TRFIA与ELISA法检测乙型肝炎病毒前S1抗原对比分析_郭继中[1].docx

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1、 TRFIA 与 ELISA 法检测乙型肝炎病毒 前 SI 抗原对比分析 郭 继 中 胡 志 刚 2， 陈 国 千 2， 俞 蕾 2，李琴 2，殷白告 2 南京医科大学附属无锡市第一人民医院消化科，江苏无锡 214002; 2南京医科大学附属无锡市第一人民医院检验科，江苏无锡 214002) 摘要： 目的 对比分析酶联免疫吸附试验 (ELISA)与时间分辨焚光免疫分析 （ TRFIA)法进行前 Sl(PreSl)抗 原检测的特点。 方法 收集 500 例乙型肝炎患者血清标本，从阳性率、测量范围和灵敏度、精密度和特异性对 2 种 方法进行比较。 结果 TRFIA 法阳性率高于 ELISA 法 (

2、户 l 为阳性 ;ELISA(s /co)为样本吸光度值与 Cutoff 值 的比值，s/col 为阳性。从原倍到 1 :16 倍稀释， ELISA 法的s/co 值的变化几乎是平的，无法区分 阳性程度的强弱，而 TRFIA 法结果从高到低有显 著区别； TRFIA法与 ELISA 法相比灵敏度提高 4 倍， ELISA 法在1 :4 096 倍时结果为阴性，而 TR FIA 法在 1 :16 384倍时仍可检出 PreSl 抗原。 2.3 2 种方法精密度比较 选择荧光值较高的患者血清标本稀释至 ELISA 定性试剂可区分范围内高、中、低 3 个浓度， 进行批内和批间精密度比较，结果见表 2

3、、 3。 TR FIA法高、中、低 3个浓度批内 CV和批间 CV均优 于 ELISA法。 表 2 2 种方法不同样本浓度批内精密度测试 2.4 2 种方法特异性比较 对 100份正常体检者血清标本 HBsAg(-)， 即PreSl 抗原阴性的标本 同时用 TRFIA 与 ELISA法进行 PreSl 抗原的检测， 2 种方法结果均 阴性，特异性 100%。 3 讨论 我国是乙肝患病高发区， HBV 在人体内的复制 量、患者机体的免疫状态及治疗效果等，一直是医生 和患者都十分关注的问题。近年来人们逐渐认识到 PreSl 抗原对乙肝临床诊断具有一定的意义。 PreSl 蛋白在 HBV 附着和入侵

4、肝细胞的机制中起 重要作用，能够敏感地反映 HBV 的复制情况，尤其 可以反映 HBeAg 阴性的乙肝患者是否有病毒复 制，在急性乙肝患者中， PreSl 抗原先于 HBV DNA 阴转，提示疾病的预后良好 1 8 9。如何准确及时 的检测出患者血清中是否含有 PreSl 抗原，及患者 血清中 PreSl 抗原量的多少，将会充分发挥其临床 诊断价值。对于 PreSl 抗原的检测，目前主要是 ELISA法，但 ELISA 法大多灵敏度低，线性范围 窄，酶标记物不稳定，而应用双抗体夹心免疫荧光分 析方法建立的 TRFIA 法具有灵敏度高、重复性好、 特异性强、检测范围宽等优点。 笔者结果表明， T

5、RFIA法阳性率高于 ELISA 法(P0. 01)，有 17 例标本用 ELISA 法结果为阴 性，而用 TRFIA 法可检测到 PreSl 抗原。对这 17 例标本进行HBV DNA 定量检测，其中 11 例标本 HBV DNA 拷贝数异常，另 6 例 HBV DNA 拷贝数 正常。 图上显示，对于强阳性标本，从原倍到 1 :16倍 稀释， ELISA 法的 s/co 值的变化几乎是平的，无法 区分阳性程度的强弱；而 TRFIA 法结果从高到低 有显 著 性 区 别 。 灵 敏 度 比 较 表 明 ， TRFIA 法与 ELISA法相比灵敏度提高 4倍， ELISA法在 1 : 4 096

6、倍时结果为阴性，而 TRFIA 法在 1 : 16 384 倍 时仍可检出 PreSl 抗原。表 2、 3 数据显示，从批内 CV 到批间 CV， 从低值到高值， TRFIA 法均优于 ELISA 法。 对 100 份正常体检者血清标本检测结果表明， TRFIA 法不仅灵敏，特异性也好 （ 特异性 100%)。 这是因为， TPFIA 采用原子标记、灵敏度高，能有效 区分弱阳性与阴性血样。标记离子的荧光激发光波 长范围较宽，发射光谱峰范围窄，是类线光谱，有利 于降低本底荧光强度，提高分辨率。激发光 和发射 光之间有一个较大的 Stokes 位移，有利于排除非特 异荧光的干扰，增强测量的特异性。

7、标记离子螯合 物产生的荧光强度高，寿命长，有利于消除样品及环 境中荧光物质对检测结果的影响。每一秒钟检测样 品 1 000 次，结果取平均值，有利于提高检测的准确 性 5， 10 总之， TRFIA 法与 ELISA 法相比测量范围、精 密度和灵敏度有较大提高，能够准确及时敏感地反 映患者体内 HBV 的复制情况。 参考文献： 1 FUNK M L, ROSENBERG D M, LOK A S. Wordi- wide epidemiology of HBeAg-negative chronic hepatitis B and associated precore and core prom

8、oter vari- antsJ . J Viral Hepat, 2002, 9： 52 - 61. 2 何华，张大志 .乙型肝炎病毒前 SI 抗原的研宄进展 J.中华肝病杂志 ,2004, 12 (12): 755 - 766. 3 闵福援，王健 .前 S1 抗原在诊断乙肝病毒复制时的 临床价值 J.中华检验医学杂志， 2005, 28 (6): 584- 586. 4 秦立新，陈新瑞，陈远林，等 .血清 HBV 前 S1 抗原在 乙型肝炎诊断及断断预后推选用 J.实用预防医学， 2005, 12 (4)： 832- 833. 5 秦卫仕，田蓉 .时间分辨荧光荧光免疫分析方法学评 价J.免

9、疫学杂志 ,20 2, 18(3):397-399. 6 胡志刚，刘洁，陈国千，等 .时间分辨免疫荧光定量检 文章编号 ： 1671-038X(2007)03-0174-03 脾胃湿热证胃病患者胃黏膜细胞凋亡基医 相关蛋白的表达 陆宇平，王长洪，林一帆 (解放军沈阳军区总医院中医科，辽宁沈阳 110016) 摘要： 目的丨探讨脾胃湿热证胃病患者胃黏膜细胞凋亡基因相关蛋白的表达。 方法 选取脾胃湿热证胃病患 者70 例，检测胃黏膜 Fas、 p53、 増殖细胞核抗原 (PCNA)、 Bcl-2 凋亡基因相关蛋白。并与 70 例脾胃虚寒证胃病患 者进行对照。 结果 脾胃湿热证以糜烂性胃炎多见 (5

10、8. 6 % )， 而脾胃虚寒证以萎缩性胃炎多见 （ 22. 9 %)。 脾胃湿 热证患者Fas、 p53 表达明显高于脾胃虚寒证患者，阳性率分别为 74. 3%、 75. 7%和 55. 7%、 64. 05)， 而 PCNA、 Bcl-2 表达则与脾胃虚寒证患者差异无统计学意义。 结论 脾胃湿热证胃病患者胃黏膜细胞有促凋亡基因 相关蛋白的过度表达。 关键词：脾胃湿热证；细胞凋亡；基因；増殖细胞核抗原；胃黏膜 中图分类号： R 256. 3; R241.3 文献标志码 :A Expression of apoptosis related proteins in gastric mucosa

11、of gastric disease patients with the spleea stomach damp heat syndrome LU Y it ping, WANG Ch ang- hong, L IN Yt fan (Department of Traditional Chinese Medicine, General Hospital of Shenyang Military Distict , Shenyang 110016. China) Abstract： Objective To study the expression of apoptosis related pr

12、oteins in gastric mucosa of gastric disease patients with the syndrome of damp heat in the spleen and the stomach. Meth ods The apoptosis related proteins, including Fas. p53 . PCNA and Bd 2, in seventy gastric dis ease patients with the syndrome of damp heat in the spleen and the stomach were measu

13、red and compared with those in seventy gastric disease patients with the syndrome of spleen： yang insuffi： ciency. Results The syndrome of damp heat in the spleen and the stomach was very common in patients with erosive gastritis (58. 6%). The syndrome of spleen： yang insufficiency accounted 22. 9%

14、in patients with atrophic gastritis. The positive rate of the expression of Fas and p53 in the gastric disease patients with the syndrome of damp heat in the spleen and the stomach was 74. 3 % 收稿日期 :2006-12-25 作者简介：陆宇平 （ 1972-).男 .吉林长春人 .在读医学博士 .卞 i 治医 师 .卞 1 要从事中西医结合消化病研究 测乙型肝炎病毒前 S1抗原的研究 J.中华检验医学

15、杂志， 2006, 29 (5): 407 - 410. 7 胡志刚，刘洁，陈国千，等 .HBV 前 S1 抗原时间分辨 免疫荧光屏分析方法的建立 I J.中华核医学杂志， 2006, 26 (4)： 261 - 252. 8 闵福援，孙桂珍，王健，等 .前 S1 蛋白在乙型肝炎诊 断预后中的作用 IJ.中华检验医学杂志， 2004, 27(4): 224 - 226. 9 SULOWSKA Z, DWORNIAK D, TCHORZEWSKI H. The use of flow cytometry for the determination of the hepatitis B virus pre-Sl envelop protein binding by human peripheral blood lymphocytes in vitro in the course of recovery J . Pol Merkuriusz Lek, 2001, ll； 32 - 35. 10 乐爱平 .时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展 现状 J.江西医学检验 ,2003, 21 (3 ): 191 - 193.