仪器分析实验 (18).pdf

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1、高效液相色谱法高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分高效液相色谱法的优点高效液相色谱法的优点1.1.分离分离效能效能高高2.2.选择性选择性高高3.3.检测灵敏度检测灵敏度高高4.4.分析速度快分析速度快应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分分第一部分实验目的第二部分实验原理第三部分试剂和仪器第四部分色谱条件第五部分实验步骤第六部分注意事项第七部分思考题主 要 内 容应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有

2、效成分一、实验目的一、实验目的1 1、掌握磺胺类药物的高效液相色谱掌握磺胺类药物的高效液相色谱(HPLC)(HPLC)分离和定量分析的原理及实验条分离和定量分析的原理及实验条件的建立；件的建立；2 2、熟悉熟悉LC1260LC1260型高效液相色谱仪的仪器构造和一般操作方法；型高效液相色谱仪的仪器构造和一般操作方法；3 3、学会用外标法测定磺胺类嘧啶和磺胺甲噁唑的含量。学会用外标法测定磺胺类嘧啶和磺胺甲噁唑的含量。二二、实验原理、实验原理应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分固定相固定相：固体吸附剂：固体吸附剂，如硅胶如硅胶、氧化铝等氧化铝等，较常

3、使用的较常使用的是硅胶是硅胶吸附剂吸附剂。流动相流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸解吸。二二、实验原理、实验原理应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分流动相中的溶质分子（X）与溶剂分子（S）在固定相吸附剂上的竞争吸附：Xm+nSa=Xa+nSm下标m、a分别表示流动相和固定相，n是被吸附的溶剂分子数。达到吸附平衡时，吸附平衡常数（K）可表示为：nnKSXSXamma=K分配系数，但K值大，表明该溶质分子在固定相上被吸附的多，吸附作用强，

4、该组分的保留时间长，分配系数也大。吸附平衡常数K可以由吸附等温线数据求出。二二、实验原理、实验原理应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑的结构式磺胺类药磺胺类药物是含有磺胺基团的合成抗菌药的总称物是含有磺胺基团的合成抗菌药的总称，该该类药物的性质相近类药物的性质相近，一般的方法难以分离测定一般的方法难以分离测定，而而反相反相高效液相色谱可直接分离测定高效液相色谱可直接分离测定，且测定条件温和且测定条件温和,准确度高准确度高。三、试剂和仪器应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分1.试剂

5、试剂磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑（色谱纯），冰醋酸，甲醇（色谱纯），超纯水磺胺嘧啶和磺胺甲噁唑（色谱纯），冰醋酸，甲醇（色谱纯），超纯水2.仪器仪器LC1260LC1260高效液相色谱系列：四元泵，二极管阵列高效液相色谱系列：四元泵，二极管阵列DADDAD检测器，在线溶剂脱气机，溶剂过滤检测器，在线溶剂脱气机，溶剂过滤器，样品过滤器器，样品过滤器；25 L25 L进样器；进样器；50 mL50 mL容量容量瓶瓶；2 mL2 mL容量容量瓶瓶3.待测样本待测样本磺胺药片磺胺药片(0.5(0.5 g g每每片片）四、色谱条件应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成

6、分分离柱：分离柱：C18C18柱柱HypersilHypersil ODS2 5(4.6ODS2 5(4.6200200）检测器：二极管阵列检测器：二极管阵列DADDAD检测器检测器洗脱液：洗脱液：1%1%乙酸水溶液：甲醇乙酸水溶液：甲醇=70:3070:30（v/vv/v）流速：流速：0.5 mLmin0.5 mLmin-1 1进样量：进样量：5 5 LL五、实验步骤应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分1 1按照液相色谱操作指南，依次打开液相色谱的电源开关，色谱工作站（按照液相色谱操作指南，依次打开液相色谱的电源开关，色谱工作站（onlineo

7、nline），启动泵，调节流速、分），启动泵，调节流速、分析时间、流动相比例，使系统平衡析时间、流动相比例，使系统平衡20 min20 min以上。以上。2 2设置检测器波长，先不打开检测器，直到进样前才打开。设置检测器波长，先不打开检测器，直到进样前才打开。3 3配制配制样品样品（1 1）标准溶液配制标准溶液配制（2 2）标准曲线溶液配制标准曲线溶液配制（3 3）磺胺药片溶液的配制磺胺药片溶液的配制（4 4）溶液溶液过滤过滤五、实验步骤应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分4 4待仪器基线稳定后，开始进样分析，进样前开启检测器氘灯，填写单个样品信

8、待仪器基线稳定后，开始进样分析，进样前开启检测器氘灯，填写单个样品信息，工作站记录色谱数据。息，工作站记录色谱数据。5 5样品分析完成后，关闭紫外样品分析完成后，关闭紫外灯灯并并清洗清洗管路管路，进行进行数据处理，打印数据处理，打印实验实验结果结果。6 6关闭仪器关闭仪器(1)(1)关闭关闭色谱泵及柱温箱；色谱泵及柱温箱；(2)(2)退出退出工作站关计算机；工作站关计算机；(3)(3)关关闭闭仪器仪器电源电源。六、注意事项1.1.液液相色谱使用的相色谱使用的注射器需注射器需小心操作，小心操作，避免避免造成注射器针头、拉杆造成注射器针头、拉杆损坏损坏。2.2.流动相流动相：配制前需要分别用：配制

9、前需要分别用0.45 0.45 mm有机相有机相膜过滤膜过滤，避免尘埃阻塞色谱柱，使用前需要超声波脱气或使用在线脱气机，避免尘埃阻塞色谱柱，使用前需要超声波脱气或使用在线脱气机脱气脱气。3.3.四四元泵：使用前先要打开排气阀，排除流动相管线中的气体，不要让气泡进入系统。元泵：使用前先要打开排气阀，排除流动相管线中的气体，不要让气泡进入系统。4.4.检测器：样品检测器：样品实验完成后，提前关闭检测器氘灯再处理数据。实验完成后，提前关闭检测器氘灯再处理数据。5.5.色谱柱色谱柱：一定要了解色谱柱的性能，不要把不适合做的样品进到色谱柱中，以免毁坏色谱柱；实验结束，须用：一定要了解色谱柱的性能，不要把

10、不适合做的样品进到色谱柱中，以免毁坏色谱柱；实验结束，须用100%100%的甲醇洗的甲醇洗柱子柱子2020-3030分钟分钟。6.6.手动手动进样装置：必须使用平头进样器，否则会损坏六通进样装置：必须使用平头进样器，否则会损坏六通进样阀进样阀；样品样品配制后需要用配制后需要用0.45 0.45 mm有机相膜过滤，进样前需用样品润有机相膜过滤，进样前需用样品润洗进样器洗进样器5 5-7 7次次，针尖，针尖向上排出气泡，准确留出进样体积；分析易挥发组分时，需在进样前随进随取，避免样品或溶剂挥发影响向上排出气泡，准确留出进样体积；分析易挥发组分时，需在进样前随进随取，避免样品或溶剂挥发影响测定的准确

11、性。测定的准确性。应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分七、思考题应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分1.1.高效高效液相色谱液相色谱(HPLC)(HPLC)分离和定量分析的原理是什么？分离和定量分析的原理是什么？2.2.溶液溶液配制中有哪些操作的关键步骤？配制中有哪些操作的关键步骤？3.3.为什么为什么检测器在测样前开启并且样品分析完后要及时关闭？检测器在测样前开启并且样品分析完后要及时关闭？4.4.处理处理标准曲线时如果有杂标准曲线时如果有杂峰峰应应如何如何处理？处理？5.5.为什么为什么实验完毕

12、后要用实验完毕后要用100%100%甲醇冲洗管路甲醇冲洗管路？6.6.简述简述液相色谱分析的不同分离模式？液相色谱分析的不同分离模式？7.7.影响影响标准曲线相关系数的标准曲线相关系数的原因原因有哪些有哪些？8.8.液液相色谱中改变流速相色谱中改变流速对对样品样品分离分离、峰面积峰面积和和峰峰形有何影响？形有何影响？9.9.改变改变哪些因素哪些因素可以优化可以优化液相色液相色谱谱的的分离条件？分离条件？10.10.如果如果工作压力超过限压时，可能是什么原因引起的？如何解决？工作压力超过限压时，可能是什么原因引起的？如何解决？14谢谢应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分应用高效液相色谱法测定磺胺类药物的有效成分