仪器分析实验 (19).pdf

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1、54 万方数据 2019 年第 11 期(总第 568 期)JianyanJiance 检验监测 高效液相色谱串联质谱法 测定猪肉中磺胺甲恶唑不确定度的评定 摘 要：使用高效液相色谱串联质谱法对猪肉中磺胺甲恶唑含量的测定做不确定度分析评定，建立数学模型，找出影响测定结果不确定度的各种因素，并计算各不确定度分量进行评估和计算合成。结果显示：超高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中莱克多巴胺的不确定度主要来源于检测仪器和标准品以及标准曲线的 配制。关键词：不确定度；液相色谱串联质谱法；磺胺甲恶唑 中图分类号：O657 文献标识码：B 文章编号：1003-6997（2019）11-0054-03 磺胺甲恶

2、唑（sulfamethoxazole）又名新诺明，属全身应用的中效磺胺类药，是一种广谱抑菌剂，用于治疗泌尿道感染以及禽霍乱等，是饲料中常用的添加兽药,但其在动物体中的残留会对人身健康带来隐患。本研究应用液相色谱串联质谱法1测定猪肉中磺胺甲恶唑的含量，参照相关文献资料2-6，对实验测定结果进行不确定度评定，以期提高本试验的精确度。1.1 仪器与试剂 液相色谱串联质谱仪：Agilent1290-G6460C 型，三重四级杆，美国安捷伦公司；电子天平：感量 0.01 g、0.1 mg，德国赛多利斯公司；氮吹仪：美国 Organoma-tion 公司；移液器：1 000 L，德国赛多利斯公司；Oasi

3、s MCX 固相萃取柱：美国 Waters 公司。磺胺甲恶唑标准品：100 g/ml，中国农业部环境保护科研监测所。甲醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯：色谱纯，美国 Fisher 公司；其他试剂均为分析纯。实验室用水为超纯水。阳性猪肉样品。1.2 实验方法 1.2.1 标准溶液的配制 用 0.1 ml 移液管取 0.1 ml 磺胺甲恶唑标准品于 10 ml 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成 1 g/ml 的标准贮备液，于-20冰箱中保存。用甲醇将标准贮备液逐级稀释成浓度为 2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml 的标准工作液，上机检测绘制标准曲线。1

4、.2.2 样品前处理 称取 5 g 样品于 50 ml 离心管中，加入 15 ml 乙酸乙酯，涡旋离心，取上清液于 100 ml 鸡心瓶中，残渣重复提取 1 次，合并提取液。在提取液中加入 5 ml 0.1 mol/L 盐酸，45旋蒸出乙酸乙酯，将残留的盐酸层转移至 10 ml 离心管中，用 2 ml 0.1 mol/L 盐酸、5 ml 正己烷依次洗涤鸡心瓶至同一离心管，振荡离心后弃去正己烷，再加入3 ml 正己烷重复 1 次，去下层液备用。依次用 3 ml 甲醇和 3 ml 0.1 mol/L 盐酸活化 MCX 柱，取备用液过柱，依次用 2 ml 0.1 mol/L 盐酸和 2 ml V 水

5、V 甲醇V 乙腈=552520 洗涤小柱，然后用 2 ml V 水V 甲醇V 乙腈V 氨水=7510105 洗脱，收集洗脱液于 45氮气吹干，用 1 ml 水定容，过 0.22 m 有机滤膜，上机测定。收稿日期：2019-02-21 作者简介：李卿沛（1984-），男，甘肃永昌人，农艺师，主要从事农业技术推广和农产品质量检测工作。万方数据 JianyanJiance（移液管）检验监测 1.3 仪器条件 1.3.1 液相色谱条件 液相色谱柱：美国 Agilent 公司 EPC18 色谱柱（2.1 mm50 mm，1.8 m）；柱温：35；流速：0.2 ml/min；进样量：2 L；流动相：A 为

6、 0.1%甲酸水溶液，B 为 0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱：0 min 10%B，1 min 10%B，1.1 min 25%B，5 min 55%B，6 min 10%B。1.3.2 质谱条件 离子化模式：电喷雾正离子模式（ESI+）；扫描方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：+4 000 V；干燥气温度：325；干燥器流速：10 L/min；雾化气压力：35 psi。本方法计算公式：式中：X-试样中被测组分质量分数（g/kg）；A-样品溶液中被测组分浓度（g/L）；V-样品定容体积（ml）；m-称样量（g）；fR-回收率校正系数。根据建立的数学模型，影响测定的不确定度分量包括标准品配制

7、引入的不确定度 Urel(标)；样品称量引入的不确定度 Urel(m)；定容体积引入的不确定度 Urel(V)；标准曲线引入的不确定度 Urel(曲)；样品前处理引入的不确定度Urel(回)；检测仪器引入的不确定度 Urel(MS)等几个方面。4.1 标准品配制引入的不确定度 由标准物质纯度引入的不确定度和标准贮备液定容引入的不确定度组成。4.1.1 标准物质纯度引入的不确定度 标准物质证书给出磺胺甲恶唑的扩展不确定度为 0.12 g/ml，按矩形分布，引入的标准不确定度：相对标准不确定度：4.1.2 标准贮备液定容引入的不确定度 配制标准贮备液需要使用 0.1 ml 移液管和 10 ml 容

8、量瓶，检定证书给出 0.1 ml 移液管的允差为 0.004 ml，按矩形分布，引入的不确定度：相对标准不确定度：检定证书给出 10 ml 容量瓶的允差为 0.02 ml，按矩形分布，引入的不确定度：相对标准不确定度：配制标准贮备液引入的相对标准不确定度：标准品配制引入的相对标准不确定度：4.2 样品称量引入的不确定度 称取样品 5.00 g，使用感量为 0.01 g 的电子天平，其检定证书给出的最大允许误差为0.01 g，按矩形分布，引入的标准不确定度：相对标准不确定度：4.3 定容体积引入的不确定度 样品经过前处理，最后用 1 ml 可调式移液器取1 ml 水溶解残渣，其校准证书给出的最大

9、允许误差为1%，按矩形分布，引入的标准不确定度：相对标准不确定度：2019 年第 11 期(总第 568 期)55 re（l m）（V）（m）re（l 贮）re（l 纯）re（l 贮）re（l m）（容量瓶）（纯）re（l 纯）re（l 移液管）re（l 贮）re（l 容量瓶）re（l 移液管）re（l m）万方数据 =U 2+U U 22+2+2+4.4 标准曲线引入的不确定度 配制 2.0 ng/ml、5.0 ng/ml、10.0 ng/ml、50.0 ng/ml、100.0 ng/ml 标准工作液，分别上机测定 3 次，得到相应峰面积 A，结果见表 1。用最小二乘法拟合标准溶液质量浓度峰

10、面积曲线拟合得到标准工作曲线的线性回归方程：y=458.355x-35.095，相关系数 R2=0.999 9，峰面积测量的标准偏差 S：样品测量 6 次的平均值为 42.97 ng/ml，换算得到其含量为 8.59 g/kg，则标准曲线拟合的标准不确定度：对平均回收率进行显著性检验，以确定回收率校准因子f 是否在计算公示中采用，显著性检验采用t 检验，单检测值t 大于或等于临界值（t 95,11）=2.20 时，说明R 于 100%有显著性差异，说明校准因子 f 必须在计算公式中采用以修正结果，否则不采用。t 值大于临界值，有采用回收率对结果进行校正的必要。4.6 检测仪器引入的不确定度 根

11、据仪器检定证书给出的仪器不确定度为 U=10%，k=2，则仪器引入的相对标准不确定度：4.7 合成不确定度及扩展不确定度分析 将各分量合成相对标准不确定度：标准工作曲线拟合引入的相对标准不确定度：rel 姨 re（l 标）re（l m）re（l v）re（l 曲）re（l 回）re（l MS）4.5 样品前处理引入的不确定度 空白样品中添加 50 g/kg 磺胺甲恶唑标准工作溶液，做 6 个平行样品测定其回收率（见表 2）。回收率引入的相对标准不确定度：相对扩展不确定度可由合成相对标准不确定度乘以包含因子求得，取包含因子 k=2，在 95%置信水平下，其扩展不确定度：4.8 结果报告 猪肉中磺

12、胺甲恶唑的残留量为（XU）=8.59 1.16 g/kg，k=2（95%置信度）。从各个不确定度分量的评定结果来看，实验中除了仪器设备本身校正带来的不确定度贡献较大 标准溶液质量浓度（ng/ml）A1 A2 A3 A4 A5 2.0 1 007 931 907 926 907 5.0 2 367 2 314 2 298 2 295 2 281 10.0 4 573 4 575 4 482 4 586 4 541 50.0 22 637 22 629 22 827 22 731 23 377 100.0 45 211 45 675 45 946 45 804 46 034 回收率（%）平均回收率

13、 R 标准偏差（SD）1 2 3 4 5 6（%）（%）87.15 85.69 83.33 85.59 87.32 86.54 85.94 1.46（下转第 61 页）56 2019 年第 11 期(总第 568 期)rel re（l 回）（R）re（l MS）检验监测 JianyanJiance（曲）2=0.0676 万方数据 NongjingGuanli 农经管理 而能够生产出高品质的葡萄美酒。随着人们生活品质的提升，追求美好生活的需要，能够溯源、健康、环保有机、有特色的精品葡萄酒越来越受到葡萄酒爱好者及消费者的青睐和追捧，这就要求河西走廊葡萄酒生产企业必须明确自身的市场定位，提高产品的质

14、量，着力发展有机精品葡萄酒。4.3 抱团发展，强化“产区”品牌建设 随着葡萄酒消费的不断升级，对“产区”“精品酒”的诉求明显提高，这点也得到广大葡萄酒爱好者和消费者的认同，他们对于葡萄酒的消费理念也从认“葡萄酒品种”到认“品牌”到认“产区”到 认“产区精品葡萄酒”不断升级。在这样的时代背景下，要想做大做强甘肃河西走廊葡萄酒产业，就要支持和引导河西走廊现有的各葡萄酒企业进行强强联合，形成有较强竞争力的葡萄酒企业联合体河西走廊葡萄酒营销体验中心，坚持抱团拓展市场，并利用政策优势吸引更多的企业进行纵向发展，不断完善产业链，形成产业品牌优势。同时，扩大宣传渠道，加大整体宣传力度，不仅在省内以葡萄酒节作

15、为契机进行整体推介，还 要“走出去”在国内甚至国外进行产区推广，参加国际和国内葡萄酒大赛，打造和提高河西走廊品牌的知名度。抓住武威清远葡萄酒特色小镇获国家支持的契机，建设河西走廊特色各异、产业链齐全的集葡萄酒品鉴、葡萄酒旅游观光、体验博览、培训学习、休闲度假等多功能为一体的多元化葡萄酒庄体验综合体，以促进河西走廊区域经济的创新发展、融合发展、联动发展。4.4 加强人才培养，建立河西走廊葡萄酒人才培养体系 参照宁夏贺兰山东麓葡萄酒成熟模式，引入法国、意大利、美国、智利、西班牙等国际知名葡萄酒酿酒师和国内葡萄酒专家，对河西走廊葡萄酒产业进行“把脉”，对河西走廊葡萄酒产业发展进行系统梳理和规划，结合

16、河西走廊实际情况引入适合河西走廊产区的国际成熟的管理体系及举措，同时引入国际知名酒庄入住河西走廊产区，带动和推动当地葡萄酒产业接轨国际市场，加强人才培养，依托甘肃省农业科学院、甘肃农业大学、甘肃葡萄酒产业技术研发中心、河西学院及武威畜牧专修学院，建设葡萄酒专业人才培训基地和研学基地，引入中国侍酒师文化研究院等国内知名培训机构，培养各类专业人才，开发甘肃河西走廊产区葡萄酒课程，宣传推广甘肃河西走廊葡萄酒文化，营造葡萄酒消费氛围，培养甘肃河西走廊产区葡萄酒消费习惯。（上接第 56 页）外，标准品和标准曲线的配制引入的不确定度也较大，在实验中应尽可能规范操作，以确保更高的测量 精确度。1 农业部 1

17、025 号公告-23-2008 动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱串联质谱法S.2 JJF1059.1-2012，测量不确定度评定与表示S.3 魏博娟，吴业成，钱卓真.液质联用法测定水产品中喹诺酮类药物残留量的不确定度评定J.南方水产科学，2012，(3).4 付登洲，杨雪娇，黄伟.HPLC 法测定乳制品中三聚氰胺含量的不确定度评定J.食品研究与开发，2011，(2).5 查玉兵，陈美，王晓芳，等.HPLC 法测定猪肉中磺胺间甲氧嘧啶残留量的不确定度评估J.中国卫生检疫杂志，2009，(8).6 张厚森，武晓静，王玮，等.高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中磺胺多辛的不确定度评定J.食品工程，2013，(3).2019 年第 11 期(总第 568 期)61