gg动物细胞培养和核移植技术.ppt

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1、动物细胞工程动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术复习：植物细胞工程中常用的技术？复习：植物细胞工程中常用的技术？植物组织培养和植物体细胞杂交植物组织培养和植物体细胞杂交其他动物细其他动物细胞工程技术胞工程技术的基础的基础 如果一个大面积烧伤的病人，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？人耳鼠“人耳鼠”再出风头 2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只

2、几乎与身子一般大小的“人耳”。这只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？一、动物细胞培养一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织组织,将它将它分散成单个细胞分散成单个细胞,然后然后,放在放在适宜的培养适宜的培养基基中中,让这些细胞让这些细胞生长和增殖生长和增殖.细胞增殖细胞增殖2、原理、原理1、概念、概念3、过程：、过程：复习：植物组织培养复习：植物组织

3、培养 在无菌和人工控制的条件下在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物器官、将离体的植物器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适组织、细胞，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终宜的培养条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。形成完整的植株。过程过程 幼龄动物幼龄动物取动物器官取动物器官和组织和组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理细胞培细胞培养养单个细胞单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础是其他动物细胞工程技术的基础3、过程：、过程：剪碎的动物组织块剪碎的动物组织块细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋

4、白酶10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加加培养液培养液动物组织细胞间隙中动物组织细胞间隙中含有一定量的含有一定量的弹性纤弹性纤维等蛋白质维等蛋白质，将细胞，将细胞网络起来形成具有一网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织定弹性和韧性的组织和器官。和器官。传代培养：传代培养：将原代细将原代细胞从培养瓶中取出，胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培上的培养瓶中继续培养，称为传代培养养，称为传代培养。原代培养：原代培养：从机体取从机体取出后立即培养的细胞出后立即培养的细胞为

5、原代细胞为原代细胞。（分装。（分装前的细胞培养）前的细胞培养）（水解弹性纤维）（水解弹性纤维）4、动物细胞生长特性、动物细胞生长特性v悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。细胞贴壁：细胞贴壁：v培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。于贴附。要求：要求：接触抑制：接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，

6、数量不再增加。增加。50代以后代以后失去接触失去接触抑制抑制接触抑制接触抑制细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代传代培养培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加加培养液培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变剪碎的动物组织块剪碎的动物组织块传代培养的细胞一般传代培养的细胞一般传至传至10代左右细胞生长停滞，大代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到4050代，这种传代细胞为代，这种传代细胞为细胞株。细胞株。细胞株：细胞株：细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞

7、株传代至50代代后又出现细胞生长停滞状态，后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的只有部分细胞由于遗传物质的改变，改变，使其在使其在培养条件下可培养条件下可以以无限制传代无限制传代，这种传代细胞这种传代细胞为细胞系。为细胞系。细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。失去接触抑制，容易传代培养。动物胚胎或幼龄动物的组织或器官动物胚胎或幼龄动物的组织或器官分裂旺盛，分化程度低，易培养分裂旺盛，分化程度低，易培养P44思考思考1、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质主要是

8、什么成分？主要是什么成分？2、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个细胞时要注意什么问题呢？成单个细胞时要注意什么问题呢？3、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？主要是蛋白质主要是蛋白质(胶原蛋白等胶原蛋白等)。能，应注意时间的控制能，应注意时间的控制不能，因为动物细胞培养适宜的不能，因为动物细胞培养适宜的PH为为7.27.4，此，此环境下胃蛋白酶（环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。的活性较高。多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细

9、胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，讨论以下问根据你所学的内环境的知识，讨论以下问题：题：1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？5、动物细胞培养的条件、动物细胞培养的条件P46【讨论讨论】充足的营养供给、适宜的温度、适宜的充足的营养供给、适宜的温度、适宜的pH和气体环境。和气体环境。无菌、无毒的环境。无菌、无毒的环境。1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境2、营养（与体内基本相同）、营养（与体内基本相同）3、温度和、温度和PH 4、气体环境：、气体环境：保证细胞顺

10、利的保证细胞顺利的生长增殖生长增殖无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养液无菌处理、添加一定量的抗生素，定期更换培养液葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、维生素、素、维生素、动物血清、血浆动物血清、血浆等。等。36.5+（-）0.5度度,7.27.4O2:细胞代谢所必须细胞代谢所必须CO2：主要维持培养液的：主要维持培养液的PH（95%空气和空气和5%CO2）5、动物细胞培养的条件、动物细胞培养的条件合成合成培养基培养基合成培养基合成培养基成分已知成分已知，便于对实验条件，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些的控制。但与天然培养

11、基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，成分所替代，因此，细胞培养中使用因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。基的不足。最普遍的作法是加入小牛最普遍的作法是加入小牛血清。血清。天然天然培养基培养基 直接采用取自动物体液或从组织中提取的直接采用取自动物体液或从组织中提取的成分作培养液，主要有血清、组织提取成分作培养液，主要有血清、组织提取液、鸡胚汁等。液、鸡胚汁等。使用最普遍的天然培养基是血清，基本以使用最普遍的天然培养基是血清，

12、基本以小牛血清最普遍。血清由于含有小牛血清最普遍。血清由于含有多种细多种细胞生长因子、促贴附因子及其多活性物胞生长因子、促贴附因子及其多活性物质质。与合成培养基合用，能使细胞顺利。与合成培养基合用，能使细胞顺利增殖生长。增殖生长。P46 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？清？v血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。v氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为

13、必需氨中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。基酸），必须由培养液提供。v血清激素有胰岛素、生长激素等及多种血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子生长因子；血清还含有多种未知的血清还含有多种未知的促细胞生长因子促细胞生长因子、促贴附因促贴附因子子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。附。v因此，细胞培养时，因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加殖，一般需添加10%20%的血清。的血清。超净工作台超净工作台CO2培养箱培养箱冰箱冰箱6、动物细胞培养技术的应用、动物细胞

14、培养技术的应用v生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等克隆抗体等v健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，健康细胞培养：如获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。用于植皮。v用于检测有毒物质用于检测有毒物质v用于生理、病理、药理等方面的研究，为治用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据疗和预防疾病提供理论依据植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理培养基性质培养基性质培养基特有成分培养基特有成分培养结果培养结果培养目的培养目的细胞的全能

15、性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株病毒植株获得细胞或细胞分获得细胞或细胞分泌蛋白泌蛋白将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植核移植（难度高）

16、（难度高）受体细胞：受体细胞：M期的卵期的卵母细胞母细胞胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复细胞分化程度低，恢复全能性容易全能性容易二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、概念：、概念：2、分类：、分类：3、过程、过程供体细胞供体细胞（供核）（供核）细胞培养细胞培养体细胞体细胞卵母细胞卵母细胞（M中期：供质）中期：供质）去核去核无核卵无核卵母细胞母细胞注注入入细胞细胞融合融合杂杂种种细细胞胞构建重组构建重组胚胎胚胎胚胎胚胎移植移植代孕代孕母体母体新个体新个体(与母与母体基本相同体基本相同的个体的个体)杂杂种种细细胞胞

17、核移植核移植胚胎移植胚胎移植动物体细胞核移植过程：动物体细胞核移植过程：P49【讨论2】1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？的核？为使核移植动物的主要遗传物质全部为使核移植动物的主要遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。来自有利用价值的动物提供的细胞。2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么代以内的细胞，想一想，这是为什么？10代以内的细胞一般保持正常二倍体代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，未发生突变的核型，

18、未发生突变3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？克隆动物克隆动物绝大部分绝大部分DNA来自于来自于供体细胞核供体细胞核，但其核外还有少量的但其核外还有少量的DNA，即，即线粒体中的线粒体中的DNA是来自于是来自于受体卵母细胞受体卵母细胞。此外，即便动物的此外，即便动物的遗传基础完全相同遗传基础完全相同，还与，还与所处所处环境环境有很大关系有很大关系.卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚

19、胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠4、多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞克隆羊的成功证明了什么？克隆羊的成功证明了什么？1、动物体细胞核具有全能性；、动物体细胞核具有全能性；2、细胞质具有调控细胞核发育的作用。、细胞质具有调控细胞核发育的作用。（1）对比对比多莉羊和高产奶牛的克隆过程，多莉羊和高产奶牛的克隆过程，找出操作过程的不同点？找出操作过程的不同点？多莉克隆过程的受体细胞是多莉克隆过程的受体细胞是去核去核卵卵细胞细胞，而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是而高产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核去核卵母卵母细胞细胞；多莉克

20、隆过程是将供体；多莉克隆过程是将供体细胞核细胞核注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是注入受体细胞，而高产奶牛的克隆过程是将供体将供体细胞细胞注入受体细胞。注入受体细胞。思考题思考题（2）讨论分析上述哪一种措施更科学？）讨论分析上述哪一种措施更科学？并说明理由？并说明理由？卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性卵母细胞当中的细胞周期蛋白含量、活性比卵细胞高，用它作受体更容易成功比卵细胞高，用它作受体更容易成功 将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更将供体细胞注入受体细胞，使克隆动物更像供体动物，操作也方便像供体动物，操作也方便 高产奶牛的克隆过程更科学高产奶牛的克隆过程更科学5、体细胞核移植技术的应

21、用前景、体细胞核移植技术的应用前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种、保护濒危物种3、利用转基因克隆动物生产医用蛋白质、利用转基因克隆动物生产医用蛋白质4、用于器官移植的的供体。、用于器官移植的的供体。5、使人类深入了解胚胎发育及衰老过程、使人类深入了解胚胎发育及衰老过程6、追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病、追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病6 6、体细胞核移植技术存在的问题、体细胞核移植技术存在的问题 1、成功率低、成功率低2、存在健康问题、存在健康问题（如异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等）（如异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、

22、免疫失调等）3、克隆动物食品的安全性也存在争议、克隆动物食品的安全性也存在争议4、克隆动物的各个环节也有待改进、克隆动物的各个环节也有待改进可以可以利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛。传物质基本上全部来自该奶牛。3、（、（1）能利用体细胞核移植技术克）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。思考题思考题首先从卢辛达耳朵上剪取一首先从卢辛达耳朵上剪取一小块组织小块组织，在体外，在体外培养获得该组织的培养获得该组织的细胞细胞。从屠宰场取废弃的牛。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵巢，抽取卵母细胞卵母

23、细胞体外培养成熟。用显微针体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核去除卵母细胞的核，再将，再将耳细胞注入卵母细胞耳细胞注入卵母细胞，用用电刺激电刺激方法使卵母细胞与体细胞方法使卵母细胞与体细胞融合融合，这时，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激电刺激或或化学物质激活注入了体细胞核的化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞卵母细胞，使，使其完成其完成细胞分裂和发育过程细胞分裂和发育过程。核移植胚胎在体。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎胚胎植入经植入经同期发情处理的同期发情处理的受体母牛受体母牛体内。体内。2）如果将克隆

24、高产奶牛卢辛达的任）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？务交给你，你将如何对它进行克隆？在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制在研究方面，克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。问题尚在研究中。在应用上，生产克隆动物费用昂贵，距大规模在应用上，生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。应用还有一定距离。4.体细胞核移植技术在研究和应用上体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了还存在什么问

25、题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。解这方面的前沿动态。D例题解析1、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是（）A.动物细胞融合动物细胞融合 B.单克隆抗体单克隆抗体 C.胚胎移植胚胎移植 D.动物细胞培养动物细胞培养解析：动物细胞工程中技术包括动物细胞培养、解析：动物细胞工程中技术包括动物细胞培养、动物细胞融合、胚胎移植和单克隆抗体，其中动物细胞融合、胚胎移植和单克隆抗体，其中动物细胞培养是其他技术的基础动物细胞培养是其他技术的基础 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是改变的细胞是 A细胞系细胞系 B细胞株细胞株 C原代细胞原代细

26、胞 D传代细胞传代细胞A解析：细胞株传代至解析：细胞株传代至50代后出现细胞生长停滞代后出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系胞为细胞系3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞主要原因是这样的组织细胞（）A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B.具有更强的全能性具有更强的全能性 C.取材十分方便取材十分方便

27、D.分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A.培养基不同；培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。养成植株。A5.在动物细胞培养的有关叙述中正确的是在动物细胞培养的有关叙述中正确的是A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中过渡过程中B.动物细胞培养液中通

28、常含有葡萄糖、氨基动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞动物细胞培养的目的是获得大量的细胞D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理白酶处理D1.用动、植物成体的体细胞进行离体培养，用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是下列叙述正确的是A.都需用培养箱都需用培养箱 B.都须用液体培养基都须用液体培养基C.都要在无菌条件下进行都要在无菌条件下进行 D.都可体现细胞的全能性都可体现细胞的全能性链接高考C解析：动、植物成体的体细胞进行离体培养都要在无

29、解析：动、植物成体的体细胞进行离体培养都要在无菌条件下进行，动物成体的体细胞离体培养用液体培菌条件下进行，动物成体的体细胞离体培养用液体培养基，不能体现细胞的全能性，植物成体的体细胞离养基，不能体现细胞的全能性，植物成体的体细胞离体培养不一定用液体培养基，能体现细胞的全能性。体培养不一定用液体培养基，能体现细胞的全能性。故故C正确。正确。2.下列不属于动物细胞工程应用的是下列不属于动物细胞工程应用的是 A.大规模生产干扰素用于抵抗病毒引起的大规模生产干扰素用于抵抗病毒引起的感染感染 B.为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤细胞为大面积烧伤的病人提供移植的皮肤细胞 C.大规模生产食品添加剂、香料等大

30、规模生产食品添加剂、香料等 D.利用胚胎移植技术，加快优良种畜的繁殖利用胚胎移植技术，加快优良种畜的繁殖C解析：大规模生产食品添加剂、香料等是植物解析：大规模生产食品添加剂、香料等是植物细胞工程的应用，动物细胞工程无此应用细胞工程的应用，动物细胞工程无此应用3“试管婴儿试管婴儿”技术属于技术属于A胚胎移植胚胎移植 B组织培养组织培养C克隆技术克隆技术 D基因工程基因工程A解析：试管婴儿是获得精子和卵细胞后，在解析：试管婴儿是获得精子和卵细胞后，在体外受精，之后把早期的胚胎移植到体内，体外受精，之后把早期的胚胎移植到体内，属于胚胎移植技术，繁殖方式为有性生殖。属于胚胎移植技术，繁殖方式为有性生殖

31、。而克隆是无性繁殖的意思，比如体细胞核移而克隆是无性繁殖的意思，比如体细胞核移植技术得到的动物为克隆动物。植技术得到的动物为克隆动物。4胚胎移植技术目前主要应用于胚胎移植技术目前主要应用于 A 解决某些不孕症者的生育问题解决某些不孕症者的生育问题 B 治疗某些遗传病治疗某些遗传病 C 提高良种家畜的繁殖力提高良种家畜的繁殖力 D 提高动物的抗病力提高动物的抗病力AC5、回答下列有关动物细胞培养的问题：回答下列有关动物细胞培养的问题：在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到在动物细胞培养过程中。当贴壁细胞分裂生长到细胞表面细胞表面时，细胞会停止分裂增殖，这种时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为

32、细胞的现象称为细胞的。此时，瓶壁上形成的细。此时，瓶壁上形成的细胞层数是胞层数是。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是需要用酶处理，可用的酶是。随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现止，进而出现 现象；但极少数细胞可现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成而变成细胞，该种细胞的黏着性细胞，该种细胞的黏着性，细，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量 。相互接触相互接触接触抑制接触抑制一层一层

33、胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低减少减少(3)检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最检查某种毒物是否能改变细胞染色体的数目，最好选用细胞分裂到好选用细胞分裂到期的细胞用显微镜进行期的细胞用显微镜进行观察。观察。(4)在细胞培养过程中，通常在在细胞培养过程中，通常在 条件下保存条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中细胞。因为在这种条件下，细胞中 的活性的活性降低，细胞降低，细胞的速率降低。的速率降低。(5)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤组织当了排斥现象，这是因为机体把移植的

34、皮肤组织当作作进行攻击。进行攻击。中中低温低温酶酶新陈代谢新陈代谢抗原抗原苏丹红是一种人工色素（工业染料），它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员以小鼠为实验材料，用“动物细胞培养技术”对苏丹红毒性进行了检测。（1）该方法检测有毒物质毒性的指标是 。（2）请完善检测苏丹红毒性的实验。主要实验步骤：第一步，取大小相同的六只培养瓶依次编号为l6，分别加入等量相同的培养液和小鼠细胞；第二步：；第三步：。结果如下表：结论：。变异细胞占全部培养细胞的比例向1号瓶中加入适量的水，向26号瓶中加入等量不同浓度的苏丹红添加剂。培养一段时间后，取样制成临时装片，观察记录变异细胞的数目。低浓度的苏丹红毒性很小，随

35、浓度增加毒性逐渐增强。动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用继哺乳动物乳腺发生器研发成功后，膀胱生物发生器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是 。（2）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞中特异表达。（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠细胞的 转入 细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为 。该重组细胞发育的过程中还应用了技术。显微注射法膀胱上皮细胞核 去核的卵母细胞细胞核移植动物细胞培养