土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.pptx

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1、第一页，共三十页。课题背景课题背景1 1、关于尿素、关于尿素 尿素尿素是一种重要的是一种重要的农业氮肥。农业氮肥。但是它但是它不能直接不能直接被被农作物农作物吸收。吸收。只有当土壤中的细菌将尿素只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨分解成氨之后才能被植物利用。之后才能被植物利用。2 2、细菌分解尿素的原因、细菌分解尿素的原因脲酶脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+CO+CO2 2NHNH3 3+H2O第二页，共三十页。课题目的：课题目的：一、从土壤中别离出能够分解尿素的细菌一、从土壤中别离出能够分解尿素的细菌

2、二、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌二、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌第三页，共三十页。一、如何从土壤中别离出能够分解尿素的细一、如何从土壤中别离出能够分解尿素的细菌？菌？土壤有土壤有“微生物的天然培养基之称。同其他生微生物的天然培养基之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，有更多的微生物。而尤其是在富含有机质的土壤中，有更多的微生物。而这些微生物中只有一小局部能够分解尿素。那么如何这些微生物中只有一小局部能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？能从众

3、多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？第四页，共三十页。资料一：资料一：思考：思考：思考：思考：1 1、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的、科学家为什么能从热泉中筛选出耐高温的TaqTaqTaqTaq细菌？细菌？DNA DNA DNA DNA多聚酶链式反响多聚酶链式反响多聚酶链式反响多聚酶链式反响PCRPCRPCRPCR是一种是一种是一种是一种在体外将少量在体外将少量在体外将少量在体外将少量DNADNADNADNA大量复制的技术，而此大量复制的技术，而此大量复制的技术，而此大量复制的技术，而此项技术的实施必须使用耐

4、高温项技术的实施必须使用耐高温项技术的实施必须使用耐高温项技术的实施必须使用耐高温930C930C930C930C的的的的DNADNADNADNA聚合酶。聚合酶。聚合酶。聚合酶。美国微生物学家托马斯美国微生物学家托马斯布鲁克于布鲁克于1966年在美国黄石年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了水生耐热细菌国家公园的一个热泉中发现了水生耐热细菌Taq，并从它，并从它体内别离出了耐高温的体内别离出了耐高温的TaqDNA聚合酶。聚合酶。因为热泉温度为因为热泉温度为因为热泉温度为因为热泉温度为70707070808080800 0 0 0C C C C，淘汰了绝大多数微生物只有，淘汰了绝大多数微生物只有

5、，淘汰了绝大多数微生物只有，淘汰了绝大多数微生物只有TaqTaqTaqTaq细细细细菌被筛选出来。菌被筛选出来。菌被筛选出来。菌被筛选出来。第五页，共三十页。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。2、从上述资料中你能得到什么启示？、从上述资料中你能得到什么启示？第六页，共三十页。实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：即人为提供有利于目的菌株生长的条件即人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、包括营养、温度、温度、pHpH等等)，同时抑制或阻止其他

6、微生物生长。，同时抑制或阻止其他微生物生长。也就是利用选择培养基筛选出你想要的目的菌株。也就是利用选择培养基筛选出你想要的目的菌株。比方：不加氮源的培养基比方：不加氮源的培养基固氮菌固氮菌 不加碳源的培养基不加碳源的培养基自养微生物自养微生物 参加高浓度食盐的培养基参加高浓度食盐的培养基金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌 允许特定种类的微生物生允许特定种类的微生物生 长，长，同时抑制或阻止其他种类微生同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。物生长的培养基。第七页，共三十页。以尿素为唯一氮源的培养基以尿素为唯一氮源的培养基能够别离尿素的细菌能够别离尿素的细菌 只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素

7、作为氮源。而只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。而只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。而只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用此培养基就能够选择出能够分解尿素的细菌。长繁殖，所以用此培养基就能够选择出能够分解尿素的细菌。长繁殖，所以用此培养基就能够选择出能够分解尿素的细菌。长繁殖，所以用此培养基就能够选择出能够分解尿素的细菌。

8、思考：什么样的培养基能选择培养出能够别离尿素的细思考：什么样的培养基能选择培养出能够别离尿素的细思考：什么样的培养基能选择培养出能够别离尿素的细思考：什么样的培养基能选择培养出能够别离尿素的细菌呢？菌呢？菌呢？菌呢？第八页，共三十页。思考：思考：思考：思考：1、该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供了什么该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供了什么该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供了什么该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供了什么营养？营养？营养？营养？2 2、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看、从物理性质看此

9、培养基属于哪类？从功能上看、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看属于哪类？属于哪类？属于哪类？属于哪类？第九页，共三十页。1 1、显微镜直接计数法显微镜直接计数法全部全部细菌数细菌数 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。中微生物的数量。统计菌落数目的方法：统计菌落数目的方法：二、如何统计每克土壤样品中究竟含有多少这二、如何统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌？样的细菌？2 2、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法活菌数最常用活菌数最常用3 3、滤膜法、滤膜法第十页，共三十页。计算方法：计算方法：每克样品中的菌落数每克样品中的

10、菌落数(CV)M(CV)M 其中，其中，其中，其中，C C C C某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V V V V涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)(ml)(ml)，M M M M稀释倍数。稀释倍数。稀释倍数。稀释倍数。当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一当样品的稀释度足够高时，培养基外表生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板

11、上的菌落数，就能推测出样品中大约含统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。有多少活菌。原理：原理：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：第十一页，共三十页。本卷须知：本卷须知：为了保证结果准确，一般选择菌落为了保证结果准确，一般选择菌落数在数在3030030300的平板进行计数。的平板进行计数。设置重复组：为使结果接近真实值可设置重复组：为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的培将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。数。设置对照组：将不加土样的培养基设置对照组：将不加土样的培养基置于相同条件下进行培养，作为

12、空白置于相同条件下进行培养，作为空白对照。对照。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。统计的菌落往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。第十二页，共三十页。讨论题讨论题1 1：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为细菌数。在对应稀释倍数为106106的培养基中，得到以下的培养基中，得到以下两种统计结果。两种统计结果。1 1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为的菌落数

13、为230230。2 2、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为计的菌落数分别为2121、212212、256256，该同学以这三个平，该同学以这三个平板上菌落数的平均值板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。乙有一个平板与另

14、外两个平板相差很大，说明操作过程可能有误，乙有一个平板与另外两个平板相差很大，说明操作过程可能有误，必须重做实验。必须重做实验。1、实验时必须设置重复组，至少要、实验时必须设置重复组，至少要涂布涂布3个平板。个平板。2、分析结果时，一定要考虑所、分析结果时，一定要考虑所设置的重复组结果是否一致，结设置的重复组结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需果不一致，意味着操作有误，需要重做实验。要重做实验。第十三页，共三十页。讨论题讨论题2 2：在做本课题的实验时，在做本课题的实验时，A A 同学从对应同学从对应10106 6倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150150个个菌落

15、。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约5050个菌落。个菌落。其他同学认为其他同学认为A A同学的结果有问题。他们分析同学的结果有问题。他们分析可能是可能是A A同学的培养基被杂菌同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。能在该培养基上生长。但是，但是，A A同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不同学确信自己的实验操作准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为相同，是因为自己所选用的土壤样

16、品不同自己所选用的土壤样品不同。但是，。但是，A A同学在设计实验的时候并没同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。分析：你能通过设置对照，帮助分析：你能通过设置对照，帮助A A同学学排除上述两个可能影响实验结果同学学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？的因素吗？第十四页，共三十页。通过这个事例可以看出，实验结果要有通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，说服力，对照的设置对照的设置是必不可少的。是必不可少的。方案一：方案一：由其他同学用与由其他同学用与A A同学相同土样进行实验同学相同土样进行实验 方案二：方案二

17、：将将A A同学配制的培养基在不加土样的情况下进同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。如果结果与如果结果与A A同学一致，那么证明同学一致，那么证明A A无误；如果结果不无误；如果结果不同，那么证明同，那么证明A A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。同学存在操作失误或培养基的配制有问题。对照实验是指除了被测试的条件对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰其他可能原因的干扰第十五页，

18、共三十页。三三.实验的具体操作实验的具体操作 一一.土壤取样土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。二二.制备培养基制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨固体培养基。牛肉膏蛋白胨固体培养基。筛选出能够分解尿筛选出能够分解尿素的细菌素的细菌与选择培养基作对照，与选择培养基作对照，检测选择培养基是否检测

19、选择培养基是否具有选择作用具有选择作用第十六页，共三十页。应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 别离不同的微生物采用不同的稀释度别离不同的微生物采用不同的稀释度别离不同的微生物采用不同的稀释度别离不同的微生物采用不同的稀释度 一般别离土壤中细菌，选用一般别离土壤中细菌，选用一般别离土壤中细菌，选用一般别离土壤中细菌，选用104104104104、105

20、105105105、106106106106倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 别离土壤中放线菌，选用别离土壤中放线菌，选用别离土壤中放线菌，选用别离土壤中放线菌，选用103103103103、104104104104、105105105105倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 别离土壤中真菌，选用别离土壤中真菌，选用别离土壤中真菌，选用别离土壤中真菌，选用102102102102、103103103103、104104104104倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度倍的稀释度 第一次实验可将稀释度放宽一点，选择第一次实验可将稀释度放宽一点，选择第一次实验可将稀释度放宽一点，选择第一次实

21、验可将稀释度放宽一点，选择103107103107103107103107三样品的稀释三样品的稀释第十七页，共三十页。思考：思考：为为什什么么别别离离不不同同的的微微生生物物要要采采用用不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的数量，选用的稀释范围相同吗？数量，选用的稀释范围相同吗？原因：原因：不同微生物在土壤中的含量不同。不同微生物在土壤中的含量不同。目的：目的：保证能从中选择出菌落数在保证能从中选择出菌落数在30300间的平间的平板进行计数。板进行计数。第十八页，共三十页。四四.取样涂布取样涂布实验时要对实

22、验时要对培养皿作好标培养皿作好标记。记。注明培养基注明培养基类型、培养时间、类型、培养时间、稀释度、培养物稀释度、培养物等。等。如果得到了如果得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的平板，那么说的平板，那么说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，说明试验操作有误，需要重新数的三个重复的菌落数相差较大，说明试验操作有误，需要重新实验。实验。第十九页，共三十页。五五.微生物的培养与观察微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。统计一次菌落

23、数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间缺乏而导致遗漏菌落的数目。缺乏而导致遗漏菌落的数目。不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形状、大不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形状、大小、颜色和隆起程度等等。这也是区别不同微生物的关键。小、颜色和隆起程度等等。这也是区别不同微生物的关键。培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间。细菌：细菌：细菌：细菌：3030303037373737培养培

24、养培养培养1 1 1 12d2d2d2d 放线菌：放线菌：放线菌：放线菌：2525252528282828培养培养培养培养5 5 5 57d7d7d7d 霉菌：霉菌：霉菌：霉菌：252528282828培养培养培养培养3 3 3 34d4d4d4d。第二十页，共三十页。第二十一页，共三十页。四、结果分析与评价四、结果分析与评价1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：选出菌落：对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基

25、的菌落数目明显大于选择培养基的数目，养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。说明选择培养基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功：样品的稀释操作是否成功：如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，那么说明稀释操作比较成功，并能够进行的平板，那么说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。菌落的计数。3.3.重复组的结果是否一致：重复组的结果是否一致：如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，那么可能操作有误，需要接近。如果结果相差

26、太远，那么可能操作有误，需要重做试验。重做试验。第二十二页，共三十页。五、操作提示五、操作提示 无菌操作无菌操作 做好标记做好标记 规划时间规划时间 第二十三页，共三十页。六六.课外延伸课外延伸菌种的进一步鉴定：菌种的进一步鉴定：细菌合成的脲酶将尿素分细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，性增强，pHpH升高。那么我们就升高。那么我们就可以在以尿素为唯一氮源的培可以在以尿素为唯一氮源的培养基中参加酚红指示剂。培养养基中参加酚红指示剂。培养某种细菌后，如果某种细菌后，如果PHPH升高，指升高，指示剂变红，说明该细菌能够分示剂变红，说明该细菌能够分解尿素

27、。解尿素。参加酚红指示剂的培养基参加酚红指示剂的培养基从功能上划分属于什么培从功能上划分属于什么培养基？养基？第二十四页，共三十页。滤膜法：滤膜法：滤膜法：滤膜法：测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色菌落呈现黑色，通过记数得出水样中，通过记数得出水样中，通过记数得出水样中，通过记数得出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心 ,有有有有或无金属光

28、泽或无金属光泽或无金属光泽或无金属光泽伊红美蓝培养基从伊红美蓝培养基从功能上划分属于什功能上划分属于什么培养基？么培养基？第二十五页，共三十页。练习练习1 1、需要在火焰旁操作的有、需要在火焰旁操作的有 土壤取样土壤取样称取土壤称取土壤稀释土壤溶液稀释土壤溶液涂布平板涂布平板 微生物的培养微生物的培养 A A B B C C D D2 2、在以尿素为唯一氮源的培养基中参加酚红指示剂、在以尿素为唯一氮源的培养基中参加酚红指示剂的目的是的目的是 A.A.筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 B B培养基中缺乏酚红指示剂作细菌的营养培养基中缺乏酚红指示剂作细菌的营养 C C对别离的菌种作进一

29、步的鉴定对别离的菌种作进一步的鉴定 D D如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素3 3、测定土壤中细菌数量一般选用、测定土壤中细菌数量一般选用104104、105105和和106106倍的稀倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102102、103103和和104104倍稀释，其原因是倍稀释，其原因是()A A细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大 B B细菌易稀释，真菌细菌易稀释，真菌不易稀释不易稀释C C细菌在土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多 D D随机的，没有随机的，没有原因原因4

30、4、别离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是、别离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()加尿素加尿素不加尿素不加尿素加琼脂加琼脂不加琼脂不加琼脂加葡萄糖加葡萄糖不加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐加硝酸盐不加硝不加硝酸盐酸盐A A B B C C D D第二十六页，共三十页。5.5.以下说法不正确的选项是以下说法不正确的选项是 A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中别离到耐高温的度热泉中别离到耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3

31、作为该样品作为该样品菌落数的估计值菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。6 6、实验测定链霉素对、实验测定链霉素对3 3种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用3 3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3 3条条等长的平行线等长的平行线(3(3条线均与图中的链霉素带接触条线均与图中的链霉素带接触

32、)，将平板置于，将平板置于37 37 条件下恒温培养条件下恒温培养3 3天，结天，结果如下图。从实验结果分析，以下表达不正确的选项是果如下图。从实验结果分析，以下表达不正确的选项是()A A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长 B B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人第二十七页，共三十页。7 7、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是()A A未接种的选择培养基

33、未接种的选择培养基B B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D D接种了的选择培养基接种了的选择培养基8 8、以下是关于、以下是关于“检测土壤中细菌总数实验操作的表达中，错误的选项是检测土壤中细菌总数实验操作的表达中，错误的选项是()A A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B B取取104104、105105、106106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上C C将

34、实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 37 恒温培养恒温培养242448h48hD D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组平板进行计数以上的实验组平板进行计数9 9、某同学从稀释度为、某同学从稀释度为103103倍的稀释液中各取了倍的稀释液中各取了0.1mL0.1mL土壤菌液涂布到三个平板上土壤菌液涂布到三个平板上得到菌落数分别为得到菌落数分别为200200、215215、210210。求每克土壤样品中的菌落数为。求每克土壤样品中的菌落数为_。第二十八页，共三十页。1010、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成

35、污染土、人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤中的壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行别离实验，请答复以下问题：这类细菌进行别离实验，请答复以下问题：1 1别离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的别离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有灭菌方法有、和和2 2将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在中每一步

36、都要在旁进行操作接种后的培养皿旁进行操作接种后的培养皿_于于3737的的中培养中培养3 3用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于属于培养基假设培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现培养基假设培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的红色环带，这是由于尿素被分解产生的使使pHpH升高，酚红指示剂产生的颜升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色区域越大，说明该菌株利用色变化，从而证明这一菌株可以以尿素为氮源变色区域越大，说明该菌

37、株利用尿素的能力尿素的能力4 4与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数A A多多 B B少少 C C相等相等 D D几乎为零几乎为零第二十九页，共三十页。内容总结课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：即人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。允许特定种类的微生物生 长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。别离不同的微生物采用不同的稀释度。原因：不同微生物在土壤中的含量不同。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间第三十页，共三十页。