NY∕T 3625-2020 稻曲病抗性鉴定技术规程(农业).pdf

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1、ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3625-2020 稻曲病抗性鉴定技术规程Technical code of practice for identification of rice resistance to rice false smut Ustilaginoidea virens(Cooke)Takahashi 2020-07-27发布2020-11-01实施J九中华人民共和国农业农村部发布重b创豆叫，必-飞1苦hE、二本标准按照G/T1.1-2009给.I/J的规则起草。/本标准由农业农村部种指!l管理司提LU并归口。rA，本标准起牌位中国

2、水稻研究所、全国农业技术如管局再通l本标准主要起草人.黄1吨文、王玲、刘连盟、草荣、仰强朱智伟。NY/T 3625-2020 I 稻曲病抗性鉴定技术规程范围本标稍一规定了水稻品种、材料对稻1111病抗性的鉴定方法和l评价方法。本标准适用于水稻品种、材料对稻1111病的抗性鉴定和l抗性评价。2 规范性引用文件下列文件对于本文凡是不注:日期的引用文件3 3.1 GB 4285 GB 4404.1 GB/T 6682 GB/T 8321(NY/T 496 NY/T 511 下平l稻曲病由在CNakata)E 危害谷粒。受期2黄色，后至i翠绿色，硬质的菌核。3.2 分离物isolate 从发病部位通3

3、.3 剑叶叶枕:f1ag leaf pulvinus NY/T 3625-2020 日期的版本适用于本文钊。VlrellS 主要.发病初现淡黄色、产生黑色、扁平、粒。水稻剑111从倒二11-/-的叶I!j!j中书11:r后，剑III叶枕与倒二11.1-11.1-枕之间的距离。:&1J11.1-11-/-枕高于倒二日1-1I1-;fX时，为正11-/-枕YE;ftII-/-1叶枕低于倒二11.1-11.1-枕时，为负叫一枕距.3.4 花粉内容充实期pollen filling stage 花粉母封UJ血减数分裂完成后，四分体分散并随HII变成小球形的花粉粒，花布外壳逐渐形成，体积继续增大，出现花

4、粉发芽孔，花粉内容逐渐充实，直到内容物充满之前，为花粉内容充实剔。此时内外秤纵向1l主接近停止，被向则迅速增大。剧lE志和It草草迅速增长，位头上依次出现羽状突起，而颖片退化。4 试剂与材料本标准所用试J在未加说明时均采用分析纯试开IJ.实验室用水应符合GB/T6682中规定的三级水NY/T 3625-2020 要求。4.1 PSA培养基称驭200g马铃薯，洗净去皮切碎，力u人1000mL水，煮沸20mn，纱布过滤，补水至1000mL.再加l入煎粉20g和琼IJI:20 g.搅抖均匀，向压灭ir021C.20 min)。4.2 PSB培养基称取200g马铃薯，洗J辛苦去皮切碎，力u人1000

5、mL 水，煮沸20min，纱布过滤，补水至1000mL.IJfI入股糖20g.搅拌均匀，高压灭菌021C.20 min)。4.3 WA培养基琼脂20g.fFl水定容至1000 mL.高压灭菌(l21C.20min).5 仪器设备5.1 恒温培养箱温度范闹。0C-50C.温度波动，士1C。5.2 光学显微镜H镜。1OX;物锐，10X、40X。5.3 超净工作台洁净等级，100级二，0.5m.平均风速，0.25m/s-O.6 m/s.5.4 高压灭菌锅温度范|军1，0C-135C.灭菌时间范围，4min-120 min.最高工作压力O.22 MPa-O.25 MPa。5.5 振荡摇床温度范围，0C

6、-50C.I!It度波动士1C.振动频率，0r/min-300 r/min.振动幅度，20mm.5.6 电子天平.感盘0.01g.5.7 组织捣li丰机.最高转数20000 r/min.5.8 医用注射都10mL.6 接种体制备6.1 病原菌分商、纯化与保存6.1.1 病原菌分离以常规织织分离法从稻1111球上获得分t物。在超净工作台上切|徐稻1111球外层组织，将最内层的I包部分切成约O.2 cm X o.3 cm的病组织块，先用75%乙醉浴液消毒15s.再用灭菌的三级水冲洗3次，元菌IJg纸吸干后A凶于PS八平板上.恒1m，培养箱中2SC培养.6.1.2 病原菌纯化分离物培养7d以后，从生

7、伏的向色菌落边缘挑取少量菌丝转入新的PSB培养基上。在2SC下.150r/min，振荡培养5d-7 d后，用灭i水配成每毫于|含1X 10个分生于包子的悬浮液。l吸取100L悬浮液均匀涂布于WA培养基上，在超净工作俞中I次干。28C条件下培养至分I.抱子萌发，在光学显微镜下锐检，挑萌发的单个分生袍子置于新的PSA培养基上，28C恒1日培养，并保存备用。6.1.3 病原菌保存将待保存的菌株接利在PSA培养基上，周罔摆放灭菌的泌纸片.28C恒温培养，待菌丝l王过滤纸片，用辍子将滤纸片揭下，装入灭菌的硫阪纸袋，置于装有硅l庶的容器中干燥，再将硫阪纸袋密封，并装入灭ir(J牛皮纸袋，于一20C低1日保

8、存。6 2 病原菌鉴定依据病原菌形态和部分基因片，如l对接种用的菌株进行鉴定，见附录A.6.3 接种体制备NY/T 3625-2020 6.3.1 接种体选择接利应采用当地致病力较强的稻1111病菌株。6.3.2 接种体繁殖将稻山l病菌株移植到UPS八培养蓓的正中央，置于恒温培养箱280Ctg养10do在无菌条件下用直径5 mm的灭E菊打孔器，向菌落边缘切取菌饼3块，接种于100mL的PSB液体培养基中。在黑H青条件下，280C.150 r/min.振荡培养5d-7 d后，获得大量;在i丝和l静坐分生抱子.将振荡培养液倒人生H织捣碎机，高速打碎I革I丝，形成i丝片段与部壁分t泡子的混合液，用灭

9、菌的PSB培养基调整每毫升含5X 10个分生于包子，作为接种物以备用。7 稻曲病抗性鉴定71 鉴定窒鉴定室应具备7.2 7.2 1 种子质量鉴定72 3 使用应符合GB4285、前后避免施用任何药剂。7.3 接种7.3.1 接种时期接丰lfI才知j为水稻剑叶叶枕距2cm接利。7.3.2 接种方法环境。利。每份鉴人垫有两层的利子t/l于.在180C-117的要求.农药不使用杀菌剂，接种内容充实期).在16，00-18，00采用注射接种方法。将于包子:i丝混合液注射入秘苞中郁，直至秘苞中充满菌液，并从秘尖溢出为宜。每份鉴定材料蓝复3次，每一重复接币l15栋，每株1个穗子，且按手l稻穗生育进程基本一

10、致。73.3 接种后管理接利1后将水将置于220C-250C的可控温室中，相对湿度95%以上.12h/12 h光i暗交替条件下培养3 d后，投于汩l度为250C280C、相对湿度90%的可控lWl室中继续培养。74 病情调查74.1 调查时间水稻蛤热WJ转:在熟Jlil。3 NY/T 3625-2020 7.4.2 调查与记载对每份鉴定材料病害发生悄况进行调查，记录发病战茧的10株单秘病粒数，作为鉴定材料的病悄级别，原始数据记载参见附录C的表C.1.7.4.3 稻曲病病情级别划分稻曲病病悄级别及其相对应的症状捎述见表1.表1稻曲病病情级别的划分病悄级别单视i病粒数o 视;子t元病粒i 每秘病桩

11、数l个3 每穗捕粒数2个-个5 每穗M位数5个-8个7 每础病较激9个-15个9 每础1iq粒敛16个7.5 病情记载根据病情症状描述，对每个接种稻秘进行调查，记载单株病情级别，并计算每份鉴定材料的病情指数(DJ)。病情指数投式(l)计算.):Bi X Bd)DI=二丁一X100.(l)式中:DI 病情指数，Bi一一各级严重度病穗数，单位为穗，Bd一一各级严豆度代表值;M 调查总秘数，单位为穗，Md 严重度缺高级代表值(此处为9)。7.6 抗病性评价7.6.1 抗病性评价标准依据鉴定材料3次重复的病俯指数(Dl)的平均值确定其抗病性水平，划分标1ft见表2.表2水稻对稻曲病抗性的评价标准f丙悄

12、指数(Dl)抗性评价0 1 0 免疫(1)0.0015.0 阳也(I-IR)5.00 1;10.0!iu，丙(R)10.00/运20.0。|20.001.二40.0II(MS)10.001,;60.0 h占1时(S)60.00 1,;100.0 川感(HS)7.6.2 鉴定有效性判别当设置的感病对!fl品利病情指数(DJ)达到140以上时，步1)定该批次稻1111病抗性鉴定有效。7.6.3 重复鉴定初次鉴定中表现为抗、中抗、中感的材料，需用相同的病原菌对其抗病性进行至少1年的重复鉴定。当年度间或批次问鉴定结果不一致时，通常以最高病悄指数为准。7.7 抗性评价结果抗性评价结果记载参见表C.2.并

13、对鉴定结果加以分析，原始资料应保存备考察验证。4 B 鉴定后材料的处理剩余接种体带回实验室灭J处理。将鉴定后的病株无害化处理。NY/T 3625-2020 5 NY/T 3625-2020 Al 学名和形态描述A 1 1 学名稻rllJIC5)癌座菌I=iCTu Lagilloide.virens(TCCTCCGCTTA action buffer 2.5L(Taq DNA聚合酶O.2 3 min;94C变性305，将PCR扩增产物用0.8%(Escherichia co!i)J-l5 标ll;商株序列作为参考，在MEGA4.。所l商株分类地位。A.2 稻曲病田间典型症状附录A(规范性附录)稻

14、曲病病原菌、丝于包纲(Hyphomycc-)稻绿核Ustim，病原菌，直径2.0 由新生时的子座表丽而ITS4 下10XPCRrc 各1L，1U 反应条件，94C预变性10 min，4C保存。-T载体，并转入大肠杆菌股序列比对分析。以稻rUr病菌的稻由病主要危害谷粒，在水稻f/fJK乳w，J剖开始显症。受害病粒菌丝在谷粒内形成块状，逐渐膨大，形成比正常谷粒大3俯4倍的病谷。发病初期，稻谷颖壳缝合处L1J现米粒大小乳l气色薄膜包装的i块。随着病有L变大，乳白色包膜破裂呈现1炎黄色、黄色，后至墨绿色，最后袍子座表面龟裂，?放出有毒的黄色、墨绿色粉状物。础子座表面可产生黑色、扁平、硬质的菌核。每穗上

15、的病谷(稻rllr球)少则I粒2粒，多的可达40粒50粒，甚至上百粒。6 附录B(规范性附录)鉴别品种NY!T 3625-2020 5个鉴别品种分别为.欣荣优华(和h型杂交稻，抗病)、社rr粮!88(梗型常规稻，抗病)、镇稻14号(权型常规稻，中抗)、而优9号(串h和!杂交稻，:!峦)平11部11况和1117号(和h型常规稻，高感)。7 NY/T 3625-2020 见表C.10 编号l插手l日m，3撞I生了JWj，5.调查生育JV!.鉴定人年月日附录C(资料性附录)水稻对稻曲病抗性鉴定数据记载表C2 水稻抗稻曲病鉴定抗性评价记载表见表C.20 表C.2水稻抗稻曲病鉴定抗性评价记载表编号品种名

16、称重复区号捕悄指数11 m I H 111 8 巳上10平均剂指抗性评价编号1.)11利，E IWJ 3按利1泊株编AJae鉴定人年月品种名称日表C.2(续)重复区号病悄J肯放H 田I n IIT n IIT H 111 2援种生育WJ4调查生育!j，SL核人年月NY/T 3625-2020 平均病指抗性评价日9 ONON-盯NU的HFZ兴中国农业IJJ版 社w版(北且市朝阳区麦子J;s街18号楼)(邮政编码100125网划)北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书脱经销部拎印张l字数20千字2020年10月北京第1次印刷奇峰开本880mmX1230mm 1/16 2020年10月第I版书号16109.8178 定价，24.00元奇峰版权专有侵权.、究举报电话(010)59194261 NY/T 3625一2020