医学专题—细菌的生长和遗传变异-1.ppt

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1、第三章第三章 细菌细菌(xjn)的生长和的生长和遗传变异遗传变异第一页，共六十八页。主要(zhyo)内容n3-1 细菌的生长及特性细菌的生长及特性n3-2 细菌的遗传细菌的遗传(ychun)与变异与变异第二页，共六十八页。一、生长与繁殖的概念一、生长与繁殖的概念(ginin)二、细菌生长的测定方法二、细菌生长的测定方法三、细菌的生长特性三、细菌的生长特性四、微生物膜的生长特性四、微生物膜的生长特性第三页，共六十八页。3-1-1 生长生长(shngzhng)与繁殖与繁殖同化作用大于异化作用时，细胞质的量增加，表现(bioxin)在细胞体积或重量的不断增加，这种现象称生长。生长(shngzhng)

2、一定程度后细胞分裂，这就是繁殖。个体的生长和繁殖体现为群体的生长。（微生物重量或数目的增加）。群体生长个体生长个体繁殖群体生长个体生长个体繁殖在微生物学中“只有群体的重复”才有意义，因此“生长”一般指群体生长。第四页，共六十八页。3-1-2 细菌细菌(xjn)的生长测定方法的生长测定方法计数法l直接(zhji)计数法借助显微镜l间接计数法平板计数生长量测定法l测定重量(zhngling)、体积、含氮量来反映细菌的生长第五页，共六十八页。（一）（一）计数法计数法1、直接(zhji)计数法（显微镜）涂片染色法：一定量样品涂布在载玻片上，染色后计数。滤膜染色法：一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。

3、比例计数法将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自(gz)的数目。第六页，共六十八页。涂片涂片(t pin)(t pin)染色法染色法1 1视野视野(shy)(shy)(shy)(shy)菌液菌液(ml)(ml)(0.1ml(0.1ml 1cm1cm2 2)*)*视野面积视野面积视野面积视野面积(cm(cm2 2)第七页，共六十八页。第八页，共六十八页。计数器计数器(血球血球(xuqi)(xuqi)计数板）计数板）测定法测定法1 11010-4-4 mlml菌液菌液第九页，共六十八页。数了数了80个小格中有个小格中有120个细菌，样品中的细菌浓度是多少？个细菌，样品中的

4、细菌浓度是多少？(120个个80)400/110-4 ml=600104个个/ml适适用用范范围围：测定个体较大的细菌或原生动物(yunshng-(yunshng-dngw)dngw)细细菌菌个个体体若若太太小小、过过多多，由由于于每每一一小小格格中中细细菌菌层层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。层叠加，相互遮挡，难以准确计数。数数数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数165=80个小格），个小格），折算折算样品样品(yngpn)细菌浓度；细菌浓度；第十页，共六十八页。滤膜染色法滤膜染色法l一定量样品过滤到滤膜上，然后一定量样品过滤到滤膜上，然后(r

5、nhu)染色计数。染色计数。l需要知道滤液的体积和滤膜的面积。需要知道滤液的体积和滤膜的面积。l在显微镜下计数，方法相同。在显微镜下计数，方法相同。第十一页，共六十八页。比例比例(bl)(bl)计数计数法法n比例比例样品菌液与等体积（或成一定样品菌液与等体积（或成一定(ydng)比例）的血液混合，比例）的血液混合，观测二者比例观测二者比例如果如果如果如果平均每个视野中细菌平均每个视野中细菌(xjn)(xjn)数量数量/红血球的数量红血球的数量比例为比例为5.55.5：1 1，则细菌，则细菌(xjn)(xjn)数量数量=？5.54005.5400万个万个/m l=2.210/m l=2.2107

6、 7个个/mLmL样品样品n红红血血球球数数已已知知(男男性性400500400500万万万万个个个个mLmL，女女性性350450350450万万万万个个个个mLmL)，平平均均400400万个万个/m/mL L细细细细菌菌菌菌红红红红血血血血球球球球比例计数法将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。（特点：不要求记体积）第十二页，共六十八页。DAPI:46-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride4,6-4,6-二二脒基基-2-2苯基苯基(bn j)(bn j)吲哚DNA2Cl-H2N+NH2CNHH2N-C NH2M

7、easurement of total cell counts全细胞(xbo)染色法（死活不分）：DAPI染色染色，DTAFDAPI:无毒性荧光染料，能够与DAN双链强力结合并产生荧光。采用358nm紫外光照射(zhosh)能发射明亮的蓝色荧光。第十三页，共六十八页。5-DTAF:5-(4,6-dichlorotriazinyl)aminofluoresceinDNAOOHOOHOOHNHNNClNClMeasurement of total cell counts全细胞染色法（死活(shu)不分）：DAPI染色染色，DTAF第十四页，共六十八页。有必要(byo)区分细菌的死活吗？n饮用水中卫

8、生细菌学标准是TBC 接种量：特别是X0/S0，即初期微生物浓度(nngd)与基质浓度(nngd)的比。产生(chnshng)延滞期的原因：缺乏分解新环境中有关基质的酶；缺乏充足的代谢中间产物。总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数底物特点：底物充足第四十六页，共六十八页。2）指数(zhsh)期（exponential phase）对数期、生长率上升阶段细胞数（量）以指数形式增加的时间段。细菌 特点：生长速率(sl)最大，世代时间（generation time）最短 酶系活跃、代谢旺盛细胞进行平衡生长，体内各成分最为均匀 底物特点：底物充足(chngz)，大量被细菌消耗，降解速率最高总细胞数

9、活细胞数III培养时间细胞个数第四十七页，共六十八页。指数期数学(shxu)描述世代(shdi)时间n 世代(shdi)数第四十八页，共六十八页。3）稳定期（stationary phase）：恒定(hngdng)期、静止期、生长下降期细菌特点(tdin)：净增长速度为零繁殖与死亡速度相等正生长与负生长相等底物(d w)特点：底物被大量消耗，不能够维持对数期细菌高生长速率所需要的有机物质，导致细菌生长率下降出现稳定期的原因：营养物尤其是生长因子耗尽 营养物比例失调 pH、DO、氧化还原电位的变化总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第四十九页，共六十八页。数学(shxu)表达生长(shngzh

10、ng)下降阶段 S很低，其浓度(nngd)对微生物影响大即有机物分解速度与其浓度成正比第五十页，共六十八页。4）衰亡期（decline phase,death phase）内源呼吸期（endogenous respiration phase）内源呼吸：体内贮藏物质酶等一部分细胞物质的氧化。细菌特点：细胞会发生自溶现象（autolysis），蛋白质水解酶活力 往往产生芽孢出现死亡(swng)期的原因：营养物不足 外界(wiji)条件恶化底物特点：底物被微生物大量耗尽，微生物因得不到营养 而进行(jnxng)内源呼吸总细胞数活细胞数III培养时间细胞个数第五十一页，共六十八页。细菌(xjn)生长的

11、数学描述生长与基质浓度(nngd)的关系微生物比增长速度：单位(dnwi)时间，单位(dnwi)微生物量的增加量基质浓度s第五十二页，共六十八页。Ks:饱和常数，与的s值相等KsS时sKsMonod公式（莫诺特公式）经验(jngyn)公式（微生物增长）第五十三页，共六十八页。对于像活性污泥这样的混合微生物群，也有类似的生长(shngzhng)曲线。细菌生长期与废水细菌生长期与废水(fishu)生物处理：生物处理：水处理(chl)中如何避免缓慢期接种对数期或代谢旺盛的污泥增加接种量污泥驯化 微生物维持到对数期可获得高的处理能力，即分解速度高，但处理效果不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的营

12、养物，故得不到好的水质第五十四页，共六十八页。处于稳定期污泥虽然生长速度有所下降，但有一定(ydng)的代谢活性，絮凝沉降性能好。故传统的活性污泥法常运行在这个范围。衰亡期只出现(chxin)在某些特殊的水处理场合，如延时曝气及污泥消化，出水水质好。第五十五页，共六十八页。食料/微生物代谢速率内源呼吸阶段生长率下降阶段生长率上升阶段（沉降性能好）（沉降性能差）大多数活性污泥处理系统运行范围延时曝气，污泥消化微生物代谢速率与食料微生物代谢速率与食料/微生物的关系微生物的关系注意：各个阶段的食物/菌量比发生变化，相当于活性污泥中的负荷。F/M（食稀比）第五十六页，共六十八页。3-1-4 微生物膜的

13、生长微生物膜的生长(shngzhng)特性特性1.生物膜的生长(shngzhng)液体培养基中加入固体物质（载体），微生物在其表面吸附、生长(shngzhng)、繁殖形成形成膜，这种膜叫微生物膜。微生物膜的生长膜厚的增加，密度也将发生变化从单位固体表面积上的微生物量（mg/cm2）上看可分为6个阶段延滞期、加速增长期、恒速增长期、减速增长期、安定期、脱落期第五十九页，共六十八页。延滞期延滞期加速增长期加速增长期恒速增长期恒速增长期减速减速(jin s)增长期增长期安定期安定期脱落期脱落期第六十页，共六十八页。第六十一页，共六十八页。（1）延滞期：细胞吸附在固体表面上的过程(guchng)（沉降

14、）影响吸附速度的因子：材质、表面性质、形状、细胞(xbo)的性质、操作条件（2）加速增长期：还没有形成(xngchng)完整的膜（3）恒速增长期：活性细胞量达到最大，形成完整的膜。膜表面凹凸不平。第六十二页，共六十八页。（4）减速(jin s)增长期：恒速增长期与安定期的过渡期，持续时间短。（5）安定期(dngq)：增长速度与脱落速度相平衡，膜量及膜厚达到最大值。（6）脱落期：外因：流体(lit)的剪切力 内因：细菌的死亡、气泡的形成，细胞外高分子量的变化。第六十三页，共六十八页。2.生物膜的特性(txng)（1）有效(yuxio)膜厚并不是全部有活性基质的扩散细胞的死亡70200m（平均(p

15、ngjn)100 m），并不是越厚越好。（2）密度（与膜厚有关）微生物膜的湿密度：密度有时小于水，一般接近于1。（因为有气泡的存在）第六十四页，共六十八页。湿生物膜组成（体积比）：细胞(xbo)5-15%，气泡2-18%，水7090%（3）组成(z chn)：（g-/g-生物膜）COD：0.47TOC：0.46T-N：0.11T-P：0.22生物膜干组成(z chn)：（g-/g-生物膜）第六十五页，共六十八页。膜厚膜体积/载体(zit)表面积生物膜湿重/表面积生物膜湿重（载体膜）载体生物膜生物量的测定方法：超声波脱落，按照细菌数量测定。生物膜的测量方法第六十六页，共六十八页。第一次作业(zuy)n请绘制间歇培养模式下的细菌生长曲线并说明各个生长阶段底物(d w)和细菌生长的特点。第六十七页，共六十八页。内容(nirng)总结第三章 细菌(xjn)的生长和遗传变异。DAPI:无毒性荧光染料，能够与DAN双链强力结合并产生荧光。吖啶橙染色直接计数法（AODC）：水样采集后迅速加入甲醛固定，甲醛最终浓度2%。每一个细菌(xjn)会生成一个菌落。(4)统计查表计算。105110C下干燥后称重（干重约为湿重的1020%）。内源呼吸：体内贮藏物质酶等一部分细胞物质的氧化。KsS时。是一种连续进料又连续出料的培养方式。第一次作业第六十八页，共六十八页。