外源化学物的一般毒性作用.ppt

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1、第第6 6章章 化学毒物的一般毒性作用化学毒物的一般毒性作用v一般毒性作用（一般毒性作用（general toxicity,general toxicity,基础毒性基础毒性,basic,basic toxicitytoxicity）：指外来化学物在一定的剂量、一定接触时间和）：指外来化学物在一定的剂量、一定接触时间和接触方式下对机体产生的综合毒效应。接触方式下对机体产生的综合毒效应。v一般毒性作用根据接触时间的长短可分为急性毒性、亚慢性一般毒性作用根据接触时间的长短可分为急性毒性、亚慢性毒性和慢性毒性。相应的试验称急性毒性试验、亚慢性毒性毒性和慢性毒性。相应的试验称急性毒性试验、亚慢性毒性试

2、验和慢性毒性试验。试验和慢性毒性试验。v1 1 急性毒性作用急性毒性作用v2 2 局部刺激试验局部刺激试验 （local irritation testlocal irritation test）v3 3 蓄积毒性作用及其评价蓄积毒性作用及其评价v4 4 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用2022/12/2611 1 急性毒性作用急性毒性作用v新外源化合物首先需必须阐明其急性毒性的新外源化合物首先需必须阐明其急性毒性的强度及特征。强度及特征。v1.1 1.1 基本概念基本概念v1.2 1.2 急性毒性试验的目的急性毒性试验的目的v1.3 1.3 急性毒性试验设计急性毒性试验设计v1.4

3、1.4 急性毒性替代试验急性毒性替代试验v1.5 LD1.5 LD5050应用中的有关问题应用中的有关问题v1.6 1.6 急性毒性评价急性毒性评价2022/12/2621.1 1.1 基本概念基本概念v急性毒性急性毒性（acute toxicityacute toxicity）是指机体一次）是指机体一次接触或在接触或在2424小时内多次接触外来化学物后所小时内多次接触外来化学物后所引起的快速剧烈的中毒效应（结构与功能变引起的快速剧烈的中毒效应（结构与功能变化）。化）。v一次接触因给予途径不同定义不同：口服和一次接触因给予途径不同定义不同：口服和注射指瞬间将受试物给予机体；吸入和皮肤注射指瞬间

4、将受试物给予机体；吸入和皮肤接触指在特定期间内（接触指在特定期间内（2424小时）机体持续接小时）机体持续接触受试物。触受试物。2022/12/2631.2 1.2 急性毒性试验的目的急性毒性试验的目的v确定受试物使一种或几种实验动物死亡的剂量水平（确定受试物使一种或几种实验动物死亡的剂量水平（LDLD5050，LDLD100100，LDLD0101 ），以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。），以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。v为进一步的蓄积毒性试验、亚慢性与慢性毒性试验及特殊毒为进一步的蓄积毒性试验、亚慢性与慢性毒性试验及特殊毒性试验提供剂量和判断指标的依据。性试验提供剂量和判断指标

5、的依据。v阐明一种化合物的相对毒性、作用方式和特殊毒性表现，找阐明一种化合物的相对毒性、作用方式和特殊毒性表现，找出量出量-效关系，以便其毒性包括临床症状、生理生化和病理效关系，以便其毒性包括临床症状、生理生化和病理变化、毒性性质和可能的靶器官等有初步了解。为毒理学机变化、毒性性质和可能的靶器官等有初步了解。为毒理学机制研究的初步探索。制研究的初步探索。v确定机体在环境中接触的受试物侵入机体的途径，研究受试确定机体在环境中接触的受试物侵入机体的途径，研究受试物的代谢动力学过程。物的代谢动力学过程。v研究受试物急性中毒的预防和急救治疗措施。研究受试物急性中毒的预防和急救治疗措施。2022/12/

6、2641.3 1.3 急性毒性试验设计急性毒性试验设计v1.3.1 1.3.1 试验动物的选择试验动物的选择v1.3.2 1.3.2 动物分组及样本例数动物分组及样本例数v1.3.3 1.3.3 动物喂养环境动物喂养环境v1.3.4 1.3.4 剂量选择剂量选择v1.3.5 1.3.5 染毒途径染毒途径v1.3.6 1.3.6 试验周期试验周期v1.3.7 1.3.7 观察指标观察指标2022/12/2651.3.1 1.3.1 试验动物的选择试验动物的选择v原则是所选动物应使试验的结果能反映或预原则是所选动物应使试验的结果能反映或预测人体接触时的反应。要求动物健康，体重测人体接触时的反应。要

7、求动物健康，体重差异不超过差异不超过10%10%，试验前应禁食，试验前应禁食1616小时。同时小时。同时尽量选用饲养管理方便、成本低的动物。尽量选用饲养管理方便、成本低的动物。v1.3.1.1 1.3.1.1 动物种属选择动物种属选择v1.3.1.2 1.3.1.2 动物品系选择动物品系选择v1.3.1.3 1.3.1.3 动物性别选择动物性别选择v1.3.1.4 1.3.1.4 动物年龄与体重选择动物年龄与体重选择2022/12/2661.3.1.1 1.3.1.1 动物种属选择动物种属选择v啮齿类动物啮齿类动物v猫和犬猫和犬v猪和灵长目猪和灵长目2022/12/267啮齿类动物啮齿类动物v

8、因缺乏呕吐反射而利于经口接触受试物的吸收，但因缺乏呕吐反射而利于经口接触受试物的吸收，但不适于研究经口能引起呕吐的化学毒物的毒性。不适于研究经口能引起呕吐的化学毒物的毒性。v大鼠和小鼠繁殖力强、寿命短、食谱与人类似、便大鼠和小鼠繁殖力强、寿命短、食谱与人类似、便于分析比较明确的生物学指标，且价格低、易管理。于分析比较明确的生物学指标，且价格低、易管理。大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近，用于急大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近，用于急性毒性试验占第一位。小鼠占第二位。性毒性试验占第一位。小鼠占第二位。v家兔因盲肠较长，经口接触毒物在肠道的吸收充分，家兔因盲肠较长，经口接触毒物在肠道的吸收充

9、分，结果往往毒性大于其他动物。结果往往毒性大于其他动物。2022/12/268猫和犬猫和犬v因试验成本较高，不适于样本量大的试验如因试验成本较高，不适于样本量大的试验如测定测定LDLD5050。v仅仅用来验证对毒性或对受试物的毒效应做仅仅用来验证对毒性或对受试物的毒效应做深入研究时以及对某些毒作用的种属敏感性深入研究时以及对某些毒作用的种属敏感性进行比较。进行比较。v猫和犬有高度发达的呕吐反射系统，有催吐猫和犬有高度发达的呕吐反射系统，有催吐效应的化合物在经口接触时应注意。效应的化合物在经口接触时应注意。2022/12/269猪和灵长目猪和灵长目v猪的食谱及皮肤结构与人接近，是一种用来猪的食谱

10、及皮肤结构与人接近，是一种用来估计外来化合物对人急性毒性危害水平较好估计外来化合物对人急性毒性危害水平较好的试验动物。但其饲养管理不便，价贵，也的试验动物。但其饲养管理不便，价贵，也不适于样本量大的试验。不适于样本量大的试验。v灵长目动物在种系上与人类最接近，结果最灵长目动物在种系上与人类最接近，结果最能反映人体的反应。但其价格昂贵，获得较能反映人体的反应。但其价格昂贵，获得较难。基本不用于急毒试验。难。基本不用于急毒试验。2022/12/26101.3.1.2 1.3.1.2 动物品系选择动物品系选择v动物品系是指源于一个共同祖先而具有特定动物品系是指源于一个共同祖先而具有特定基因型的一群生

11、物。基因型的一群生物。v不同品系的同种动物，可对同一被检物发生不同品系的同种动物，可对同一被检物发生不同反应，即存在品系差异。不同反应，即存在品系差异。v为了在同种动物中减少这种遗传特性所决定为了在同种动物中减少这种遗传特性所决定的品系差异，在毒性试验中，最好采用同品的品系差异，在毒性试验中，最好采用同品系动物，即纯种动物。系动物，即纯种动物。2022/12/26111.3.1.3 1.3.1.3 动物性别选择动物性别选择v性别的选择依试验目的、要求而定。性别的选择依试验目的、要求而定。v如需要着重观察受试验物对雄性动物生殖功如需要着重观察受试验物对雄性动物生殖功能的影响，应选用雄性动物。能的

12、影响，应选用雄性动物。v如为受试物的致畸形试验作准备，则可只选如为受试物的致畸形试验作准备，则可只选用雌性动物。用雌性动物。v如一般地阐明受试物毒性的大小与性质，则如一般地阐明受试物毒性的大小与性质，则应雌雄各半。应雌雄各半。2022/12/26121.3.1.4 1.3.1.4 动物年龄与体重选择动物年龄与体重选择v动物年龄一般选用初成年者。动物年龄一般选用初成年者。v最常用的是出生最常用的是出生2-32-3月龄、体重分别为月龄、体重分别为200200克克和和2020克左右的大、小鼠；犬则需喂养克左右的大、小鼠；犬则需喂养1 1年左右；年左右；豚鼠体重豚鼠体重200-250200-250克；

13、家兔克；家兔2000-25002000-2500克；猫克；猫1500-20001500-2000克。克。v如需研究受试物急毒作用的年龄差别，则应如需研究受试物急毒作用的年龄差别，则应选用不同年龄组动物。选用不同年龄组动物。2022/12/26131.3.2 1.3.2 动物分组及样本例数动物分组及样本例数v试验动物应按年龄、性别和体重进行分层随试验动物应按年龄、性别和体重进行分层随机分组。机分组。v随机方法可用抽签法和随机数字表法，即先随机方法可用抽签法和随机数字表法，即先将动物编号后，进行抽签或查随机数字表。将动物编号后，进行抽签或查随机数字表。v注意注意随机不等于随意！随机不等于随意！v每

14、组样本例数小鼠每组样本例数小鼠1010至至2020只，大鼠只，大鼠1212至至1616只，只，家兔家兔8 8至至1212只。只。2022/12/26141.3.3 1.3.3 动物喂养环境动物喂养环境v实验动物喂养室室温应控制在实验动物喂养室室温应控制在223223，家兔，家兔可控制在可控制在203203，相对湿度，相对湿度30%-70%30%-70%，无对，无对流风。每笼动物数以不干扰动物个体活动及流风。每笼动物数以不干扰动物个体活动及不影响试验观察为度，必要时单笼喂养。不影响试验观察为度，必要时单笼喂养。v饲养室采用人工昼夜为好，早饲养室采用人工昼夜为好，早6 6点至晚点至晚6 6点进点进

15、行行1212小时光照，其余时间黑暗。小时光照，其余时间黑暗。v一般食用常规试验饲料，自由饮水。一般食用常规试验饲料，自由饮水。2022/12/26151.3.4 1.3.4 剂量选择剂量选择v一般采用查文献和预试验（少量动物试验），一般采用查文献和预试验（少量动物试验），估计估计LDLD5050的范围。的范围。v然后以此剂量为中间剂量，然后以然后以此剂量为中间剂量，然后以4 4倍数上下倍数上下各推两个剂量组，共各推两个剂量组，共5 5组，使相邻两对数剂量组，使相邻两对数剂量的差值相等。如的差值相等。如P90P90表表6-36-3。2022/12/26161.3.5 1.3.5 染毒途径染毒途径

16、v接触途径的选择应以人在生产生活环境中接接触途径的选择应以人在生产生活环境中接触该化合物的方式为出发点。主要有：触该化合物的方式为出发点。主要有：v1.3.5.1 1.3.5.1 经口接触经口接触v1.3.5.2 1.3.5.2 经呼吸道接触经呼吸道接触v1.3.5.3 1.3.5.3 经皮肤接触经皮肤接触2022/12/26171.3.5.1 1.3.5.1 经口接触经口接触v其是指将受试物经口摄入或用机械直接送入胃的过其是指将受试物经口摄入或用机械直接送入胃的过程。具体包括：程。具体包括：v灌胃：灌胃：接触量和时间准确，但操作相对不便。接触量和时间准确，但操作相对不便。v掺入饲料：掺入饲料

17、：是将受试物掺入饲料或饮水中，让动物是将受试物掺入饲料或饮水中，让动物自行摄入的方法，其操作简便，但接触量和时间不自行摄入的方法，其操作简便，但接触量和时间不够准确。够准确。v吞咽胶囊：吞咽胶囊：是将受试物装入胶囊内，放入动物舌咽是将受试物装入胶囊内，放入动物舌咽部迫使动物咽下。本法操作不便，仅适于较大的动部迫使动物咽下。本法操作不便，仅适于较大的动物。物。2022/12/26181.3.5.2 1.3.5.2 经呼吸道接触经呼吸道接触v其适于在常温、常压下生产生活中以气态、蒸汽态、其适于在常温、常压下生产生活中以气态、蒸汽态、气溶胶、烟雾与粉尘状态存在的受试物的急性毒性气溶胶、烟雾与粉尘状态

18、存在的受试物的急性毒性试验。试验。v具体接触方式有：吸入（将试验动物置于含有一定具体接触方式有：吸入（将试验动物置于含有一定浓度的受试物的染毒柜或其它容器中，让动物自然浓度的受试物的染毒柜或其它容器中，让动物自然吸入）和注入（将受试物直接注入试验动物的气管吸入）和注入（将受试物直接注入试验动物的气管或肺内）。或肺内）。v该途径接触的持续时间可依据试验要求而定。毒性该途径接触的持续时间可依据试验要求而定。毒性大的接触时间可短些，毒性小的可长些。国内一般大的接触时间可短些，毒性小的可长些。国内一般在求在求LCLC5050时为时为2 2小时。小时。2022/12/26191.3.5.3 1.3.5.

19、3 经皮肤接触经皮肤接触v液态、粉尘态和气态外来化学物均有接触皮液态、粉尘态和气态外来化学物均有接触皮肤的机会。不仅与外露皮肤接触并被吸收，肤的机会。不仅与外露皮肤接触并被吸收，有的还能穿透衣服经皮肤吸收。有的还能穿透衣服经皮肤吸收。v外来化学物经皮肤吸收是指角质层完整的皮外来化学物经皮肤吸收是指角质层完整的皮肤，若皮肤破损，化学物经真皮直接吸收，肤，若皮肤破损，化学物经真皮直接吸收，而与静脉吸收的机制相似。而与静脉吸收的机制相似。2022/12/26201.3.6 1.3.6 试验周期试验周期v急性毒性试验除计算受试物的急性毒性试验除计算受试物的LDLD5050/LC/LC5050外，外，还

20、需要通过观察实验动物的中毒症状判断受还需要通过观察实验动物的中毒症状判断受试物的毒作用性质，推断中毒的靶器官等。试物的毒作用性质，推断中毒的靶器官等。v因此，试验周期一般为因此，试验周期一般为2 2周。周。2022/12/26211.3.7 1.3.7 观察指标观察指标v应根据急毒试验的目的来确定观察指标。应根据急毒试验的目的来确定观察指标。v1.3.7.1 1.3.7.1 致死量致死量/浓度浓度v1.3.7.2 1.3.7.2 中毒症状中毒症状v1.3.7.3 1.3.7.3 死亡及其时间死亡及其时间v1.3.7.4 1.3.7.4 体重体重v1.3.7.5 1.3.7.5 其他指标其他指标

21、2022/12/26221.3.7.1 1.3.7.1 致死量致死量/浓度浓度v常用常用LDLD5050/LC/LC5050。其计算一般采用改良寇氏。其计算一般采用改良寇氏（k krber rber）法：）法：LDLD5050=log=log1 1 X Xm mi(Pii(Pi0.5)0.5)X Xm m为最大剂量的对数；为最大剂量的对数；i i为相邻两对数剂量为相邻两对数剂量之差的绝对值；之差的绝对值；PiPi为各组阳性反应率的总为各组阳性反应率的总和。和。v毒性较大的用毒性较大的用LDLD5 5/LC/LC5 5。v毒性剧烈的用毒性剧烈的用LDLD1 1/LC/LC1 1。2022/12/

22、26231.3.7.2 1.3.7.2 中毒症状中毒症状v在急性毒性试验中，动物的中毒症状及死亡一般出在急性毒性试验中，动物的中毒症状及死亡一般出现在给予受试物现在给予受试物24-4824-48小时内，故观察小时内，故观察1 1周即可。周即可。v如中毒反应出现较迟，主要在给受试物后如中毒反应出现较迟，主要在给受试物后4848小时小时-4-4天，则观察期也应相应延长至天，则观察期也应相应延长至2-42-4周。特别在周。特别在48-7248-72小时内要仔细观察各剂量组动物的一般反应、临床小时内要仔细观察各剂量组动物的一般反应、临床表现、死前表现及这些反应出现的时间。表现、死前表现及这些反应出现的

23、时间。v具体观察指标具体观察指标见见P123P123表表6-16-1。2022/12/26241.3.7.3 1.3.7.3 死亡及其时间死亡及其时间v观察试验动物接触受试物后的死亡过程有利观察试验动物接触受试物后的死亡过程有利于探讨其中毒机制或死因。于探讨其中毒机制或死因。v在同系化学物中，有些在致死量下表现出动在同系化学物中，有些在致死量下表现出动物先兴奋后抑制，死亡时发生抽搐；而有的物先兴奋后抑制，死亡时发生抽搐；而有的则只引起抑制症状，表现精神萎靡、反应迟则只引起抑制症状，表现精神萎靡、反应迟钝，并在抑制状态下慢慢死亡，表明同系物钝，并在抑制状态下慢慢死亡，表明同系物之间的毒作用有差别

24、。之间的毒作用有差别。2022/12/26251.3.7.4 1.3.7.4 体重体重v在急毒试验中对于存活动物尤其是低于在急毒试验中对于存活动物尤其是低于LDLD5050组的动组的动物，应观察动物体重变化，以便了解受试物引起的物，应观察动物体重变化，以便了解受试物引起的中毒效应是短暂的还是较长期的。中毒效应是短暂的还是较长期的。v尽管引起动物体重下降或增长率减慢的原因较为复尽管引起动物体重下降或增长率减慢的原因较为复杂，如受试物影响食欲或消化系统功能而使动物厌杂，如受试物影响食欲或消化系统功能而使动物厌食或拒食可使体重下降，受试物可能会引起腹泻而食或拒食可使体重下降，受试物可能会引起腹泻而引

25、起食物的吸收利用也可导致体重下降。引起食物的吸收利用也可导致体重下降。v影响肾功能可使水盐代谢的紊乱而可影响体重。影响肾功能可使水盐代谢的紊乱而可影响体重。2022/12/26261.3.7.5 1.3.7.5 其他指标其他指标v根据上述某些指标的阳性结果可进一步扩大观察项目，如测根据上述某些指标的阳性结果可进一步扩大观察项目，如测定体温、心电、脑电等生理学指标或某些生化指标，有利于定体温、心电、脑电等生理学指标或某些生化指标，有利于深入探讨受试物的毒作用特征。深入探讨受试物的毒作用特征。v对死亡动物要取部分组织进行病理解剖学检查，记录各器官对死亡动物要取部分组织进行病理解剖学检查，记录各器官

26、系统肉眼可见的病变；停止观察后也应抽取部分存活的动物系统肉眼可见的病变；停止观察后也应抽取部分存活的动物进行病理解剖学检查。进行病理解剖学检查。v病理解剖学检查对迟发性死亡动物，尤其是发生双峰死亡的病理解剖学检查对迟发性死亡动物，尤其是发生双峰死亡的现象是必要的。双峰死亡指早期死亡较多，继而减少，然后现象是必要的。双峰死亡指早期死亡较多，继而减少，然后又出现大批死亡的现象。又出现大批死亡的现象。v病理解剖学检查对估计受试物的毒理作用有一定的意义，并病理解剖学检查对估计受试物的毒理作用有一定的意义，并可为亚慢性、慢性和其它毒性试验的设计提供依据。可为亚慢性、慢性和其它毒性试验的设计提供依据。20

27、22/12/26271.4 1.4 急性毒性替代试验急性毒性替代试验v固体剂量法固体剂量法v（fixed dose procedurefixed dose procedure）v急性毒性分级法急性毒性分级法v（acute toxic class methodacute toxic class method）v上下移动法上下移动法v（阶梯法，（阶梯法，up/down methodup/down method）2022/12/26281.4.1 1.4.1 固定剂量法固定剂量法v与经典方法不同的是它不以动物死亡作为观察终点，与经典方法不同的是它不以动物死亡作为观察终点，可以利用预先选定的或固定的一

28、系列可以利用预先选定的或固定的一系列剂量染毒，从剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性进行分而观察化学物的毒性反应来对化学物的毒性进行分级。实践证明可大量节省试验动物。级。实践证明可大量节省试验动物。v实验选择的剂量范围是实验选择的剂量范围是5 5、5050、500mg/kg500mg/kg，最高限量，最高限量是是2000mg/kg2000mg/kg。v欧共体（欧共体（EECEEC）的急性经口毒性分级标准是：高毒）的急性经口毒性分级标准是：高毒（LDLD505025mg/kg25mg/kg），有毒（），有毒（LDLD5050为为25-200mg/kg25-200mg/kg），），有

29、害（有害（LDLD5050为为200-2000mg/kg200-2000mg/kg），不分级（），不分级（LDLD50502000mg/kg2000mg/kg）4 4个等级。个等级。2022/12/26291.4.2 1.4.2 急性毒性分级法急性毒性分级法v它是以死亡为终点的分阶段试验法，每阶段它是以死亡为终点的分阶段试验法，每阶段3 3只动物，只动物，根据死亡动物数，平均根据死亡动物数，平均2-42-4阶段即可判定急性毒性。阶段即可判定急性毒性。使用动物数量少。使用动物数量少。v首选大鼠进行试验，在首选大鼠进行试验，在2525、200200、2000mg/kg2000mg/kg中选择中选择

30、一个剂量开始试验，并据其结果判断：不需进一步一个剂量开始试验，并据其结果判断：不需进一步试验进行分级；下阶段以相同剂量的另一种性别试试验进行分级；下阶段以相同剂量的另一种性别试验；下阶段以较高或较低的剂量水平进行试验。验；下阶段以较高或较低的剂量水平进行试验。v动物观察动物观察1414天，在染毒当天观察体征和死亡至少天，在染毒当天观察体征和死亡至少2 2次，次，之后每天观察之后每天观察1 1次。次。v染毒前和每周测体重，所有动物进行大体解剖，必染毒前和每周测体重，所有动物进行大体解剖，必要时进行组织病理学检查（病检）。要时进行组织病理学检查（病检）。2022/12/26301.4.3 1.4.

31、3 上下移动法上下移动法v它以死亡为终点但也可用于观察不同的终点。它以死亡为终点但也可用于观察不同的终点。v特点是所需的动物数更少。特点是所需的动物数更少。v根据初步的资料确定第一个动物接受化学物的根据初步的资料确定第一个动物接受化学物的剂量，剂量，由第一只动物染毒后的反应决定第二只动物接受化由第一只动物染毒后的反应决定第二只动物接受化学物的剂量，如果动物死亡，则下一个剂量降低；学物的剂量，如果动物死亡，则下一个剂量降低；如存活则下一个剂量增高。该方法需要选择一个合如存活则下一个剂量增高。该方法需要选择一个合适的剂量范围，使大部分动物所接受的化学物剂量适的剂量范围，使大部分动物所接受的化学物剂

32、量都在真正的平均致死量左右。都在真正的平均致死量左右。2022/12/26311.5 LD1.5 LD5050应用中的有关问题应用中的有关问题vLDLD5050具有重要的毒理学意义具有重要的毒理学意义：在药物研究中，评价：在药物研究中，评价药物急毒的大小，比较不同药物毒性的大小；计算药物急毒的大小，比较不同药物毒性的大小；计算药物的治疗指数；为后续的重复给药毒理学试验提药物的治疗指数；为后续的重复给药毒理学试验提供剂量参考；比较不同途径的供剂量参考；比较不同途径的LDLD5050值，获得生物利值，获得生物利用度的信息；试验中毒量及其体征为临床不良反应用度的信息；试验中毒量及其体征为临床不良反应

33、监测提供参考。监测提供参考。vLDLD5050的局限性的局限性：评价新药及化学物时提供的信息较：评价新药及化学物时提供的信息较少，实用性有限；影响因素多，如性别、年龄、身少，实用性有限；影响因素多，如性别、年龄、身体状况及环境因素等；物种差异性影响大；经典试体状况及环境因素等；物种差异性影响大；经典试验所需的动物数量多。验所需的动物数量多。2022/12/26321.6 1.6 急性毒性评价急性毒性评价v在生产、运输、贮存和销售使用过程中也需要根据外来化学在生产、运输、贮存和销售使用过程中也需要根据外来化学物的毒性分级，采取相应的防护措施。物的毒性分级，采取相应的防护措施。v为评价外来化学物急

34、毒的强弱及对人类的潜在危害程度，国为评价外来化学物急毒的强弱及对人类的潜在危害程度，国际上提出了化学物急毒的分级标准用以对急毒进行评价。际上提出了化学物急毒的分级标准用以对急毒进行评价。v为便于比较化学物的毒性及有毒化学物的管理，国内外根据为便于比较化学物的毒性及有毒化学物的管理，国内外根据LDLD5050的大小提出了许多分级标准。的大小提出了许多分级标准。WHOWHO公布的公布的全球化学品统全球化学品统一分类和标签制度一分类和标签制度（GHSGHS）中关于急性毒性危险类别和标）中关于急性毒性危险类别和标签的要求见签的要求见P125P125表表6-26-2。v注意：急毒不大，慢毒可能很大。因此

35、不能将急毒分级与慢注意：急毒不大，慢毒可能很大。因此不能将急毒分级与慢毒分级混淆。毒分级混淆。2022/12/26332 2 局部刺激试验局部刺激试验v目的在于了解化学物对眼和皮肤的局部刺激性和腐目的在于了解化学物对眼和皮肤的局部刺激性和腐蚀性。蚀性。v2.1 2.1 眼刺激试验眼刺激试验v（eye primary irritation testeye primary irritation test）v2.2 2.2 皮肤原发性刺激试验皮肤原发性刺激试验v（skin primary irritation testskin primary irritation test）v2.3 2.3 皮肤致

36、敏试验皮肤致敏试验v（skin sensitization test,allergic contact skin sensitization test,allergic contact dermatitis testdermatitis test）2022/12/26342.1 2.1 眼刺激试验眼刺激试验v其观察终点为眼刺激和眼腐蚀。其观察终点为眼刺激和眼腐蚀。v眼刺激（眼刺激（eye irritationeye irritation）指眼前表面接触受试物）指眼前表面接触受试物后产生的局部可逆性炎症变化。后产生的局部可逆性炎症变化。v眼腐蚀（眼腐蚀（eye corrosioneye corr

37、osion）指眼前表面接触受试物后）指眼前表面接触受试物后产生的局部不可逆性组织损伤。产生的局部不可逆性组织损伤。v方法用方法用DraizeDraize试验：家兔试验：家兔4 4只，滴眼后观察结膜（红、只，滴眼后观察结膜（红、肿、分泌物）、角膜（混浊度及范围）和虹膜（红、肿、分泌物）、角膜（混浊度及范围）和虹膜（红、肿）的反应，按规定的分级标准进行评分。一般观肿）的反应，按规定的分级标准进行评分。一般观察察7 7天，必要时延长至天，必要时延长至2121天。天。2022/12/26352.2 2.2 皮肤原发性刺激试验皮肤原发性刺激试验v皮肤刺激（皮肤刺激（dermal irritationde

38、rmal irritation）指皮肤接触受试物后产生）指皮肤接触受试物后产生的局部可逆性炎症变化。的局部可逆性炎症变化。v皮肤腐蚀（皮肤腐蚀（dermal corrosiondermal corrosion）指皮肤接触受试物后产生的）指皮肤接触受试物后产生的局部不可逆性组织损伤。局部不可逆性组织损伤。v不宜进行皮肤刺激试验的情况不宜进行皮肤刺激试验的情况:构效关系及理化性质推测可构效关系及理化性质推测可能有腐蚀性物质能有腐蚀性物质;急毒经皮试验有强系统毒性的物质急毒经皮试验有强系统毒性的物质;急毒经急毒经皮试验染毒量达皮试验染毒量达2000mg/kg2000mg/kg仍未产生皮肤刺激体征的物

39、质。仍未产生皮肤刺激体征的物质。v试验采用家兔或豚鼠，观察时间应足以观察到可逆或不可逆试验采用家兔或豚鼠，观察时间应足以观察到可逆或不可逆刺激作用，一般不超过刺激作用，一般不超过1414天。天。v影响试验的因素：皮肤的完整性受破坏；固态物的物理性状；影响试验的因素：皮肤的完整性受破坏；固态物的物理性状；受试物在皮肤表面封闭染毒的严密程度；动物的年龄与皮肤受试物在皮肤表面封闭染毒的严密程度；动物的年龄与皮肤结构的关系；种属差异（一般敏感顺序为：兔豚鼠人结构的关系；种属差异（一般敏感顺序为：兔豚鼠人猪）。猪）。2022/12/26362.3 2.3 皮肤致敏试验皮肤致敏试验v皮肤致敏是一种对化学物

40、免疫介导的皮肤反应，人皮肤致敏是一种对化学物免疫介导的皮肤反应，人体这类反应表现为：瘙痒、红斑、水肿、丘疹、水体这类反应表现为：瘙痒、红斑、水肿、丘疹、水疱等。疱等。v试验动物常选豚鼠。试验分两个阶段：试验动物常选豚鼠。试验分两个阶段：v诱导接触（诱导接触（induction exposureinduction exposure）：是以较低或中）：是以较低或中等浓度受试物对皮肤重复染毒（涂皮或皮下注射），等浓度受试物对皮肤重复染毒（涂皮或皮下注射），一般需一般需1414天。天。v激发接触（激发接触（challenge exposurechallenge exposure）：是间隔）：是间隔10

41、-1410-14天天后，用激发剂量（低于诱导时的剂量）受试物处理后，用激发剂量（低于诱导时的剂量）受试物处理未染过毒的皮肤部位，然后观察未染过毒的皮肤部位，然后观察2424小时、小时、4848小时和小时和7272小时后皮肤反应。小时后皮肤反应。v以皮肤反应程度进行评分，比较诱导及激发后皮肤以皮肤反应程度进行评分，比较诱导及激发后皮肤反应情况，以判断受试物能否产生皮肤过敏反应。反应情况，以判断受试物能否产生皮肤过敏反应。2022/12/26373 3 蓄积毒性作用及其评价蓄积毒性作用及其评价v3.1 3.1 基本概念基本概念v3.2 3.2 实验方法及其评价实验方法及其评价v3.2.1 3.2.

42、1 蓄积系数法蓄积系数法v3.2.2 3.2.2 生物半衰期法生物半衰期法v3.2.3 3.2.3 蓄积率蓄积率v3.3 3.3 相关机体耐受性相关机体耐受性2022/12/26383.1 3.1 基本概念基本概念v蓄积作用蓄积作用指反复多次接触同一化学物时，因前次接指反复多次接触同一化学物时，因前次接触时未完全自机体清除，使其多次接触后在体内的触时未完全自机体清除，使其多次接触后在体内的总量不断增加的现象。总量不断增加的现象。v蓄积性蓄积性指化学物具有蓄积作用的性质。指化学物具有蓄积作用的性质。v贮库贮库指容易蓄积化学物的组织部位。常见的有血浆指容易蓄积化学物的组织部位。常见的有血浆蛋白、脂

43、肪组织、肝、肾及骨骼。蛋白、脂肪组织、肝、肾及骨骼。v蓄积作用一方面包括化学物在体内量的增加，另一蓄积作用一方面包括化学物在体内量的增加，另一方面是组织结构和功能改变的累积。方面是组织结构和功能改变的累积。2022/12/26393.2 3.2 实验方法及其评价实验方法及其评价v任何毒物都可在体内蓄积。有些毒物分次进入的量任何毒物都可在体内蓄积。有些毒物分次进入的量虽小，但长期接触仍可产生毒性；有些毒物虽然毒虽小，但长期接触仍可产生毒性；有些毒物虽然毒性较小，但大量接触也可产生毒性。性较小，但大量接触也可产生毒性。v化学物在体内的蓄积现象是发生慢性中毒的物质基化学物在体内的蓄积现象是发生慢性中

44、毒的物质基础。蓄积毒性试验是检测外来化学物蓄积性大小的础。蓄积毒性试验是检测外来化学物蓄积性大小的试验，以了解某种外来化学物在体内的蓄积情况和试验，以了解某种外来化学物在体内的蓄积情况和程度，并可为慢毒实验设计提供依据。程度，并可为慢毒实验设计提供依据。v短期试验短期试验（Short-term testShort-term test）指在数日内（）指在数日内（7-147-14天）天），每天使试验机体接触一次受试物的试验。以探讨，每天使试验机体接触一次受试物的试验。以探讨较大剂量和较短时间的毒性作用。其与急性毒性试较大剂量和较短时间的毒性作用。其与急性毒性试验不同。验不同。2022/12/264

45、03.2.1 3.2.1 蓄积系数法蓄积系数法v本法是一种生物效应的试验方法。原理是在一定期限内以低本法是一种生物效应的试验方法。原理是在一定期限内以低于致死量（于致死量（LDLD5050 ）间隔分次给予受试动物，直至出现预计）间隔分次给予受试动物，直至出现预计的毒性效应为止。计算达到预计效应的总蓄积剂量，求出此的毒性效应为止。计算达到预计效应的总蓄积剂量，求出此蓄积剂量与一次接触该化学物产生相同效应所需剂量的比值蓄积剂量与一次接触该化学物产生相同效应所需剂量的比值-蓄积系数蓄积系数K K：EDED5050（n n）/ED/ED50 50（l l）vn-n-多次接触产生相同效应的剂量总和；多次

46、接触产生相同效应的剂量总和；vl-l-单次接触产生相同效应的剂量。单次接触产生相同效应的剂量。vK K越大表明蓄积性越小。越大表明蓄积性越小。K K1 1表示高度蓄积，表示高度蓄积，1K 1K 3 3表示表示明显蓄积，明显蓄积，3 K3 K5 5表示中等蓄积，表示中等蓄积，K5K5表示轻度蓄积。表示轻度蓄积。v蓄积系数的具体试验方法有：蓄积系数的具体试验方法有：v固定剂量法固定剂量法v定期递增剂量法定期递增剂量法v2020天试验法天试验法2022/12/2641固定剂量法固定剂量法v先按常规方法测定先按常规方法测定LDLD5050 。然后用另一批条件相同的。然后用另一批条件相同的动物，分成动物

47、，分成2-42-4组，每组组，每组10-2010-20只，雌雄各半。只，雌雄各半。v试验组每日定时定量（试验组每日定时定量（1/20-1/5 LD1/20-1/5 LD5050之间）并以相之间）并以相同途径给予受试动物，试验期间每日记录动物的蓄同途径给予受试动物，试验期间每日记录动物的蓄积死亡数至累计发生一半动物死亡（异外死亡除外）积死亡数至累计发生一半动物死亡（异外死亡除外），即可计算，即可计算K K值。若接触蓄积剂量已达到值。若接触蓄积剂量已达到5 5个个LDLD5050量，量，也可停止试验，表明也可停止试验，表明K K大于大于5 5。v单次接触量应根据动物体重作相应调整。单次接触量应根据

48、动物体重作相应调整。v试验期最长试验期最长100100天（每次接触量天（每次接触量1/20 LD1/20 LD5050 ），最短），最短2525天（每次接触量天（每次接触量1/5 LD1/5 LD5050 ）。）。2022/12/2642定期递增剂量法定期递增剂量法v在测出在测出LDLD5050后，同上法选择相同条件的动物，分为后，同上法选择相同条件的动物，分为接触组和对照组。接触组和对照组。v试验以试验以4 4天为一期，每天给相同剂量受试物。开始按天为一期，每天给相同剂量受试物。开始按1/10 LD1/10 LD5050给予。此后每期给予量按等比级数递增给予。此后每期给予量按等比级数递增1.

49、51.5倍。连续接触倍。连续接触2020天即可结束试验。天即可结束试验。v若试验期中只要受试物引起一半动物蓄积死亡，也若试验期中只要受试物引起一半动物蓄积死亡，也可结束试验。可结束试验。2022/12/26432020天试验法天试验法v本法是我国对农药及食品安全性的毒理学评价中提本法是我国对农药及食品安全性的毒理学评价中提出的方法。出的方法。v采用体重采用体重200200克左右的成年大鼠，也可用小鼠。每个克左右的成年大鼠，也可用小鼠。每个剂量组雌雄动物各剂量组雌雄动物各1010只。只。v各组受试物剂量分别为各组受试物剂量分别为LDLD5050的的1/201/20、1/101/10、1/51/5

50、及及1/21/2，另设对照组。，另设对照组。v每天染毒每天染毒1 1次，连续次，连续2020天，各组染毒累量可达天，各组染毒累量可达1 1、2 2、4 4和和10 LD10 LD5050 。再继续观察。再继续观察7 7天。天。v若若1/20 LD1/20 LD5050组有动物死亡，且有量效关系，则为强组有动物死亡，且有量效关系，则为强蓄积性，应放弃继续试验。若到蓄积性，应放弃继续试验。若到1/2 LD1/2 LD5050组才有动组才有动物死亡，则为弱蓄积性。物死亡，则为弱蓄积性。2022/12/26443.2.2 3.2.2 生物半衰期法生物半衰期法v生物半衰期（生物半衰期（t t1/21/2