCGAJGAJTCACTGAAJTCTGCAAJTCACAJTACTTAJCGCAJT TCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGrCCGTTGTTGAAAGTTTTGrTCATTTTTTTT 5 NY/T 3282.3-2018 TAACCACTCAGAAGAJACTTAJTAAAAAATTC

16、AGAAGGTTTGGGTCCCCGGCGGGCGCGAAGTCC CGCCGAAGCAACAAJGAAAGGTAJAAJTCACAGGGGTTGGGAGTTGGAJAACTCGGTAAJGAJCCC TCCGCAGGTTCACTAAACGGAAACA 图A.l金龟子绿僵菌(Metarhiziumanisopliae)核糖体基因扩增序列A.5 有效成分主要存在形态分生抱子。A.6 生物活性杀虫。A.7 适宜生长条件最适培养基为萨氏培养基0/4SDAY);最适生长温度为280C。分生于包子及菌落形态见图A.2。图A.2金龟子绿僵菌分生于包子及菌落形态6 NY/T 3282.3-2018 附录B(

17、规范性附录)玻璃纸片萌芽抱子显微计数法B.1 方法提要在无菌操作条件下，将绿僵菌可湿性粉剂样品用吐温80溶液适当稀释后，均匀涂抹在玻璃纸片上;再放入1/4SDAY平板，在(25士1)OC下培养24h.取玻璃纸制片镜检计数萌芽与未萌芽的抱子总数，计算抱子萌芽百分率。以抱子萌芽长度大于抱子长度的一半视为萌芽。B.2 试剂和溶液吐温80。0.1%吐温80溶液:(吐温80:水)=1:1000。B.3 仪器及设备高速匀浆器:转速二兰孔10Oor旷/min光学显微镜:目镜物镜=400倍。亮线血球计数板:25 X 16。微量移液器:0.2 mLl.0 mL。手动计数器:19999o容量瓶:100mL。三角瓶

18、:250mLo B.4 测定步骤B.4.1 将萨氏培养基0/4SDAY)在无菌条件下倒人直径为9cm培养皿中(每皿约15mL).待其凝固后，放人大小为1cmX1 cm的灭菌玻璃纸片。B.4.2 将试样?昆合均匀后，称取约O.01 g(精确至O.001 g)试样2份，分别进行以下操作:a)取30mL吐温80配成约1.0X107个子包子/mL抱子悬浮液，在高速匀浆器中混合均匀，再用接种环蘸取配制好的于包子悬浮液均匀涂于3片1/4SDAY平板内的玻璃纸片上;b)在恒温箱内(25士1)OC培养12h24 h.取3片玻璃纸片放于载玻片上;c)用锥蓝染色液滴于玻璃纸上，约2min后盖上盖玻片;d)在光学显

19、微镜下观察并计数萌芽的抱子数与未萌芽的抱子数;e)计算其抱子萌芽百分率(以抱子萌芽长度大于抱子长度的一半视为萌芽);f)每次计数至少300个抱子.3次测定结果的平均值作为1份试样的测定结果。B.5 测定结果试样的活抱率W2按式(B.1)计算。W2=是X100.CB.1)式中:7 NY/T 3282.3-2018 W2一一试样的活抱率，单位为百分率c%);N1一一萌芽抱子数，单位为个;N2一一检查抱子总数，单位为个。B.6 允许差2次平行测定结果之差应不大于20%，取算术平均值作为测定结果。通过肉眼观察萌芽抱子的数量来计算单位可湿性粉剂样品中的活抱子数量。8 ON|的.ggHFZ中华人民共和国农业行业标准真菌微生物农药金龟子绿僵茵第3部分:金龟子绿僵菌可湿性粉荆NY/T 3282.3一2018等中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址)中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销关*兴开本880mmX1230mm 1/16 印张1字数20千字2018年11月第1版2018年11月北京第1次印刷书号16109 4645 定价25.00元关长版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3282.3-2018