WS 215-2008 流行性斑疹伤寒和地方性斑疹伤寒诊断标准(卫生).pdf

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1、ICS 11.020 c59 23216-2008 引TS中华人民共和国卫生行业标准ws 215-2008 代替ws215-2001 流行性和地方性斑殇伤寒诊断标准Diagnostic criteria for epidemic typhus and endemic typhus 2008-02-28发布2008-09-01实施f二zd中华人民共和国卫生部发布q垃3ws 215-2008 目。吕根据中华人民共和国传染病防治法制定本标准。本标准代替WS215-2001(流行性斑痊伤寒和地方性斑彦伤寒诊断标准及处理原则)，自本标准实施之日起，WS215-2001同时废止。本标准与WS2152001

2、相比，主要变化如下:标准名称改为流行性和地方性斑痊伤寒诊断标准);一删除治疗部分;本标准的附录A是规范性附录，附录B和附录C是资料性附录。本标准由卫生部传染病标准专业委员会提出。本标准由中华人民共和国卫生部批准。本标准起草单位:军事医学科学院微生物流行病研究所。本标准主要起草人:温博海、刘运喜、孙长俭、王锡乐、陈梅玲、牛东升。ws 215-2008 流行性和地方性斑殇伤寒诊断标准1 范围本标准规定了流行性和地方性斑彦伤寒的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对流行性和地方性斑彦伤寒的诊断、报告。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2.1 斑

3、螃伤寒typhus 由普氏立克次体CRickettsiarowazekii)和莫氏立克次体CRickettsiamooseri)所引起的感染，包括流行性和地方性斑痊伤寒以及复发性斑痊伤寒。2.2 流行性斑摩伤寒epidemic typhus 由普氏立克次体引起的一种急性传染病。该病的传播媒介为体虱，故该病又称虱传斑彦伤寒Clouse-borne typhus)。2.3 地方性斑磨伤寒endemic typhus 由莫氏立克次体所致的一种类似流行性斑彦伤寒的急性传染病，其传播媒介为鼠蚤(主要为印鼠客蚤，Xenopsyllacheopis)，所以它又被称为鼠型斑痊伤寒Cmurinetyphus)或

4、蚤传斑彦伤寒Cflea-borne typhus)。2.4 复发型斑密伤寒relapsing typhus 流行性斑彦伤寒治愈后，患者的单核-吞噬细胞系统中常有普氏立克次体的长期存活，当机体免疫力下降时可引起潜伏的普氏立克次体在体内大量繁殖，导致无虱漉性流行性斑痊伤寒发生(复发型斑彦伤寒，又称Brill-Zinsser病)。3 诊断依据3.1 流行性斑摩伤寒3.1.1 流行病学史多发生在冬、春季，患者身上或衣服上常有体虱存在。3.1.2 临床症状和体征3.1.2.1 急性持续性发热大多数患者体温在前驱期后2d3d内达到高峰，多为390C400C。热型多为稽留型，也有弛张型或不规则型。3.1.2

5、.2 皮摩大多数患者于发病后4d6d开始在腋下和两肋出现皮瘁，以后皮痊延及胸、腹、背部及四肢，以背部最为明显。初期皮彦为散在、略有突起、边缘不整，此痊鲜红但按之褪色。在发病的6d8d，皮彦最盛，为按血性皮彦，此时的皮痊形状小而圆、色红，中心呈暗紫色，按之不褪色。3.1.2.3 神经系统症状发病早期有剧烈头痛，随着病情的加重，患者的神经系统症状也加剧，可出现烦躁不安、语妄、嗜睡。少数患者出现四肢僵硬、颈项强直及脑膜剌激症状等。3.1.3 实验室检查3.1.3.1 检测普氏立克次体抗体l ws 215-2008 检测患者血清标本的普氏立克次体抗体，作流行性斑彦伤寒的血清学诊断。3.1.3.1.1

6、外斐反应CWeil-Felixreaction,A.1)外斐反应血清OXJ9菌株凝集效价大于1:160，并且随病程增长后其血清凝集效价4倍或4倍以上升高为斑彦伤寒现症感染抗体检测阳性。3.1.3.1.2 间接免疫荧光试验检测普氏立克次体抗体(见A.2)采用普氏立克次体己知抗原对患者血清作间接免疫荧光试验。间接免疫荧光试验的普氏立克次体血清抗体效价IgM二三1:40或IgG二三1:160，或两次血清标本的抗体效价提高4倍或4倍以上为斑痊伤寒现症感染抗体检测阳性。3.1.3.3 普氏立克次体分离有条件的实验室可采集是、3.2.1 流行病学史多发生在秋、冬青3.2.2.1 急性持鲤潜伏期为3.2.2

7、.2 皮摩皮痊出现的散到躯干，但是灿为暗红色的斑丘彤，3.2.3 实验室啊3.2.3.1 莫氏、3.2.3.3 莫氏立克次体分U有条件的实验室可采集山、4 诊断原则依据患者的临床表现、流行病学史和实验室检查的结果进行综合分析，病例确诊需要实验室检查证据。5诊断5.1 流行性斑摩伤寒5.1.1 疑似病例具备3.1.1和3.1.2.1。5.1.2 临床诊断病例符合下列一项可诊断:2 e 6 鉴别诊断流行性斑痊病、伤寒等鉴别，ws 215一20083 ws 215-2008 附录A(规范性附录)血清学检测与聚合酶链反应A.1 外斐反应变形杆菌X菌株与某些立克次体有血清学交叉抗原，可用变形杆菌X菌株的

8、菌体抗原与立克次体感染患者血清作菌体凝集试验，以检测血清中的某些立克次体抗体效价，用于某些立克次体感染的血清学诊断。变形杆菌OX19菌株O抗原与斑彦伤寒立克次体抗原有交叉，用它代替普氏立克次体和莫氏立克次体抗原做凝集反应，作斑彦伤寒的血清学诊断。A.1.1 试剂诊断用OX19、OXz和OXK三种变形杆菌菌液。A.1.2 操作步骤排列12mmX75mm试管三排，每排8个，各排第一管依次标明OX19、OX2和OXK。取15mmX100mm试管一支作倍比稀释血清用。加入生理盐水2.85mL，受检血清0.15mL，使血清为1:20稀释，分别加入每排第一管内，每管0.5mL。此时，血清稀释管中尚留1.5

9、mL，补加等量生理盐水使之成1:40稀释，再分别加入每排第二管内，每管0.5mL。同法将血清稀释管中血清用生理盐水稀释成1:80，分别加入到第三管中，如此反复将血清作倍比稀释直至第七管，第八管仅加等量生理盐水作对照。每排每管分别加OX19、OXz和OXK三种诊断菌液，每管0.5mL，此时每排各试管中血清的最终稀释倍数依次为1:401:2560，各排第八管为菌液对照。摇匀后将试管置3rc作用2h，然后将试管置40C过夜。A.1.3 结果判断将试管倾斜对准光线，完全凝集时可见大块白色凝集物沉于管底，上清半透明;阴性结果呈均匀的轻微浑浊;部分凝集时管底可见小块状凝集。尚能产生部分凝集反应的血清最高稀

10、释度，即为该血清的凝集效价。外斐反应血清OX19菌株凝集效价大于1:160，并且随后采集的血清标本的凝集效价有4倍或4倍以上升高为斑彦伤寒现症感染抗体检测阳性。该检测结果不能将流行性斑彦伤寒与地方性斑彦伤寒区分(见表A.l)。表A.1外斐反应结果判断疾病名称OX19 OXz OXK 流行性斑莎伤寒+十十十十地方性斑珍伤寒+十+十十落叽山斑点病+十十+十+十+恙虫病十十十Q热A.2 闰接免疫荧光检测普氏立克次体抗体/莫氏立克次体抗体用微量普氏立克次体和莫氏立克次体全菌菌体抗原点在抗原片上，用倍比稀释的待检血清与玻片上抗原反应，再用荧光素标记的抗抗体与结合在菌体抗原上的特异性抗体反应，最后用荧光显

11、微镜观察带荧光的复合物(立克次体-血清特异性抗体一荧光素标记的抗抗体)，测定血清中的相应立克次体抗体的效价。4 ws 215-2008 A.2.1 材料A.2.1.1 普氏立克次体和莫氏立克次体抗原片(10/12孔)。A.2.1.2 荧光素标记羊抗人IgG抗体或荧光素标记羊抗人IgM抗体。A.2.1.3 试剂A.2.1.3.1 磷酸盐缓冲液CPBS，0.01mol/L，pH7.的。A.2.1.3.2 伊文思蓝-PBS榕液:用PBSCO.01mol/L,pH7.4)配制0.002mol/L伊文思蓝溶液。A.2.2 方法A.2.2.1 用PBS从1:10开始对被检血清作系列倍比稀释。A.2.2.2

12、 将不同稀释度的血清依次加到抗原片孔内，每孔加5L，并设阳性、阴性血清对照。A.2.2.3 将加血清的抗原片放人湿盒，于3rc孵育60mincA.2.2.4 用PBS-吐温(含0.05%吐温20的PBS)浸洗抗原片2次，每次1min2min，吹干。A.2.2.5 用PBS稀释荧光素标记羊抗人IgG抗体或荧光素标记羊抗人IgM抗体(一般依据厂家提供的说明作工作浓度稀释)，每孔滴加5L荧光素标记的抗抗体。A.2.2.6 将抗原片置湿盒，于3rc孵育30mincA.2.2.7 用PBS吐温浸洗抗原片1min2min，吹干。A.2.2.8 用荧光显微镜观察结果。A.2.3 结果判定A.2.3.1 立克

13、次体菌体仍出现明显的特异性荧光时的血清最高稀释度，即为该份血清的相应抗体效价。A.2.3.2 间接免疫荧光试验的IgG效价注1:160或IgM二址40，或两次血清标本的抗体效价相差4倍或4倍以上为斑痊伤寒现症感染抗体检测阳性。A.2.3.3 同时做普氏立克次体与莫氏立克次体抗体检测，其中一种抗体效价明显高于另一种抗体效价(相差2倍或2倍以上)时，可以确诊为该抗体效价高的立克次体感染。A.3 聚合酶链反应(PCR)检测普氏立克次体依据普氏立克次体的gltA基因设计特异性引物做PCR，扩增普氏立克次体特异性的基因片段。该方法适用于快速检测血液、组织、体虱等不同标本中的普氏立克次体DNA。A.3.1

14、 引物CS-877:5-GGGGGCCTGCTCACGGCGG-3,CS-1273:5-CAT AACCAGTGT AAAGCTG-3 A.3.2 DNA模板疑为普氏立克次体感染的人/动物的DNA标本，DNA的提取选择有关方法/试剂盒进行。A.3.3 PCR反应物混合物每条引物为12.5pmol，dATP、dCTP、dGTP、dTTP分别为200mol/L，10 X PCR缓冲液2.5L，25mmol/L MgClz o.8L，Taq DNA多聚酶为1U，DNA标本1L2L，最后用灭菌去离子水补充反应容积至25L。上述诸液加人反应管后作瞬时离心，使液体沉至管底，然后在液面上加上10L石蜡油。A

15、.3.4 PCR循环参数95cC预变性180s;950C变性30s，500C退火30s，720C延伸60s，循环40次，最后720C延伸7min。A.3.5 凝胶电泳取PCR扩增产物10p.L在2%琼脂糖凝胶(含O.5g/mL澳化乙链)上电泳，在紫外灯下观察结果。A.3.6 结果判定本法扩增的普氏立克次体的基因片段为477bp。5 ws 215-2008 A.3.7 注意事项A.3.7.1 PCR为高敏感方法，特别要注意防止交叉污染;标本的处理、DNA提取、反应物的加入需要分区进行。A.3.7.2 移液器的塑料吸头内需要加防污染塞以防标本对移液枪的污染和移液器对标本的污染。A.3.7.3 应同

16、时设立阳性、阴性等质量控制PCR对照，只有所有对照结果正常显现时，检验标本的结果才能确立。A.4 聚合酶链反应(PCR)检测莫氏立克次体A.4.1 引物25mmol/L MgC12fJ.应容积至25L。上述诸液加6 ws 215-2008 附录B(资料性附录)普氏立克次体和莫氏立克次体的分离与鉴定B.1 原理实验感染动物组织印片或组织液涂片作染色镜检发现立克次体样菌体，并且用普氏立克次体/莫氏立克次体免疫血清与菌体作免疫荧光染鱼4结嚷南梧需辅顿革验动物分离到斑痊伤寒病原体。B.2 分离鉴定B.2.1 材料B.2.1.1 标本在患病或感染B.2.1.2 实验动物300g400g的正常雄性豚B.2

17、.2 方法B.2.2.1 先用标本接种2只豚鼠，每只腹腔洼前亏霄芒芒3mL标本。B.2.2.2 接种后每天观察豚鼠发病情况，在每天同一时间测量豚鼠直肠体温。立即将血液接种豚非抗凝血，除去血清后B.2.2.3 大约在1周左右，豚鼠明显发热C390C)时，每只豚鼠取2mL心脏血，分别用lmL血接种另外2只正常豚鼠。剩余的血作PCR，检测普氏立克次体/莫氏立克次体DNA。B.2.2.4 在豚鼠发热极期或退热初期解剖豚鼠，取血、脾脏、肾、脑等观察病变，当出现阴囊红肿(阴囊反应)时，用无菌手术取出1只辜丸做黯膜刮屑涂片，染色镜检浆膜细胞有元立克次体。B.2.2.5 组织涂片或印片做Gimnez染色或用普

18、氏立克次体/莫氏立克次体免疫血清作免疫荧光染色，染色后用光学显微镜或荧光显微镜镜检立克次体。B.2.2.6 从脾脏或血液标本中提取DNA做PCR检测普氏立克次体/莫氏立克次体DNA。7 ws 215-2008 B.2.2.7 用间接免疫荧光法检测豚鼠血清的普氏立克次体/莫氏立克次体抗体。B.2.3 结果判定与处理B.2.3.1 豚鼠感染普氏立克次体后，一般经6d9d的潜伏期后出现典型的高热曲线，高热可持续5d7d。普氏立克次体感染的豚鼠一般不出现阴囊红肿(阴囊反应)。B.2.3.2 豚鼠感染莫氏立克次体后，一般经3d7d的潜伏期后高热数日，并随着高热的开始，出现阴囊肿大、红润、发炎(阴囊反应)

19、，辜丸粘连和鞠膜发炎，黯膜刮屑涂片检查有充满立克次体的浆膜细胞(莫氏细胞)，莫氏细胞是莫氏立克次体感染的典型病变。B.2.3.3 用普氏立克次体/莫氏立克次体免疫血清做免疫荧光检测脾脏等脏器的涂片，发现荧光染色阳性的立克次体样菌体可确认分离到普氏立克次体/莫氏立克次体，但不能将两者区分。B.2.3.4 用普氏立克次体和莫氏立克次体抗原作间接免疫荧光分析感染豚提血清抗体，抗体效价更高那种立克次体即为该次感染的病原体。另外用种特异性PCR分析，以及有关的基因序列分析可对分离的菌株作出种或株水平的鉴定。B.3 吉姆尼茨(Gimn四)和吉姆萨(Giemsa)染色B.3.1 吉姆尼茨(Gimnez)染色

20、B.3.1.1 染色原液配制混合100mL的10%碱性复红酒精溶液ClOg碱性复红溶于100mL95%乙醇)，250mL的4%石炭酸溶液ClOg的石炭酸加人250mL蒸馆水)及650mL的蒸馆水。临用前置370C48ho B.3.1.2 染色液配制a)复红染液:4mL原液加10mL的O.lmol/L磷酸盐缓冲液CpH7.5,0.2mol/L NaHzP04 3.5mL,O.2mol/L Na2 HP04 15.5mL，以及蒸馆水19mL混合)，立即过滤。此染液配制好后保留理想染色效果约48h。如时间太久则会出现沉淀，需重新用原液配制。b)0.8%孔雀绿水溶液。B.3.1.3 染色步骤a)标本火

21、焰固定;b)用复红染液染3min5min;c)水洗;d)加孔雀绿染液复染lmi口;e)水洗，如果涂片不显绿色，可再加孔雀绿液染数秒钟，水洗，待干，镜检。B.3.1.4 结果观察显微镜下立克次体为红色，背景呈绿色。B.3.2 吉姆萨(Giemsa)染色B.3.2.1 染色原液将Giemsa结晶19、甲醇100mL、中性甘油30mLt昆合，在600C水浴中不断搅拌约出，待完全溶解后过滤。B.3.2.2 染色液取原液1份加4份甲醇混合。B.3.2.3 染色步骤干燥标本涂片(无需固定)加染液染2min，然后加等量蒸馆水吹匀后继续染15min;或将染色原液作10倍稀释盛于染色缸内，标本经甲醇固定后置于缸

22、中染lh2h。B.3.2.4 结果观察显微镜下立克次体呈紫红色。8 ws 215-2008 附录C(资料性附录)流行性斑摩伤寒与地方性斑菇伤寒的鉴别诊断C.l 流行性斑痊伤寒与地方性斑摩伤寒地方性斑痊伤寒的临床表现比流行性斑痊伤寒轻，另外它们的传播媒介不同:流行性斑彦伤寒的传播媒介为虱，而地方性斑彦伤寒为蚤。虽然它们有血清学交叉，但是患者血清对同源抗原的抗体的效价明显高于异源抗原的抗体效价。C.2 恙虫病scrubtyphus 由恙虫病东方体COrientia tsutsugamushi)引起的恙虫病也可出现与斑彦伤寒相似的皮磨，但该病传播媒介为恙虫前，并可出现焦癫及溃痛。该病多为散发，多流行

23、于亚洲和大洋州。C.3 斑点热spottedfever 基于皮瘁，斑痊伤寒还需要与斑点热群立克次体Cspottedfever group rickettsiae)引起的斑点热相鉴别。斑点热皮痊从腰、躁、前臂及手足心开始出现浅红色和边缘不整的皮痊，以后皮痊延至腋窝、躯干及颈、面部，皮痊转为深红色斑丘痊。斑点热的传播媒介是蝉，患者多有蝉叮咬史，该病多在温暖的蝉活动季节发生。C.4 回归热relapsingfever 虱传回归热的传播媒介及发病季节与流行性斑痊伤寒相同，但回归热发热呈回归型，患者有昨肠肌剧痛，并有肝、脾肿大和黄瘟。回归热螺旋体CBorreliarecurrent为虱传回归热的病原体。

24、C.5 钩端螺旋体病leptospirosis该病多发生在夏、秋季，患者多与疫水密切接触，起病急，常有黄瘟和出血，有明显的肺肠肌压痛。用人工培养基可从血、尿和脑脊液中分离到钩端螺旋体。C.6 伤寒typhoid该病起病缓，且头痛轻微，体温为逐渐升高并有相对缓脉。患者的皮痊出现较晚而且稀少，皮彦呈淡红色。用人工培养基可从患者的血、尿、粪便及皮痊中分离出伤寒杆菌。9 ws 215-2008 参考文献1.俞树荣.Q热的病原与防治.重庆:科学技术文献出版社重庆分社，1990:125-126.2.魏曦.医用立克次体学.上海:上海科学技术出版社，1984:109-146,191-213,150-174.3

25、.Roux V,Raoult D.Body lice as tools for diagnosis and surveilance of reemerging diseases.J Clin Microbiol,1999,37:596-599.4.Raoult 0,et al.A flea-associated Rickettsia pathogenic for humans.Emerging Infectious Diseases,2001,7(1):73-81.5.冯仁丰.实用医学检验学.上海:上海科学技术出版社，1996:873-874.10 CON-mFNm民华人民共和卫生行业标准流行

26、性和地方性斑磨伤寒诊断标准WS 215一2008国中印张12008年8月第1版第1次印刷每出版发行:人民卫生出版社(中继线010-67616688)地址:北京市丰台区方庄芳群园3区3号楼邮编100078同址http:/E-mail: 购书热线010-67605754010-65264830 印刷:北京新丰印刷厂经销:新华书店开本880X1230字数29千字版次2008年8月第1版书号14117 205 定价9.00元版权所有，侵权必究，打击盗版举报电话010-87613394(凡属印装质量问题请与本社销售部联系退换)1/16.mmmmmmmmmmno mmmm 刷刷刷刷刷刷刷刷2HHHHHHHRU HHHHHHHHHHHAl 剧剧剧剧剧剧剧剧剧阳呵，川川川川川川川CU川川川川W