NY∕T 3693-2020 百合枯萎病抗性鉴定技术规程(农业).pdf

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1、 ICS 65.020.01 B 15 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3693-2020 百合枯萎病抗性鉴定技术规程Technical code of practice for identification of lily resistance to fusarium wilt 2020-08-26发布2021一01-01实施发布/T 3693-2020 本标准按照GB/T1.本标准自本标准起草单位云南省农胁品卉吨脚赏园艺工程问究中心、农业农叫卉产品质量监督检验测试中心(昆明)、云南省花卉育手F重点实验室、云南省花卉工程技术研究中心、云南省花卉标准化技术委员会、昆明市花卉遗传改良重

2、点实验室、云南云科花卉有限公司。本标准主要起草人张艺萍、杨秀梅、瞿紫萍、王继华、王丽花、张丽芳、苏艳、许凤、周旭红、邹凌、赵阿香、马璐琳。I/T 3693-2020 百合枯萎病抗性鉴定技术规程1 范围本标准规定了百合枯萎病抗性鉴定的试剂与耗材、仪器设备、枯萎病菌接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价和鉴定材料处理。本标准适用于百合(Liliumspp 2 规范性引用文件4 仪器设备5 5.1 病原物分离5.1 1 病样采集参照附录A，田入4C冰箱保存备用。5.1 2 病样处理的室内鉴定与抗性评价。，补IJO蒸馆水至，放入封口袋密封，登记编号后放取病株病健组织交界部位，用解剖刀切成1cm

3、长的茎段，或取百合带病种球，于病健组织交界部位切取小块鳞茎(0.5cmXO.5 cm)，自来水清洗干净后用75%酒精浸2s-3 s，再用2%次氯酸例溶液浸泡3min,取出用灭菌水清洗3次。5.13 病原分离在超净工作台内，将消毒好的茎段或小块鳞茎接种至PSA平板培养基，每培养皿接3块-4块，写明编号后用保鲜膜封好，放至(25:I:2)C培养箱中培养5d-7 d,5.14 分离物鉴定及纯化分离物鉴定参见附录A。确认为尖抱镰刀菌百合专化型(F.anumoxysporutf.sp.Lilii)后，采用单抱分离法进行分离物纯化，经科赫(Koch)法则验证后，将经过纯化的百合枯萎病致病菌接种于PSA斜N

4、Y/T 3693-2020 面培养基上，在(25:1:2)OC的恒温培养箱中培养7d，置于40C80C冰箱内保存备用。5.2 接种体繁殖和保存5.2 1 接种体的繁殖将保存的百合枯萎病菌置于250CPSA平板培养基上培养3d活化后，接种于盛有PS培养液的锥形瓶中，置于(25土2)OC摇床上，以120r/min振荡培养3d5 dO将培养液经两层医用纱布过滤即得以小型袍子为主的袍子悬浮液，然后用蒸馆水稀释滤液至所需接种浓度。5.22 接种体保存常用保存方法为将百合枯萎病菌接种于PSA斜面培养基上，在(25土2)OC的恒温培养箱中培养7d,置于40C80C冰箱内保存。6 室内抗性鉴定6.1 鉴定室人

5、工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。6.2 鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一次重复10株苗或是20片鳞片。6.3 鉴定对照材料设高抗百合品种为抗病对照品种，高感百合品种为感病对照品种，同时设置空白对照。6 4 鉴定材料准备6.4.1 采用百合组培生根苗囚将百合组培生根苗移栽至穴盘中炼菌，炼菌基质为泥炭:珍珠岩=21(体积比)，经高温蒸汽灭茵(1340C,30 min)。在温室或塑料大棚内炼菌，设施内温度白天为200C260C，夜晚为150C200C。所有幼苗应生长健壮、一致，每株幼苗有8片以上展开叶。6.4 2 采用百

6、合种球鳞片。将不同系列正常可开花的百合种球由基部小心剥离，去除外层鳞片，将中层鳞片置于1%NaCIO溶液中消毒10min，在自来水下冲洗干净后置于滤纸上晾干待用。6.5 接种6.5.1 接种时期缓苗后正常生长的幼苗和消毒晾干后的鳞片。6.5.2 接种浓度接种体悬浮液的分生袍子数为(1L5)XlO个/mLo6 5.3 接种方法6.5.3.1 百合组培生根苗采用灌根接种法。用灭菌注射器吸取接种体悬浮液注射至百合植株茎基部，每株注射2mL。接种后用塑料薄膜覆盖植株，保湿48 h。6.5.3.2 百合(种球)鳞片采用土壤接种法。用接种针挑取小块保存的接种体菌丝接种于马铃薯煎糖琼JJ旨培养基(PSA)上

7、，待菌丝长满平板后用打孔器切取5块直径为8mm的菌块，接种至灭菌的100mL燕麦基质泥炭混合物中，燕麦:泥炭=1:5(W/W)0(25土2)OC培养14d后，将菌土混合物充分压碎，按l%(V/V)的比例加入灭菌基质泥炭中，混匀，(25:1:2)OC培养14d，使菌落稳定后，将百合鳞片包埋于含有菌土的基质中;或将鳞片抨插到基质中，注意基部朝下，插入深度为鳞片的1/2，间距3cm。6.5.3.3 空白对照是采用无菌水代替袍子悬浮液进行接种。6.5 4 接种后管理6.5.4.1 接种后将植株置于鉴定室内，每天光照14h，强度为70Em-气，保持植株正常生长的土壤湿度，即60%70%，接种期间鉴定室温

8、度控制在(25土2)OC范围内。6 5.4.2 将接种百合鳞片的花盆置于鉴定室内，60%70%相对湿度，180C条件下培养。7 病情调查7.1 调查时间NY/T 3693-2020 百合组培生根苗接种后10d15 d调查病情，百合鳞片则是60 d后调查病情，根据此期间感病对照品种病级扩展到感病病级的时间，可将调查病情的时间作适当调整。72 病情级别划分幼苗和鳞片病情级别及相应的症状描述见表1和表2，表1百合组培菌枯萎病病情级别的划分病情级别症状描述。元症状l 叶片叶缘卷IIlI黄化、萎菇，受害面积占植株面积25%2 nf片卷出I黄化、萎菇，受害面积占植株面积26%-50%3 叶片卷曲I黄化、萎

9、苦苦，受害面积占植株面积51%-75%4 叶片全部萎将或死亡，受害面积占植株面积76%-100%表2百合鳞片枯萎病病情级别的划分病情级别症状描述。无症状l 轻微腐烂，腐烂面积占单片鳞片25%2 中度腐烂，腐烂而积占单片鳞片26%-50%3 严重腐烂，腐烂面积占单片鳞片56%-75%4 极严重腐烂，腐烂面积占单片鳞片76%-100%7.3 调查方法按7.2病情级别划分调查每份鉴定材料发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行，记载单株/单片鳞片病情级别。74 病情指数统计方法计算每份鉴定材料的病情指数(DI)，计算结果取3次重复平均值。病情指数(DI)按式(1)计算。;(s X)DI=工工-一一一

10、-X 100.(1)NXS 式中.DI 病情指数;S 一一各病情级别的代表数值，11 各病情级别的植株数/鳞片数;N 调查总植株数/鳞片数，S 最高病情级别的代表数值。B 抗病性评价8 1 鉴定有效性判别8.1 1 当感病对照材料达到其相应感病程度(DI注50)，抗病对照材料与实际抗性程度相符，该批次抗枯萎病鉴定视为有效。8.1 2 以对照品种发病程度明显异常时判定该批次鉴定无效。8.2 抗病性评价标准依据鉴定材料的病情指数(DI)平均值确定其抗性水平，划分标准见表3。3/T 3693-2020 病悄指数(Dl)DIO。DI1516;DI 50 51 三DI7 576DI100 8 3 鉴定结

11、果根据8.1与8.2，将不感水平)等鉴定结果填入附录4 9 鉴定材料处理鉴定完毕后，集到134C4 表3百合枯萎病抗性评价标准抗性评价(级别免疫lmmune(I)高抗HighlyresistantCHR)中抗ModeratelyresistantCMR)中感Moderatelysusceprible(MS)高感HighlysusceptibleCHS)个重复的平均病情指数、抗性评价(抗A l 百合枯萎病症状附录A(资料性附录)百合枯萎病病原菌NY/T 3693-2020 百合枯萎病发生时，尖抱镰刀菌从百合的根部或种球基盘的伤口侵入，引起百合肉质根和种球基盘褐化、腐烂，并逐渐向上扩展。鳞片上的病

12、斑呈褐色并凹陷，而后变成黄褐色并逐渐腐烂。后期鳞片从基盘散开而剥落回感染尖抱镰刀菌百合枯萎病的种球长出的植株明显变矮，受害叶片呈牛皮纸样，植株上的叶片由上而下黄化或变紫，茎秤自下而上逐渐枯萎，最后整个植株枯萎而死。病株茎轩的维管束变褐。发病严重的则茎基部继缩易折断。在百合种球储存及运输的过程中，该病还会持续危害，引起鳞茎腐烂。在湿度大的时候，可在发病部位看到粉红色或粉白色的霉层。A.2 病原特征及病害传播途径百合枯萎病是由尖于包镰刀菌百合专化型(图A.l、图A.2)侵染引起的一种土传病害。该菌属半知菌类真菌，菌丝呈绒状，色洁白且丰厚，在马铃薯煎糖琼脂(PSA)培养基上生长4 d的菌落直径为3.

13、1cm，产抱细胞单瓶梗，且短。培养物牵牛紫色。小型分生于包子为卵圆形，数量较多，其大小在(4.211.1)m X(2.53.4)mo大型分生于包子为月牙形，稍弯，向两端均匀变尖，一般3隔5隔，多数3隔，大小在02.337.0)m X(3.06.0)mo厚垣袍子多球形，直径为9.4m13.5mo 百合枯萎病菌主要以菌丝体、厚垣抱子、菌核在百合种球内或随着病残体在种植百合的土壤或基质中越冬，成为翌年主要的初侵染来源。翌年气候条件适合时，病原菌便开始活动，引起百合植株发病，而后扩展蔓延，大量百合植株枯萎死亡。采收后的百合种球还会继续发病。由于该菌能在土壤中长期存活，已成为百合产生连作障碍的主要原因之

14、一。分尘袍子J(用于缸子图A.l百合枯萎病菌培养性状图A.2百合枯萎病菌形态特征5 NY/1 3693-2020 附录B(规范性附录)百合枯萎病抗性鉴定结果原始记录表鉴定结果原始记录表见表B.l。表B.l百合枯萎病抗性鉴定结果原始记录表品种/种质病情级别，株/鳞片编号名称来源重复病情指数平均病悄指数抗性评价(级别)。级l级2级3级4级5级I H m 定植日期接种日期接种材料类型接种病原菌分离物编号调查日期鉴定人(签字6 ONON-gRH问ZNY/T 3693-2020 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼(由l政编码，100125网址:阴叽N)化学工业出版杜印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销9峰*祷4峰印张O.75 字数15千字2020年12月北京第1次印刷9峰2020年12月第1版书号16109.8331 定价20.00元9等开本880mmX1230mm 1/16 版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T