NY∕T 3065-2016 西瓜抗南方根结线虫室内鉴定技术规程(农业).pdf

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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3065一2016西瓜抗南方根结线虫室内鉴定技术规程Technical code for evaluation on watermelon resistance against southern root-knot nematode in greenhouse 2016斗2-23发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布目。吕本标准按照GBjT1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业部种子管理局提出并归口。本标准起草单位:中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本标准主要起草人:那振川、杨宇红、谢丙炎、凌键、陈国华。

2、NYj T 3065-2016 I NY/T 3065-2016 西瓜抗南方根结线虫室内鉴定技术规程范围本标准规定了西瓜抗南方根结线虫的室内抗性鉴定方法及抗性评价方法。本标准适用于西瓜(Citrulluslanatus)品种及材料对南方根结线虫(Meloidogynei盯ogmt)的室内抗性鉴定及评价。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 南方根结线虫Meloidogyne incognita 属于垫刃目异皮线虫科根结线虫属南方根结线虫种，二龄幼虫呈蠕虫形，雌成虫呈梨形体，雄虫呈线性，卵呈长椭圆形，为植物体内专性寄生线虫。侵染西瓜根系引起根系肿大畸形，形成大小不等瘤状根结，地上部植

3、株矮小黄化，开花迟、结瓜小、易早衰(参见A.l)。2.2 南方根结线虫生理小种Meloidogyne incognita race 是指南方根结线虫种内在形态上元差别，但在植物的不同品种上具有显著致病性差异的群体，共包含4个生理小种，分别为生理小种1、生理小种2、生理小种3、生理小种4，需要采用一套鉴别寄主植物进行区分(参见A.2)。2.3 南方根结线虫鉴别寄主Meloidogyneincognita differential host 用于鉴定和区分南方根结线虫4个生理小种的一套植物材料，包括烟草、棉花、辣椒、西瓜、花生、番茄6种植物(参见A.2)。3 抗性鉴定方法3.1 试剂、材料及仪器设

4、备3.1.1 试剂浓度0.5%次氯酸铀溶液。将10mL 5.0%的次氯酸铀溶液(游离碱含量)加入在90mL灭菌水中，海合均匀。3.1.2 基质将草炭、蛙石和细沙按体积2:1:1混合均匀，于(121士l)OC湿热灭菌30min，或是直接购买商品化基质。3.1.3 仪器设备显微镜:放大倍率4X100X。高压灭菌锅:温度范围104oC 1350C，时间范围:4min120 min，工作压力范围:0.22 MPaO.25 MPa。筛网:规格为100目200目的筛网。3.2 室内抗性鉴定3.2.1 西瓜育苗1 NY/T 3065-2016 西瓜种子用0.5%次氯酸铀消毒10min.用灭菌水冲洗干净，去掉

5、次氯酸铀残留。在250C280C下避光催芽，当种子露白时播种于育苗钵(9cm X 9 cm X 12 cm).每钵一株，每钵约150g基质。在温度250C280C、湿度70%80%条件下进行育苗，当西瓜幼苗长到2片真叶期时用于接种鉴定。3.2.2 南方根结线虫接种体制备将南方根结线虫卵块用0.5%次氯酸铀消毒1min2 min.然后用灭菌水冲洗干净.转移到筛网上，加入灭菌水，以水面刚好没过筛网而不淹没卵块为宜。在250C280C下避光孵化2d3 d.然后收集2龄幼虫，并用将2龄幼虫采用无菌水配制成悬浮液，通过显微镜检测线虫浓度，调整到1000条/mL用于接种鉴定(参见A.3)。3.2.3 接种

6、在西瓜苗2片真叶期接种南g.ti种时将龄药雪-.塑注入根际土壤中，每株接在接种后(42士根系区域的比例，高感根结线虫的西瓜理。种2000条2龄幼虫。材料为对照。、，J-i/飞.式中:2一各病情5 一各病情级另|一一各病情级别病株数，N一一调查总株数，单位为株;S 一一最高病情级别数值。3.2.5 鉴定材料处理鉴定完毕后将西瓜植株、残体及土壤基质集中进行无害化处理。4 抗性评价4.1 鉴定有效性判别当高感对照材料的病情指数大于或等于60(DJ二三60)时，该批次抗性鉴定判定为有效。4.2 抗性评价标准依据鉴定材料3次重复的病情指数平均值确定其抗、感水平，划分标准见表2。2 NY/T 3065-2

7、016 表2西瓜对南方根结线虫病抗性的评价标准病情指数(DJ)抗性评价4.3 抗性评价报告依据西瓜材料3次的抗性水平，对鉴定材料进行抗病性评价，写出3 NY/T 3065-2016 A.1 学名和形态描述A.1.1 学名附录A(资料性附录)南方根结线虫南方根结线虫MeloidogYl1eil1cogl1ita(Kofoid and White)Chitwood。A.1.2 形态描述南方根结线虫幼虫呈细长蠕虫状，体长340m460m，体宽13m15mo雌雄异形，雌成虫梨形，埋藏于寄主组织内，大小(4401300)mX(325700)m。食道垫刃型，中食道球发达。会阴花纹背弓高，呈方形，侧线明显，

8、平滑至波浪状，线纹细至粗状，有时呈锯齿状，尾端常具轮纹。雄成虫线状，尾端稍圆，大小(7001 900)mX(3036)m;卵长椭圆形，大小约83mX38m。G 圈A.l南方根结线虫(Meloidogyneincognita)J帷虫会.花纹形态(A-H)墨线图4 NY/T 3065-2016 A.2 生理小种A.2.1 采用的鉴别寄主通用的鉴别寄主为6种植物:烟草CNicotiunatabacum cv.NC 95)、棉花CGossypiumhirsutum cv.Deltapine16)、辣椒CC知icumfrutescens cv.California Wonder)、西瓜CCilrullu

9、slanatus cv.Charles-ton Gray)、花生CArachishyogaea cv.Florunner)、番茄CSolanumlycopersicum cv.Rutgers)。A.2.2 生理小种鉴定南方根结线虫分离后.根据在鉴别寄主形成的根结数目确定是否为亲和反应，以特定的亲和反应组合划分生理小种(表A.l)。表A.l南方根结线虫生理小种的鉴定鉴别寄主生理小种烟草棉花辣椒西瓜花生番茄十+2+3+十4+注1:接种后40d-60 d调查，每株根系的根结数目O个-2个为不亲和，用一表示;根结数目3个或3个以上为亲和，用.，+表示。注2:生理小种按植物病原线虫学第14章.线虫接种和

10、抗性鉴定技术气刘维志主编，2000年，中国农业出版社)的分类法划分。A.3 南方根结线虫的分离及保存A.3.1 分离采集感染南方根结线虫的病株.直接挑取根结上的卵块。单卵块直接接种在感病寄主根部进行培养，在250C280C、土壤相对湿度70%80%条件下培养40d60 d，收集扩繁的卵块，采用0.5%次氯酸铀榕液对卵块进行浸泡消毒，轻轻震荡1min，弃液体，用灭菌水冲洗卵块3次去掉次氯酸铀残留。将干净的卵块转移到100目细筛网上，置于培养皿，以水面没过筛网而不淹没卵块为直。在250C280C 下避光孵化2d3 d，然后收集筛网2龄幼虫，经形态、学或生物学鉴定为南方根结线虫Meloidogyne

11、incognita CKofoid and White)Chitwood，确定分离成功.可用于接种鉴定。A.3.2 繁殖将经过鉴定的南方根结线虫接种在高感寄主植物的根部，在250C280C、土壤相对湿度70%80%条件下培养40d60 d。接种前从寄主植物根系上挑取卵块孵化2龄幼虫制备接种体，方法同3.2.2步骤。A.3.3 保存采用活体保存方法，将南方根结线虫接种在高感寄主植物的根部，在250C280C、土壤相对湿度70%80%条件下培养，并且每60d重新进行一次线虫分离、收集及接种，保障南方根结线虫的活性和数量。5 NY/T 3065-2016 附录B(资料性附录)西瓜抗南方根结线虫病鉴定结果记录西瓜抗南方根结线虫病鉴定结果记录见表B.1o表B.l西瓜抗南方根结线虫病鉴定结果记录品种/材料重复病情级别病情平均抗性编号名称来源区号O 2 3 4 3 指数病情指数评价对照H 山2 西瓜材料H 皿播种日期接种日期接种生育期南方根结线虫种类编号生理小种类型调查日期记录人地点6