(精品)流式细胞仪原理及应用.ppt

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1、流式细胞仪流式细胞仪FLOW CYTOMETERFLOW CYTOMETER原理及应用原理及应用 基本原理基本原理n光源u488nm兰绿色，15mW空冷，氩离子激光n流路u流动室(flow cell)F鞘液SHEATH：(ISOTON II,III)PBS 无颗粒，无荧光本底无菌，稳定的pHF样本流SAMPLE 单细胞悬液5*1051*106个/mln放大部分u光电倍增管PMT HVu放大电路 GAIN 增益F线性：LINF对数：LOGn统计：计算机FLOW CELLInjector TipFluorescencesignalsFocused laserbeamSheath fluidFLOW

2、 CYTOMETRY(FCM)PMTAMPcomputerLINLOGLASERSAMPLESIGNAL滤片滤片n带通滤片 BAND PASS(BP)u只允许某些波长的光通过n二向色性滤片 DICHROIC FILTERu一定波长以上通过，该波长以下折射630 nm BandPass FilterTransmitted LightWhite Light Source620-640 nm LightDichroic Filter/Mirror at 45 degReflected lightTransmitted LightLight SourcePMTPMTPMTPMT 4DichroicFi

3、ltersBandpassFiltersFlow Cytometry PrincipleLaser 1234Flow cellOPTICS信号信号n荧光信号uFL1，FL2，FL3，FL4u线性，对数n散射光信号u前向散射光(FS)：细胞大小u侧向散射光(SS)：结构复杂程度荧光染料的特性激发波长(EXCITING)发射波长(EMISSION)常用荧光染料的特性荧光染料 激发波长(nm)发射波长(nm)用途 颜色FITC 488 525 免疫荧光 绿色PE(RD1)488 575 免疫荧光 橙色 ECD 488 620 免疫荧光 橙红PeCy5 488 675 免疫荧光 深红PI 488 62

4、0 DNA染色 橙红EPICS XL 流式细胞分析仪流式细胞分析仪BECKMANCOULTERBECKMANCOULTERFLOW CYTOMETERFLOW CYTOMETER-细胞分析领域中的细胞分析领域中的CTCT实现快速、高灵敏度、多参数的细胞功能分析实现快速、高灵敏度、多参数的细胞功能分析细胞的特征与细胞功能n不同细胞的形态学特征n不同细胞的蛋白表达n其它细胞功能特征ImmunophenotypingCD2CD2CD4CD4CD#=cluster designation number90 Degree Scatter0 200 400 600 80010008152030405010

5、02001000LymphocytesMonocytesNeutrophilsSide Scatter ProjectionLight Scatter GatingScaleLog FITC 1000 100 10 1.1ImmunophenotypingHISTOGRAM 单参数直方图单参数直方图Log FITC Fluorescence(CD8).1 1 10 1001000123445%2%26%双参数直方图双参数直方图DOT PLOT27%CD分子(Cluster of differentiation)-人类白细胞分化抗原1982年巴黎首届国际学术会议确定CD命名法已有200多个分化抗

6、原群被鉴定和命名已得到WHO有关管理机关批准 CD抗原及其相关细胞群抗原及其相关细胞群n 细胞群 CD抗原 n T细胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD28 CD38n B细胞 CD10 CD19 CD20-CD24 CD37 CD72-CD75n 髓系细胞 CD13 CD14 CD15-CD17 CD33 CD34 CD35n NK细胞 CD16 CD56 CD57 CD94n 血小板 CD31 CD41 CD42a CD42b CD61 CD62p CD63 n 激活抗原 CD26 CD30 CD69 CD95-CD97n 粘附分子 CD11a-c CD18 CD29

7、CD44 CD49a-fn 内皮细胞 CD105 CD106 CD109n细胞因子受体 CD25 CD115 CD117 CD122 CD126流式细胞术的临床应用 临床免疫学临床免疫学临床免疫学临床免疫学 临床血液学临床血液学临床血液学临床血液学 临床肿瘤学临床肿瘤学临床肿瘤学临床肿瘤学 血栓与止血血栓与止血血栓与止血血栓与止血 骨髓和器官移植骨髓和器官移植骨髓和器官移植骨髓和器官移植 基础医学研究基础医学研究基础医学研究基础医学研究(一一一一)FCMFCMFCMFCM在临床免疫学中的应用在临床免疫学中的应用在临床免疫学中的应用在临床免疫学中的应用1.1.评价机体的免疫功能评价机体的免疫功能

8、评价机体的免疫功能评价机体的免疫功能(1)(1)淋巴细胞亚群淋巴细胞亚群淋巴细胞亚群淋巴细胞亚群 T T T T细胞：细胞：细胞：细胞：CD3CD3+CD4 CD4+(Th/(Th/TiTi)CD8 CD8+(Ts/(Ts/TcTc)B B B B细胞：细胞：细胞：细胞：CD19CD19+NK NK NK NK细胞：细胞：细胞：细胞：CD3CD3-CD16CD16+CD56CD56+(2)(2)淋巴细胞亚群细分淋巴细胞亚群细分淋巴细胞亚群细分淋巴细胞亚群细分 T T T T细胞：细胞：细胞：细胞：TsTs：CD8CD8+CD28 CD28-Tc Tc：CD8CD8+CD28 CD28+Th T

9、h：CD4CD4+CD29 CD29+Ti Ti：CD4CD4+CD45RACD45RA+B B B B细胞：细胞：细胞：细胞：B1B1：CD5CD5+CD19 CD19-B2 B2：CD5 CD5+CD19 CD19+(3)(3)活化淋巴细胞亚群活化淋巴细胞亚群活化淋巴细胞亚群活化淋巴细胞亚群 活化总活化总活化总活化总T T细胞：细胞：细胞：细胞：CD3CD3+/HLADR/HLADR+静止总静止总静止总静止总T T细胞：细胞：细胞：细胞：CD3CD3+/HLADR/HLADR-活化活化活化活化CD4+CD4+细胞：细胞：细胞：细胞：CD4CD4+/HLADR/HLADR+活化活化活化活化C

10、D8+CD8+细胞：细胞：细胞：细胞：CD8CD8+/HLADR/HLADR+活化诱导分子：活化诱导分子：活化诱导分子：活化诱导分子：CD69CD69 白细胞介素白细胞介素白细胞介素白细胞介素2 2低亲和力受体：低亲和力受体：低亲和力受体：低亲和力受体：CD25CD25 CD25 CD25+/CD3/CD3+：活化活化活化活化T T细胞细胞细胞细胞 CD25CD25-/CD3/CD3+：静止静止静止静止T T细胞细胞细胞细胞(4)(4)型变态反应介导分子型变态反应介导分子型变态反应介导分子型变态反应介导分子 CD23CD23CD23CD23：IgE IgE IgE IgE低亲和力受体低亲和力受

11、体低亲和力受体低亲和力受体 膜结合：膜结合：膜结合：膜结合：IgEIgEIgEIgE(5)HLA(5)HLA(5)HLA(5)HLA类抗原类抗原类抗原类抗原 HLA-B7/B-27HLA-B7/B-27HLA-B7/B-27HLA-B7/B-27 HLA-DR HLA-DR HLA-DR HLA-DR HLA-DP HLA-DP HLA-DP HLA-DP HLA-DQ HLA-DQ HLA-DQ HLA-DQ HLA-ABC HLA-ABC HLA-ABC HLA-ABC(6)(6)(6)(6)细胞因子受体细胞因子受体细胞因子受体细胞因子受体 IL-2 Receptor(CD25)IL-2

12、Receptor(CD25)IL-2 Receptor(CD25)IL-2 Receptor(CD25)IL-12 Receptor IL-12 Receptor IL-12 Receptor IL-12 Receptor EGF-Receptor EGF-Receptor EGF-Receptor EGF-Receptor TNF-Receptor TNF-Receptor TNF-Receptor TNF-Receptor TGF TGF TGF TGF-Receptor-Receptor-Receptor-Receptor Insulin-Receptor Insulin-Recepto

13、r Insulin-Receptor Insulin-Receptor(7)T(7)T(7)T(7)T细胞受体库细胞受体库细胞受体库细胞受体库 TGR TGR TGR TGR /TGR TGR TGR TGR /TCR TCR TCR TCR 变异体变异体变异体变异体(8)(8)(8)(8)机体免疫功能监测的应用机体免疫功能监测的应用机体免疫功能监测的应用机体免疫功能监测的应用 自身免疫性疾病自身免疫性疾病自身免疫性疾病自身免疫性疾病HLA-B27:强直性脊柱炎相关标志变态反应性疾病变态反应性疾病变态反应性疾病变态反应性疾病CD23:与变态反应严重程度呈正相关免疫缺陷性疾病免疫缺陷性疾病免疫缺

14、陷性疾病免疫缺陷性疾病 感染性疾病感染性疾病感染性疾病感染性疾病(病毒、细菌、寄生虫感染病毒、细菌、寄生虫感染病毒、细菌、寄生虫感染病毒、细菌、寄生虫感染)免疫治疗监测免疫治疗监测免疫治疗监测免疫治疗监测 肿瘤免疫监测肿瘤免疫监测肿瘤免疫监测肿瘤免疫监测 移植免疫监测移植免疫监测移植免疫监测移植免疫监测5例正常人CD4,CD8计数编 WBC LY/WBC LY CD4/LY CD4 CD8/LY CD8 CD4/CD8号 *109/L *100%*109/L *100%*109/L *100%*109/L 1 8.1 33.1 2681 38.3 1027 25.4 680 1.51 2 6.

15、7 35.0 2345 43.2 1014 26.0 609 1.66 3 8.0 36.5 2920 38.0 1110 27.0 788 1.41 4 5.4 36.0 1944 43.5 846 22.0 428 1.98 5 5.4 34.1 1841 46.5 856 25.5 469 1.82 8例HIV/AIDS患者CD4,CD8计数编 WBC LY/WBC LY CD4/LY CD4 CD8/LY CD8 CD4/CD8号 *109/L *100%*109/L *100%*109/L *100%*109/L 1 3.9 44.5 1736 34.9 606 48.0 833 0

16、.73 2 1.8 32.0 576 4.3 25 61.8 356 0.07 3 3.6 48.3 1739 16.4 285 58.6 1019 0.28 4 3.1 36.2 1122 17.4 195 59.2 644 0.29 5 5.1 39.9 2035 2.9 60 74.7 1520 0.11 6 4.7 35.8 1683 23.8 401 35.6 599 0.67 7 4.0 18.0 720 10.3 74 43.3 312 0.24 8 4.6 60.1 2765 19.3 534 58.6 1620 0.23 8例HIV/AIDS患者临床情况编 性 测出抗HIV

17、目前的 诊断 临 床 情 况 号 别 阳性的年龄 年龄 1 女 30 30 HIV感染 无临床症状 2 男 34 35 AIDS TB,PCP,面神经麻痹,HZV,隐球菌脑膜炎 3 女 30 34 HIV感染 无临床症状 4 女 23 26 HIV感染 乏力,体力差 5 男 32 33 AIDS TB,PCP 6 女 62 63 HIV感染 无临床症状 7 男 29 30 AIDS PCP 8 男 31 35 HIV感染 无临床症状 (二二二二)FCMFCMFCMFCM在临床血液学中的应用在临床血液学中的应用在临床血液学中的应用在临床血液学中的应用1.1.1.1.白血病的白血病的白血病的白血病

18、的MICMICMICMIC分型分型分型分型 MorphologyMorphologyMorphologyMorphology Immunology Immunology Immunology Immunology Cytogenetics Cytogenetics Cytogenetics Cytogenetics 白血病分型是选择化疗方案和判断预白血病分型是选择化疗方案和判断预白血病分型是选择化疗方案和判断预白血病分型是选择化疗方案和判断预后的重要依据。白血病免疫分型是后的重要依据。白血病免疫分型是后的重要依据。白血病免疫分型是后的重要依据。白血病免疫分型是MICMICMICMIC分型分型分

19、型分型的重要组成部分，也是对的重要组成部分，也是对的重要组成部分，也是对的重要组成部分，也是对FABFABFABFAB分型的补充，分型的补充，分型的补充，分型的补充，对白血病的诊断、治疗策略制定、预后判断对白血病的诊断、治疗策略制定、预后判断对白血病的诊断、治疗策略制定、预后判断对白血病的诊断、治疗策略制定、预后判断及对白血病发病机制的研究都具有重要作用。及对白血病发病机制的研究都具有重要作用。及对白血病发病机制的研究都具有重要作用。及对白血病发病机制的研究都具有重要作用。白血病免疫分型诊断标准白血病免疫分型诊断标准白血病免疫分型诊断标准白血病免疫分型诊断标准(EGIL)EGIL)EGIL)E

20、GIL)标准标准标准标准B B B B淋巴系白血病淋巴系白血病淋巴系白血病淋巴系白血病Pro-B-ALL(BPro-B-ALL(BPro-B-ALL(BPro-B-ALL(B型型型型)：CD19CD19CD19CD19+，或或或或/和和和和CD22CD22CD22CD22+，或或或或/和和和和CD79aCD79aCD79aCD79a+Common ALL(BCommon ALL(BCommon ALL(BCommon ALL(B型型型型)：CD19CD19CD19CD19+，或或或或/和和和和CD22CD22CD22CD22+，或或或或/和和和和CD79aCD79aCD79aCD79a+，CD

21、10CD10CD10CD10+Pre-B-ALL(BPre-B-ALL(BPre-B-ALL(BPre-B-ALL(B型型型型)：CD19CD19CD19CD19+，或或或或/和和和和CD22CD22CD22CD22+，或或或或/和和和和CD79aCD79aCD79aCD79a+，Cy IgCy IgCy IgCy Ig M M M M+成熟成熟成熟成熟-B-ALL(BB-ALL(BB-ALL(BB-ALL(B型型型型)：CD19CD19CD19CD19+，或或或或/和和和和CD22CD22CD22CD22+，或或或或/和和和和CD79aCD79aCD79aCD79a+，Kappa/Lambd

22、aKappa/LambdaKappa/LambdaKappa/Lambda+急性髓性白血病急性髓性白血病急性髓性白血病急性髓性白血病(AML)AML)AMLAML中，中，中，中，M0 M6 M7M0 M6 M7可以通过免疫分型确诊可以通过免疫分型确诊可以通过免疫分型确诊可以通过免疫分型确诊AML与ALL免疫表型 CD19 CD7 CD33 CD13 HLA-DR TdTB-ALL +-+/-T-ALL -+-/+AML -/+/-T-ALL表型特征 CD7 CD5 CD2 CD3 CD4 CD8 CD1a I +90%75%-II +25%90%90%+III +/-+/-非T-ALL亚型 H

23、LA-DR CD19 CD10 CD20 Cyu smIg Ig重排I +-II +-+III +-+IV +-+V +-+VI +-+-+AML免疫表型 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7HLA-DR +-+/-+/-CD34 +/-+/-+/-+/-CD33 +/-+/-CD13 +/-+/-CD11b -+/-+-/CD15 -+/-+/-/CD14 -+/-+-GPA -+-GP -+能正确区别能正确区别能正确区别能正确区别AMLAMLAMLAML和和和和ALLALLALLALL，并能进一步区别并能进一步区别并能进一步区别并能进一步区别 ALLALLALLALL中的中的中的中的T

24、 T T T系和系和系和系和B B B B系及亚型。系及亚型。系及亚型。系及亚型。能正确鉴别能正确鉴别能正确鉴别能正确鉴别AMLAMLAMLAML中的中的中的中的M0M0M0M0、M6M6M6M6、M7M7M7M7 诊断双系或双表型白血病诊断双系或双表型白血病诊断双系或双表型白血病诊断双系或双表型白血病 发现仅表达个别次要非本系列相关抗原发现仅表达个别次要非本系列相关抗原发现仅表达个别次要非本系列相关抗原发现仅表达个别次要非本系列相关抗原 的白血病的白血病的白血病的白血病 诊断少见疑难白血病诊断少见疑难白血病诊断少见疑难白血病诊断少见疑难白血病(如毛细胞性白血病如毛细胞性白血病如毛细胞性白血病

25、如毛细胞性白血病)免疫分型的价值免疫分型的价值2.2.2.2.白血病的耐药基因白血病的耐药基因白血病的耐药基因白血病的耐药基因(MDR)MDR)MDR)MDR)检测检测检测检测 MDRMDRMDRMDR表达产物表达产物表达产物表达产物P P P P糖蛋白糖蛋白糖蛋白糖蛋白(P-P-P-P-gpgpgpgp)P-P-P-P-gpgpgpgp的作用机理的作用机理的作用机理的作用机理 P-P-P-P-gpgpgpgp在白血病检测中的临床意义在白血病检测中的临床意义在白血病检测中的临床意义在白血病检测中的临床意义成人急性白血病成人急性白血病P-P-gpgp表达的临床意义表达的临床意义 P-P-gpgp

26、+P-P-gpgp-缓解率（CR）20.5%78.5%AMLAML 6个月复发率 66.7%8.7%151 平均无病生存期 5M 13M 缓解率（CR）66.7%80.0%ALL ALL 6个月复发率 50.0%9.5%47 平均无病生存期 4M 13M李建勇 Clin J Oncol 1998,4:302 成人成人ALLALL多药耐药多药耐药P-P-gpgp与形成学分型的关系与形成学分型的关系 分型 例数 P-gp+P-gp-P-pg阳性率 L1 25 3 22 12%L2 40 10 30 25%L3 3 1 2 33.3%P0.05 华东：中华血液学杂志，1998，19：371P-P-g

27、pgp表达与表达与ALLALL免疫分型的关系免疫分型的关系免疫分型 例数 P-gp阳性例数 阳性率(%)B 38 8 21.1 T 10 1 10.0 T/B 4 2 50.0 难分类 4 2 50.0 My-40 4 10.0 My+16 9 56.3 My+ALL My+ALL 的的P-P-gpgp阳性率明显增高阳性率明显增高AMLAML中免疫表型与中免疫表型与P-P-gpgp表达的关系表达的关系成人：成人：P-gp的表达与CD7、CD14、CD42b、CD61、CD34 等高度相关。老年人：老年人：P-gp的表达与CD14、CD42b、CD61有相关性 P-gp的表达与CD34高度相关。

28、3.3.3.3.白血病的其它检查白血病的其它检查白血病的其它检查白血病的其它检查(1)(1)(1)(1)细胞凋亡的检查细胞凋亡的检查细胞凋亡的检查细胞凋亡的检查 FasFasFasFas及及及及FasLFasLFasLFasL Apo Apo Apo Apo 27 27 27 27 bcl bcl bcl bcl-2-2-2-2 P53 P53 P53 P53 Annexin Annexin Annexin Annexin Caspase Caspase Caspase Caspase(半胱氨酸蛋白酶半胱氨酸蛋白酶半胱氨酸蛋白酶半胱氨酸蛋白酶)(2)(2)(2)(2)细胞细胞细胞细胞DNADN

29、ADNADNA分析分析分析分析(3)(3)(3)(3)白血病残留病灶检查白血病残留病灶检查白血病残留病灶检查白血病残留病灶检查(MRD)MRD)MRD)MRD)4.血液病的其他应用AA，PNH鉴别诊断自身抗体检测 PAIgG,PAIgM,PAIgA RBC抗体 粒细胞抗体PNH红细胞表面CD59表达(三三三三)FCMFCMFCMFCM在临床肿瘤学中的应用在临床肿瘤学中的应用在临床肿瘤学中的应用在临床肿瘤学中的应用 肿瘤患者的免疫功能检查肿瘤患者的免疫功能检查肿瘤患者的免疫功能检查肿瘤患者的免疫功能检查 肿瘤患者的粘附分子检查肿瘤患者的粘附分子检查肿瘤患者的粘附分子检查肿瘤患者的粘附分子检查IC

30、AM-1 CD54ICAM-1 CD54ICAM-1 CD54ICAM-1 CD54ICAM-2 CD102ICAM-2 CD102ICAM-2 CD102ICAM-2 CD102ICAM-3 CD106ICAM-3 CD106ICAM-3 CD106ICAM-3 CD106CD62CD62CD62CD62、CD63CD63CD63CD63、CD42a/bCD42a/bCD42a/bCD42a/b、CD41/61CD41/61CD41/61CD41/61、TSPTSPTSPTSP肿瘤标本的肿瘤标本的肿瘤标本的肿瘤标本的FCMFCMFCMFCM检查检查检查检查 耐药基因检查耐药基因检查耐药基因检

31、查耐药基因检查 癌基因与抗癌基因在肿瘤细胞中的表达及与预后的关系 粘附分子检查粘附分子检查粘附分子检查粘附分子检查 细胞凋亡检查细胞凋亡检查细胞凋亡检查细胞凋亡检查 细胞细胞细胞细胞DNADNADNADNA及细胞周期分析及细胞周期分析及细胞周期分析及细胞周期分析(癌前病变,恶性肿瘤预后评价)细胞增殖能力研究细胞增殖能力研究 肿瘤细胞耐药性筛选肿瘤细胞耐药性筛选肿瘤细胞耐药性筛选肿瘤细胞耐药性筛选 肿瘤相关抗原，特异标志物肿瘤相关抗原，特异标志物肿瘤相关抗原，特异标志物肿瘤相关抗原，特异标志物 激素受体激素受体激素受体激素受体 与癌细胞生物行为有关的因子，如与癌细胞生物行为有关的因子，如与癌细胞

32、生物行为有关的因子，如与癌细胞生物行为有关的因子，如CD44CD44CD44CD44 利用特殊的利用特殊的利用特殊的利用特殊的荧荧荧荧光染料光染料光染料光染料(PIPIPIPI、EBEBEBEB、AOAOAOAO等等等等)与细胞内与细胞内与细胞内与细胞内DNADNADNADNA碱基结合，被碱基结合，被碱基结合，被碱基结合，被荧荧荧荧光染光染光染光染料染色的细胞在激光照射下发射出料染色的细胞在激光照射下发射出料染色的细胞在激光照射下发射出料染色的细胞在激光照射下发射出荧荧荧荧光，荧光强度与光，荧光强度与光，荧光强度与光，荧光强度与DNADNADNADNA含量成正比。流含量成正比。流含量成正比。流

33、含量成正比。流式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推式细胞仪通过测定细胞的荧光强度推算出细胞的算出细胞的算出细胞的算出细胞的DNADNADNADNA含量含量含量含量细胞DNA分析原理G2MGG0 0GG1 1s0 200 400 600 8001000GG0 0GG1 1sG2MDNA AnalysisDNA AnalysisDNA contentCount2 2N N4 4N NNormal Cell Cycle 0 200 400 600 8001000PI FluorescenceDNA Analysis2 2N N4 4N N0

34、 200 400 600 8001000PI FluorescenceDNA AnalysisAneuploidAneuploid peak peakDNA index 1.21DNA index 1.211.1.出现非整倍体细胞峰，出现非整倍体细胞峰，出现非整倍体细胞峰，出现非整倍体细胞峰，DI1.1DI1.1或或或或DI0.9DI15%15%3.3.无明显的异倍体，但无明显的异倍体，但无明显的异倍体，但无明显的异倍体，但G0/1G0/1的的的的CV10%CV10%，S S期在期在期在期在10%-15%10%-15%4.4.S+G2/GS+G2/G1/0 1/0 20%20%DNA诊断肿瘤病

35、标准 (Klein et al)Klein et al)DNA的倍体和DNA指数的关系DIDI=样品样品样品样品G G G G0/10/10/10/1细胞峰均道值细胞峰均道值细胞峰均道值细胞峰均道值正常二倍体标准细胞正常二倍体标准细胞正常二倍体标准细胞正常二倍体标准细胞G G G G0/10/10/10/1期细胞均道值期细胞均道值期细胞均道值期细胞均道值淋巴瘤组织学分级与DNA倍体及S期细胞关系Histology DNA Analysis S 期比值期比值(%)Low-grade Diploid 15Intermediate-grade Frequently Aneuploid 5 15Hig

36、h-grade Frequently Diploid 15异倍体癌前病例病变结果组织类别 异倍体(例数)癌变例数 组织学分级 1 2 3鼻咽 13 7 0 1 6口腔 7 4 0 0 4胃 10 3 0 0 3宫内膜 9 6 0 1 5宫颈 6 2 0 0 2总计 45 22 2 20 各类癌前病变组织学分级与DNA倍体关系(1)组织类别 不典型增 例数 DNA倍体(例数)生分级 二倍体 异倍体 鼻咽粘膜 1 11 11 0 2 28 23 5 3 13 5 8口腔粘膜 1 10 10 0 2 6 6 0 3 19 12 7 各类癌前病变组织学分级与DNA倍体关系(2)组织类别 不典型增 例数

37、 DNA倍体(例数)生分级 二倍体 异倍体胃粘膜 1 18 18 0 2 14 13 1 3 14 6 8宫内膜 1 10 10 0 2 14 13 1 3 16 8 8宫颈粘膜 1 9 9 0 2 16 12 4 3 5 3 2 辅助诊断肿瘤辅助诊断肿瘤 估估计计肿肿瘤瘤的的预预后后 监测疗效监测疗效细胞DNA分析的临床意义 尿液尿液尿液尿液 宫颈分泌物宫颈分泌物宫颈分泌物宫颈分泌物 胸腹水胸腹水胸腹水胸腹水 肺泡灌洗液肺泡灌洗液肺泡灌洗液肺泡灌洗液 各种刺激液各种刺激液各种刺激液各种刺激液脱落细胞的DNA分析(四四四四)FCMFCM在血栓与止血中的应用在血栓与止血中的应用在血栓与止血中的应

38、用在血栓与止血中的应用1.1.血小板糖蛋白血小板糖蛋白血小板糖蛋白血小板糖蛋白 血小板质膜糖蛋白血小板质膜糖蛋白血小板质膜糖蛋白血小板质膜糖蛋白GPGPa a a a：CDw49b GPCDw49b GPa a a a：CD61CD61GPGPb b b b：CD42b GPCD42b GP：CD36CD36GPGPc c c c：CDw49f GPCDw49f GP：CD42a CD42aGPGPa a a a：CD29 GPCD29 GPb b b b：CD41 CD41GPGPaaaa：CD31CD31 血小板颗粒膜糖蛋白血小板颗粒膜糖蛋白血小板颗粒膜糖蛋白血小板颗粒膜糖蛋白颗粒：颗粒：

39、颗粒：颗粒：CD62P(GMP140CD62P(GMP140、PADGEM)PADGEM)GMP-33 GMP-33 TSP TSP颗粒：溶酶体完整膜糖蛋白颗粒：溶酶体完整膜糖蛋白颗粒：溶酶体完整膜糖蛋白颗粒：溶酶体完整膜糖蛋白 CD63CD63 溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白-1 -1 LAMP-1LAMP-1 溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白溶酶体相关膜糖蛋白-2 -2 LAMP-2LAMP-2血小板切面模式图垂直切面垂直切面垂直切面垂直切面赤道切面赤道切面赤道切面赤道切面2.2.活化血小板检测活化血小板检测活化血小板检测活化

40、血小板检测 CD62PCD62P，CD63 CD63 GP GPb/b/a(CD41a(CD41/61)61)GP GP(CD36)(CD36)(CD36)(CD36)GP GP GP GP-IbIbIbIb(CD42a(CD42a(CD42a(CD42a/CD42b)CD42b)CD42b)CD42b)ThrombospondinThrombospondinThrombospondinThrombospondin 血小板内钙离子血小板内钙离子血小板内钙离子血小板内钙离子3.3.遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断遗传性血小板功能缺陷性疾病诊断遗传性血小板功能缺陷性疾病

41、诊断 巨血小板综合症巨血小板综合症巨血小板综合症巨血小板综合症(BSS)BSS)GPGP Ib Ib-(CD42a(CD42a(CD42a(CD42a/CD42b)CD42b)CD42b)CD42b)缺陷或缺乏缺陷或缺乏缺陷或缺乏缺陷或缺乏 血小板无力症血小板无力症血小板无力症血小板无力症(CT)CT)CT)CT)GP GP GP GP b/b/a(CD41a(CD41/61)61)缺陷或缺乏缺陷或缺乏缺陷或缺乏缺陷或缺乏 贮存池疾病贮存池疾病贮存池疾病贮存池疾病 -SPDSPD下降下降下降下降 活化血小板的概念活化血小板的概念循环血液中处于静息状态的血小板受到生物或物理因子刺激后,使血小板胞

42、浆内颗粒膜糖蛋白释放与质膜融合,血小板膜表面糖蛋白发生数量重排和构象变化而成为活化血小板活化血小板的功能活化血小板的功能参与血栓形成与止血参与炎症和免疫反应参与肿瘤的转移血小板活化标志物在缺血性脑血管疾病中研究：血小板活化标志物在缺血性脑血管疾病中研究：1.脑缺血患者急性期血小板CD62p、CD63测定2.缺血性脑血管患者CD62p、CD54、CD49d测定3.缺血性脑血管患者CD62p、TSP、CD54测定(五五五五)FCMFCM在骨髓和器官移植中的应用在骨髓和器官移植中的应用在骨髓和器官移植中的应用在骨髓和器官移植中的应用 骨髓或脐血的祖干细胞细胞测定骨髓或脐血的祖干细胞细胞测定骨髓或脐血

43、的祖干细胞细胞测定骨髓或脐血的祖干细胞细胞测定CD34CD34+CD38 CD38-CD34CD34+CD38 CD38+CD34CD34-CD38 CD38+移植前配型移植前配型移植前配型移植前配型HLA-IHLA-I类抗原的抗体类抗原的抗体类抗原的抗体类抗原的抗体(PRA)PRA)血管内皮细胞抗体血管内皮细胞抗体血管内皮细胞抗体血管内皮细胞抗体(VEA)VEA)移植后的免疫监测移植后的免疫监测移植后的免疫监测移植后的免疫监测淋巴细胞及活化淋巴细胞亚群淋巴细胞及活化淋巴细胞亚群淋巴细胞及活化淋巴细胞亚群淋巴细胞及活化淋巴细胞亚群粘附分子粘附分子粘附分子粘附分子(六六六六)FCMFCM在基础医

44、学研究中的应用在基础医学研究中的应用在基础医学研究中的应用在基础医学研究中的应用 造血祖干细胞扩增及保存造血祖干细胞扩增及保存造血祖干细胞扩增及保存造血祖干细胞扩增及保存 肿瘤的发生与发展肿瘤的发生与发展肿瘤的发生与发展肿瘤的发生与发展 药物治疗机理的研究药物治疗机理的研究药物治疗机理的研究药物治疗机理的研究 基础免疫学的研究基础免疫学的研究基础免疫学的研究基础免疫学的研究 应用应用FCMFCM曾开展过的一此基础研究曾开展过的一此基础研究：胃癌及癌旁组织胃癌及癌旁组织DNADNA、细胞凋亡、细胞凋亡、P-P-gp gp、粘附分子检测的临粘附分子检测的临床意义床意义哮喘患者氨茶碱诱导细胞凋亡的实

45、验研究哮喘患者氨茶碱诱导细胞凋亡的实验研究 NONO与造血干细胞增殖活性关系的研究与造血干细胞增殖活性关系的研究中药中药“清心饮清心饮”拆方治疗病毒性心肌炎机制的实验研究拆方治疗病毒性心肌炎机制的实验研究中药治疗强直性脊柱炎的机理研究中药治疗强直性脊柱炎的机理研究氨氯地平治疗高血压的机理研究氨氯地平治疗高血压的机理研究葛根素对心肌细胞保护机制的实验研究葛根素对心肌细胞保护机制的实验研究心脏移植后免疫排异反应监测的研究心脏移植后免疫排异反应监测的研究细胞凋亡研究n亚二倍体nCD95(Fas,APO1)nAPO2.7nANNEXIN V-PIn断裂点掺入凋亡检测 Annexin V-PI双标记BECKMANCOULTER流式新概念 -INSIGHTOMETRY From Discovery to Diagnosis n完整的细胞分析-结构、功能、相互作用n血液学与流式细胞学的最佳结合n一切为了人类健康