药品非临床试验安全性规范-中研院生物实验安全防护.docx

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1、藥品非臨床試驗安全性規範(Guideline for the NonclinicalPharmacology/Toxicology Studies for MedicinalProducts Applications)行政院衛生暑編中華民國八十七年六月初版中華民國八十七年九月再版中華民国八十九年六月三版目錄目錄1序言2三版序言3第一章 新藥品許可上市之流程6第二章生物製劑之非臨床試驗規範16第三章 生物製劑之品質管制25第四章 藥理試驗規範(GUIDELINES FOR GENERAL PHARMACOLOGY STUDIES)32第 1 節 藥效學試驗(Pharmacodynamic Stu

2、dies, PD)34第 2 節 藥動學試验(Pharmacokinetic Studies, PK)41第五章 毒性試驗規範46第 1 節 單劑量毒性試驗(Single Dose Toxicity Study)47第 2 節 重覆劑量毒性試驗(Repeated Dose Toxicity Study)50第3節 基因毒性試驗 (GenotoxicityStudy)57第 4 節 生殖與發育毒性試驗(Reproductive and Developmental Toxicity Studies)68第 5 節 致癌性試驗(Carcinogenicity Study)78第 6 節 皮膚過敏性試

3、驗(Skin Sensitization Study)88第 7 節 皮膚感光過敏性之式驗(Skin Photosensitization Study)93第8節 皮膚刺激性式驗(Skin Irritation Study)98第9節 眼睛刺激性試驗(EyeIrritation Study)101第六章附錄104第3節 縮寫名詞對照表111第5節 無特定病原實驗動物之標準114第6節 非臨床試驗動物安全性試驗附表116試驗用新藥新藥申請意見備註序 言世界各醫藥先進國家，為確保上市藥品之安全性與有效性，均明文規定應 有足夠之藥理試驗、安全性試驗及人體臨床試驗為依據，證明該藥品安全性及 有效性後始

4、得上市。近年來我國已躋身開發國家之林，日漸重視智慧財產權及專利法，新藥研 究發展工作勢在必行，目前衛生署己先後完成優良藥品製造標準（GMP）、藥 品優良臨床試驗規範（GCP）、及藥品研發動物試驗優良實驗室操作規範（GLP） 之相關規範。利用動物進行藥理、毒理試驗是決定藥品進入人體臨床試驗階段的依據， 因此訂定完整之動物藥理、毒理試驗相關規範，實有其必要性。非臨床試驗規範內容涵蓋藥理試驗與毒性試驗。藥理試驗方面有藥效試 驗、藥動試驗。毒性試驗包含單劑量毒性試驗、重覆劑量毒性試驗、生殖毒 性試驗、致突變性試驗、致癌性試驗、皮膚過敏性試驗、皮膚感光過敏性試驗、 皮膚刺激性試驗、及眼睛刺激性試驗等。生

5、物技術醫藥品品質管制包括細胞庫 及製程的污染測試、細胞株的鑑定及偶發的病毒和反錄病毒之檢測等。非臨床試驗規範的訂定主要參照國際協調會議（International Conference on Harmonization, ICH）指導準則，經濟合作與發展組織（OECD），以及美、 歐、日等國之非臨床試驗規範。以期建立我國一般化學醫藥品及生物製劑之藥 理、毒理之安全性試驗規範，使我國之藥品研發能符合現代化標準的參考規 範，以提昇國內非臨床試驗水準。本規範編訂工作共召開編修討論及書面審查會議，藉邀請各相關衛生主管 機構、學術單位及研究機構、製藥廠商共同研商，進行符合我國醫藥品及生物 製劑之藥理、毒

6、理、安全性規範編訂，以期我國之非臨床試驗規範，能落實應 用。三版序言本署衛署藥字第87040788號公告藥品非臨床試驗安全性規範於中華 民國八十七年六月二十四日公告後，於同年六月發行單行本，迅即再版（同年 九月）。今將修正部份予以公告並將修正部份以黑粗字體表示，同時也印製單 行本，以供業界與專家學者參考。藥品非臨床試驗安全性規範Guideline for the NoclinicalPharmacology/Toxicology Studies for MedicinalProducts Application第一章新藥品許可上市之流程新藥品(指依據藥事法第七條之:新成份、新療效複方或新使用途

7、徑之藥 品)上市許可之過程可分為三部份:(1)進行臨床及非臨床試驗的安全、有效 性測試;(2)整理該藥品之實驗數據，提出申請進入人體臨床試驗 (Investigational New Drug IND)和新 藥許可上市(New Drug Application， NDA) ； (3)衛生署審核IND與NDA之申請。雖然所有的新藥都經由上述的 上市申請程序，但是每個藥品通過上市申請的過程及試驗的內容，包括臨床試 驗與非臨床試驗之試驗形態與數量都不甚相同，須視每個新藥品的性質、劑 型、用途、及給藥方式等情況而作調整。一般新藥品必須經過一系列的非臨床試驗，測定其安全性及有效性，再進 入人體臨床試驗。

8、然而長期毒性試驗及臨床試驗非常費時，為使新藥品能早日 嘉惠病患，及減少不必要的使用動物，非臨床與臨床試驗的時程可相互並行 (參見圖一之流程圖)，以短期毒性試驗之結果，援護初期的人體臨床試驗2。 本新藥品上市許可之流程(圖)適用於一般化學醫藥品開發，對於生物技術 醫藥品的安全性評估之流程(圖二)，則須依試驗物質特性而定。對於用作治 療對生命有立即威脅疾病的藥物，則須依其裨益與風險的考量進行個案評估。、非臨床試驗I所有新藥品進入人體臨床試驗之前，必須提供其安全性評估資料，包 括:(I)非臨床動物試驗數據，可以推衍至此藥品實際產生的作用;(2)臨 床試驗數據或在其他國家的藥品使用情況證明。非臨床試驗

9、包括藥理與毒 性試驗。1 .藥理試驗a,藥效學試驗(Pharmacodynamic Study，PD)藥效學試驗是評估藥物在主要器官(心血管、中樞神經及呼吸系統）的藥理作用、作用機轉、劑量和反應關係等之研究，試驗結果為 此藥開發之依據。此項試驗須在人體臨床試驗前完成。b,藥動學試驗（Pharmacokinetic Study PK）此項試驗係進行藥物之吸收、分佈、代謝、排泄方面的研究。藥 物在進入人體試驗前須先進行動物試驗，所得的藥動數據，可作為第 一期臨床試驗（人體藥理試驗）時，藥物在人體吸收、分佈、代謝、排 泄過程的指引，以及作為臨床試驗與動物試驗結果之比較。2 .毒性試驗a,單一劑量毒性

10、試驗單劑量毒性試驗須先對至少兩種的哺乳類動物進行試驗，始可 進行人體臨床試驗。哺乳類動物包含嚼齒類及非嚼齒類動物2，嚼齒 類動物一般最常使用大鼠和小鼠，近親、雜交或混合品系均可，但試 驗動物須來自健康及特性鑑定完全之種源;非嚼齒類動物一般最常使 用狗，Beagles或其他純種品系狗均可。b.重覆劑量毒性試驗重覆劑量毒性試驗的試驗週期須依該藥物將進入臨床試驗的那 一個階段及給藥期間而定（表、二）。一般動物毒性試驗須進行兩種 或以上的哺乳類動物，而試驗週期不得短於人體臨床試驗的週期。表、人體臨床試驗第一、二期與重覆劑量毒性試驗試驗週期對照表臨床試驗試驗週期a重覆劑量毒性試驗試驗週期3 2週3 1個

11、月3 3個月3 6個月6個月2週1個月3個月6個月6個月a某些狀況下，人體臨床試驗的試驗週期會依試驗需要延長，比重覆劑量毒性 試驗的試驗週期長。表二、人體臨床試驗第三期與重覆劑量毒性試驗試驗週期對照表臨床試驗試驗週期a重覆劑量毒性試驗試驗期3 2週3 1個月1個月1個月3個月6個月a某些狀況下，人體臨床試驗的試驗週期會依試驗需要延長，比重覆劑量毒性 試驗的試驗週期長。C.局部容許劑量試驗局部容許劑量試驗是以使用未來人體臨床使用的相同給藥途徑 及部位進行給藥，觀察給藥部位的反應，評估其局部容許劑量，此試 驗須在人體臨床試驗前完成。d,基因毒性試驗在進行人體臨床試驗前，一般須以體外致突變性測試方法

12、評估試 驗物質對基因之突變與染色體之傷害情形，若試驗產生陽性反應，則 須進行其他致突變性測試。標準的綜合基因毒性試驗則須在臨床試驗 第二階段開始前完成。e.致癌性試驗一般完整的致癌性試驗不需要在人體臨床試驗前進行，除非有其 他因素考量。凡對於（1）未來須持續給藥6個月以上之藥品，（2）過 去之數據顯示此類別之藥品可能引起致癌性者，（3）藥品之作用機轉 推測可能有致癌性者，（4）重覆劑量毒性之試驗結果顯示有腫瘤生成 現象之藥品，（5）藥品之成分或其代謝產物長期停留在組織中，產生 局部的組織作用或病理生理反應，或（6）基因毒性試驗結果顯示有致 突變性存在之藥品等，均應在藥物上市前完成致癌性測試。但

13、是若試 驗物質只針對有限的特定疾病或病患進行治療，且該試驗物質對病患 的治療十分有效時，可視需要而在藥物獲准上市後進行。f.生殖與發育毒性試驗生殖與發育毒性試驗應視給藥對象的需要而進行。若臨床試驗之 受試者為男性和不具生育之女性，而重覆劑量毒性試驗結果顯示該 試驗物質對生殖器官不造成任何傷害，則生殖與發育毒性第一期試驗 只須在臨床試驗第三階段開始前完成。具生育之女性可參與尚未進 行生殖毒性試驗之試驗物質的臨床試驗，但必須嚴謹、小心監控試驗 過程，包括進行檢孕檢查、使用高效率之避孕方法及在確認的生理期 後，方可進入臨床試驗，並須檢附受試者同意書，同意書須告知受試 者該試驗物質可能潛在的危險性。若

14、第三階段臨床試驗包含使用高效率之避孕方法之具生育女 性，則生殖與發育毒性第一、二期試驗須在臨床試驗開始前完成，除 非有其他因素考量，生殖與發育毒性第三期試驗可在藥物取得上市許 可前完成。若具生育之女性不使用高效率之避孕方法或懷孕情況不明 者，則生殖與發育毒性第二、三期試驗及基因毒性試驗須在臨床試驗 開始前完成。若懷孕之女性參與臨床試驗，該試驗物質須先完成生殖與發育及 基因毒性試驗，方可進行臨床試驗。g.其他毒性試驗若以上幾種毒性試驗結果顯示該試驗物質具有特定的毒性，則須 進行其他特定的毒性試驗。二 試驗中新藥之申請3若非臨床試驗結果顯示新藥品的安全性已足以進行初步的臨床試驗 時，則廠商可向衛生

15、署提出試驗中新藥申請，經衛生署許可後方可進行人 體臨床試驗。提出試驗中新藥申請時，須至少具備以下兩項資料:（1）所有非臨床 試驗之藥理作用、藥物動力學、毒性、或安全性資料，及藥品之物理、化 學性質、符合GMP規定之製造與品管步驟;（2）臨床試驗計劃書:可證 明藥品的人體臨床安全性與效用（治療、預防或診斷）之詳細臨床試驗計 劃，同時檢附其他與臨床試驗有關的資料，如試驗主持人及主要協同人員 之學、經歷及其所受訓練之背景等資料，及受試者同意書;（3）人體試驗 委員會同意函。三、試驗用藥品使用許可之審核（藥事法第五條）衛生署對試驗用藥品之申請，依個案進行審查，決定藥品的安全性是 否符合進行人體試驗的標

16、準，同時檢查臨床試驗計劃書，以確保受試者之 安全。經衛生署審核通過後，申請者即可開始進行臨床試驗。若審查過程 中出現以下所述的情況，則不能進行臨床試驗:1 .試驗用藥品之使用許可的申請資料中，並無足夠的資訊評估藥品臨床試 驗的安全性。2 .臨床試驗計畫書中所列的試驗主持人，其經驗及所受的訓練不足以執行 臨床試驗之觀察。3 .試驗主持人所依循之相關藥品的安全性與效用之資料有誤導、錯誤、或 內容不齊全之情形。四、臨床試驗4臨床試驗是藥品發展的過程中最重要也是最困難的步驟，若藥品能夠 通過臨床試驗，衛生署將根據這些臨床試驗結果決定是否核准該藥品的上 市。衛生署對進行臨床試驗的藥品有較嚴格的標準，其規

17、定為:(1)藥品 進行臨床試驗時，試驗主持人須為試驗用藥品使用許可申請書中所指定的 人員;(2)而臨床試驗步驟則須依臨床試驗計劃書中的方法進行;(3)進 行試驗的單位須符合藥品優良臨床試驗規範(GCP)的標準5,以保護病 人的權益與保持臨床試驗數據的完整。臨床試驗一般分為三個階段進行:第一階段:對2080名健康自願者給藥，以了解藥品在人體之吸 收、分佈、代謝、排泄情形及安全性，確定人體忍受 之劑量範圍，及可能引起的不良反應。第二階段:選擇至少100200位自願病患進行，以了解該藥品可 能之療效，並了解藥品在患者體內之吸收、分佈、代 謝、排泄之情況，確定治療劑量及其治療範圍。第三階段:本階段在多

18、重醫療中心或機構選擇足夠特定的患 者，進一步確認藥品之療效，並藉由多數患者之治 療，確定適應症，並偵測藥品禁忌、不良反應之發生 情形，取得注意事項、藥品交互作用等之資料。第四階段(新藥監視期):針對核准上市之新藥品，為更了解其使用情形，於上市後列入售後監視，以了解藥品之不良反應發生 情形、發掘罕見之不良反應，或了解是否有其他新適 應症。五、新藥上市許可之申請3由於衛生署是根據新藥品上市申請所檢送的試驗數據決定藥品是否 安全、有效而能上市，因此此步驟是藥品上市許可最重要的步驟。試驗單 位或廠商須依其試驗數據提出藥品許可上市的申請。新藥品上市申請文件 包含所有動物與臨床試驗的結果，詳細的藥品成分及

19、其分析資料，藥品在 製造、處理、包裝過程中的方法、設備、及條件，以及其他的相關資訊， 如持續進行中的新臨床數據，以及最終定案的產品標示。六、新藥上市許可的審核3新藥上市的審核是對藥品進行更仔細的分析與審查。若在審查過程不 利於藥品安全性與藥效的結果時，衛生署將由藥物審議委員會專家委員對 廠商提出建議。衛生署對申請案做出決定後，須行文試驗單位及廠商告知 申請案是否通過，若申請案未獲通過，會說明衛生署的決定，廠商如何改 進可以有申覆的機會，但以一次為限。若申請案通過，則該藥品即可上市 販售;若申請案須進行某些修正方可通過，則廠商須將修正過後的申請案 交由衛生署再審核，以獲得正式的上市許可。參考文獻

20、1. International Conference on Harmonisation Topic M3 Document. Guideline for the Timing of Non-Clinical Safety Studies for the Conduct of Human Clinical Trials for Pharmaceuticals”. (Step 3)2. Siglin J.C. and Rutledge G.M. (1995). Laboratory Animal Management. In: CRC Handbook of Toxicology, ppi-50

21、, Derelanko M.J. and Hollinger M.A. ed., CRC Press, Boca Raton.3. Mathieu M. (1990). New Drug Development: A Regulatory Overview. Parexel Int. Co. Cambridge, USA.4. 行政院衛生署(1994)。藥品臨床試驗申請須知。5. 行政院衛生署(1997)。藥品優良臨床試驗規範。圖、新化學藥品上市流程圖若試驗結果符合要求進行第三期人體臨床試驗!若試驗結果符合要求-E申請新藥上市(NDA)(New Drug Application)致癌性試驗重覆

22、劑量毒性試驗 (三六個月)生殖與發育第三期試驗|檢附所有相關資料向衛生署申請新藥許可1 r進行第四期人體臨床試驗（監視中的新藥上市後不良反應追蹤調査）圖二、生物製劑上市流程圖士若試驗結果符合要求申請新藥上市(NDA) (New Drug Application)上若試驗結果符合要求*重覆劑量毒性試驗 (三及或六個月)致癌性試驗進行第三期人體臨床試驗生殖與發育第三期試驗檢附所有相關資料向衛生署申請新藥許可上市進行第四期人體臨床試驗（監視中的新藥,上市後不良反應追蹤調査）樂啜密嚏瑯麻源川函新成份的生合成及純化 生物製劑應依規定執行 種源批次系統及病毒安 全性等進行動物藥理、藥動及 毒理測試製程確效

23、與 安定性試驗一非臨床試驗其他必要之毒性試驗短期（急性、亞急性）毒性試驗第一階段臨床試驗*一新藥審核臨床試驗新藥監視期第二階段臨床試驗a A平均:15個月A監視藥物不良作用 蒐集產品缺陷報告建議事先與衛生主管機關討論 |_第三階段臨床試驗孤兒藥及臨尿特殊用藥申請長期毒性試險（重覆痢量毒性試驗:三至六個月）生殖及發育毒性試驗（第一、二，三期）產品抽樣調查及再評估上市後續性追蹤調查處方藥試長及廣告監視免疫毒性試驗、基因毒性試驗、致癌性毒性試驗、長期毒性試驗平均:18個月試驗用新藥（IND）申請平均:5年新藥（NDA）申請許可證核准第二章生物製劑之非臨床試驗規範生物技術醫藥品的來源非常廣泛，且產品種

24、類眾多，涵蓋由基因工程、細 胞工程及蛋白質工程方法製造而得之藥品或檢驗試劑，基於生物製劑的多樣 性，而生物活性亦隨結構的變化而改變，因此傳統的毒性測試方法不一定適用 於此類產品，均採用較彈性的方式，依試驗物質特性而進行評估。基於生物製劑的產品類型眾多，依據國際協調會議(ICH)之指導原則，本 規範僅適用於基本的生物技術醫藥品，包括以細菌、酵母菌、昆蟲、植物及 哺乳類動物細胞等製造的生物製劑，此類產品一般應用於醫學診斷、治療或預 防，其有效成份包括經基因工程或細胞培養技術製造所得的蛋白質、胜肽、 及其衍生物等，如細胞激素(cytokines) 血纖維分解原 酶活化劑(plasminogen ac

25、tivator)、基因重組的血漿蛋白及凝血因子(recombinant blood plasma factors)、 生長激素(growth factor) 荷爾蒙(hormones)與單株抗體(monoclonal antibodies) 等。本規範中部分內容亦適用於基因重組蛋白疫苗(recombinant DNA protein vaccines)、合成胜肽(chemically synthesized peptides) 由血漿中抽取的成份 (blood plasma extracted factors)、人體組織分離之內生性 蛋白(endogenous proteins extract

26、ed from human tissue)、及寡玄甘酉受藥物 (oligonucleotide drugs) 對於細菌和病毒疫苗、基因疫苗、細胞和基因療法、抗生素、過敏性萃取物 (allergenic extracts) 肝燐脂、血球細胞成物(cellular blood component)、維生素、 及微生物等產品，將依科技的發展及國際上管理的趨勢，依個案方式另行審核。、生物製劑的品質生物製劑在生產及製造過程中可能因宿主細胞株(細菌、酵母菌、昆 蟲、植物及哺乳類細胞)的來源被污染而造成危害，受污染之宿主細胞所 製造之產品會引起過敏性反應或其他免疫病理效應。若生物製劑是利用昆 蟲、植物或哺乳

27、類細胞、或基因轉殖動物製造的，更應確定是否受病毒感 染。因此生物製劑在製程過程中必須能除去或不活化這些病毒及其他不純 物，以確保其安全性，並詳細鑑定產品中的成份，方可進入非臨床試驗。 一般非臨床試驗與臨床試驗使用之產品須做比較，若產品的製造過程有所 改變時，為確定產品在不同的製造過程中產品品質的一致性，可藉由產品 的生化特性（如性質、純度、穩定性、力價）或藥動試驗來鑑定，同時評 估此改變可能造成的影響。二非臨床試驗一般非臨床試驗的目的為:（1）決定人體臨床試驗的安全起始給與劑 量及劑量增加之方式;（2）測定試驗物質在標的器官中引起的毒性與其可 逆性;（3）決定臨床試驗的觀察檢測參數。基於生物製

28、劑的多樣性，而生 物活性亦隨結構的變化而改變，因此當傳統的毒性測試方法不適用於此類 產品時，則可考慮採用較彈性的方式，依試驗物質特性而進行評估。所有毒性試驗均需依循GLP規範進行，然而當生物技術藥品的測試 系統，無法依循現行GLP規範時，則須說明是那些試驗，及其廠內 （In-House）之GLP規範，作為產品安全性評估時之依據。1 .生物活性/藥效學試驗生物製劑的活性可利用活體及體外測試方法獲得。體外試驗包括利 用細胞株或初代細胞培養，檢驗試驗物質對細胞的反應與細胞增殖現 象。由於某些生技藥品對動物品種有很高的專一性，因此須選擇適當的 動物品種進行毒性試驗，而使用哺乳類動物細胞進行體外試驗有助

29、預估 生體之活性，例如測定受體的親和力、藥理作用，同時輔助選擇適當的 動物品種進行活體藥理及毒性試驗。藉由活體試驗評估產品的藥理作 用、作用機制，以利於評估試驗物質在臨床試驗中的作用。結合活體與 體外試驗結果，有助於預測試驗物質在人體內可能產生的作用。對於單 株抗體產品，抗體的免疫性質包括其抗原特性、補體結合、任何非預期 的作用、及對非標的器官的細胞毒性等都須詳細敘述。2 .動物品種的選擇由於生物製劑不同於一般藥品，其藥效活性具有品種或組織的特異 性，因此標準毒性試驗使用的動物品種（如鼠與狗）在此並不一定適 用，雖然一般藥品的安全性評估須使用至少二種哺乳類動物，某些情況 下，可以考慮只進行一種

30、動物試驗，但須提出說明。一般進行毒性試驗的試驗動物，其產生的藥理須與人體相關，然而 若體外非臨床試驗無法確定其相關的動物品種時，仍須進行一種動物的 毒性試驗（如14天以內的重覆劑量毒性試驗），以評估此產品對主要器 官功能（如心血管、呼吸系統）可能產生的毒性。近年來已發展出與人體疾病型態相類似的動物，這些動物具有自發 性疾病或帶著重組DNA分子（基因轉殖動物），提供良好的動物模式可 進一步測定生技藥品的藥理反應、藥動性質及藥量，同時有助於測定此 類產品的安全性。若能經由科學證明，具有特定疾病之動物亦可取代 般動物進行毒性試驗說明1。3 .動物數量動物的數目與性別須視實驗的需要做彈性的調整。每劑量

31、組的試驗 動物應足夠觀察出產品的毒性，若試驗動物數量太少，則只能觀察出產 生毒性的機率，而無法觀察出其毒性的嚴重程度。若因試驗動物（靈長 類）的數量有限時，則以提高觀察的頻率與期間來彌補此種限制。一般 試驗須雄、雌兩性並用。4,給藥途徑非臨床試驗中使用的給藥途徑、給藥頻率及時間應盡量與臨床所用 的相同，但須考量產品的藥動性質、生體可用率，及對試驗動物較安全 與人道的劑量。若試驗物質的主成份溶解度較低、或試驗動物具較佳的 藥物移除能力，可藉增加對試驗動物的給藥頻率，使試驗動物的給藥劑 量與臨床使用劑量間相近。若由於生體可用率、動物品種（生理性質、 大小）等限制而不能以臨床藥物給予途徑給藥，則可採

32、用替代的給藥方 式。5 .劑量選擇劑量須包含會產生毒性、能達到劑量反應，及不造成任何不良反應 （No Observed Adverse Effect Level NOAEL）的劑量。若試驗物質的毒 性較低或不具毒性，無法確定最高劑量之極限，則須提出劑量選擇的依 據，並應包含數倍於人體使用劑量的劑量。最高劑量之選擇應依據藥效 與生理作用、試驗物質的取得及臨床使用情形。若動物細胞對試驗物質 的親和性或效能比人體細胞低，則應進行更高劑量的試驗。每種生物製 劑的安全劑量範圍及臨床應用均不盡相同，利用數倍於人體使用劑量的 劑量有助於決定適當的安全劑量範圍及臨床應用。試驗動物給予試驗物 質時，須考慮每種動

33、物之每次最高耐受劑量，若超過動物本身負荷時， 應分次適當給予，以逹試驗之目的。6 .免疫活性大多數生物製劑在動物活體中都具有免疫性，因此應在重覆劑量毒 性試驗中測量抗體與該生物製劑結合的量，同時鑑定抗體反應的特性 （中和性或非中和性），以了解其與藥動、藥效或毒性變化的關係。在數 據分析時，須評估抗體生成對藥動或藥效參數、不良反應的發生與程度 的影響，及抗體是否產生新的毒性。不能只憑偵測到抗體而作為終止非臨床試驗或修改試驗的時間的 標準，除非免疫反應能夠中和該生物製劑對動物活體的藥效或毒性作 用。一般動物對不同基因工程蛋白的免疫反應不同（人體亦然），須評 估因免疫補體等成份的形成或沈澱而導致的病

34、理改變，並配合以上各項 因素評估其安全性試驗的數據。動物活體與人體對生物製劑產生抗體的反應並不相同，所以即使動 物活體中產生明顯的抗體，人體卻不一定會有相同的反應。如以天竺鼠 進行蛋白質產品的過敏性試驗通常會呈陽性反應，但此現象極少可能發 生於人體。因此，評估免疫活性試驗結果時，須考量此試驗是否適合用 來預測人體的反應。三毒性試驗非臨床試驗的目的為在進行人體臨床試驗前及臨床應用時決定試驗 物質的藥效與毒性效應，若生物製劑的結構及藥理作用，特別是藥動形態 與市售品相似，則可減少毒性測試的項目。1 .安全藥理試驗藉著適當的動物模式，觀察生物製劑在活體中產生任何非預期的藥 理作用，並在毒性試驗或臨床

35、試驗時觀察此藥理作用。安全藥理試驗可 提供毒性的功能指標，這些功能指標可由獨立的試驗加以觀察或在進 行毒性試驗時加以觀察。安全藥理試驗的目的為鑑定主要生理系統的功 能作用，可藉著離體器官或其他體外的測試系統，觀察生物製劑的藥理 性質評估其對特定器官的功能的影響。2 .毒性與藥動學試驗（吸收、分佈、代謝、排泄，ADME）2一般最常用的毒性與藥動學試驗為單劑量藥動與組織分佈試 驗，但生物製劑很難依一般的毒性與藥動學試驗規範進行，因此試驗並 不能評估生物製劑在活體中之組織分佈、累積及排除情況。動物品種間 ADME的差異對預測臨床現象的能力，及評估劑量與作用間之關係有 很大的影響。藥動形態因免疫之清除

36、機制作用的改變，將會影響ADME 形態與毒性數據的分析。ADME試驗所使用的試驗物質應足以代表使 用於臨床的藥物，而給藥途徑亦須使用與臨床使用的相近。a.分析方法視試驗需要並依科學方法決定使用的分析方法，一般而言，一種 評估分析方法已足夠。若分析中有使用放射性標記的試驗物質，則須 確定該放射性物質的活性與生物性質與原試驗物質相同。動物試驗與人體臨床試驗最好使用相同的分析方法，同時評估血漿與蛋白質或抗 體對分析方法的影響。b.動物品種的選擇使用與藥理及毒理試驗結果能相互比較，同時與人類相關的動物 品種。c,吸收觀察試驗物質的吸收與生體可用率的特性，以及其與玲菓途徑的 關係。吸收試驗可與毒性試驗併

37、進行，吸收形態會受試驗物質的配 方或劑量的影響。在進行臨床試驗前，應先取得相關的動物吸收資 訊，以決定安全劑量及給藥方式。d.分佈組織分佈與清除機制之試驗有助了解試驗物質的藥理與毒性性 質。由於放射性胺基酸追蹤劑會因蛋白質生成，而進入不相關的蛋白 質或胜肽中，因此使用具放射活性的胺基酸追蹤劑須小心控制。e.代謝生物製劑的代謝途徑較傳統藥品簡單，因此動物品種間的代謝差 異並無很大的影響。代謝形態的鑑定方法有很多，例如免疫化學偵 測、色層分析、SDS-凝膠電泳分析等。f.排泄生物製劑的排泄牽涉到不同的器官系統與作用機制，因此試驗須 觀察各個器官的排泄速率。單劑量毒性試驗至少使用一種的動物進行，觀察

38、劑量與全身或局 部毒性的關係，輔助選擇重覆劑量毒性試驗的劑量。同時可由藥理試驗 或單一劑量毒性試驗觀察試驗物質之劑量與作用的關係。4 .重覆劑量毒性試驗試驗應使用與臨床的給藥途徑及給藥頻率相同的方式。若試驗需 要，試驗方法應包含觀察試驗物質的毒性動力學2。一般重覆劑量毒性 試驗須測定試驗物質在復原期會否引起藥效或毒性增強作用，及遲發性 的毒性作用。重覆劑量毒性試驗的給藥週期須依藥品臨床使用的給藥週期及應 用而定，一般生物製劑的給藥期間為1-3個月，若產品為短期使用（七 天以下），或針對急性重大疾病，則兩週之試驗數據已足以提供藥品進 行臨床及上市所須之資料。若產品是治療慢性疾病，則給藥期間為6

39、個月。5 .免疫毒性免疫毒性試驗包含免疫活性與過敏性評估。許多生物製劑會引發或 抑制免疫系統。注射部位產生的感染反應可視為引發反應，同時，若動 物產生自體免疫的現象，表示標的器官的表面抗原之表現有所改變，免 疫毒性試驗可用以釐清這些現象。6 .生殖與發育毒性試驗生殖與發育毒性試驗是依據生物製劑的性質、臨床應用及給藥對象 來決定是否需要進行。若需要評估生殖與發育毒性，試驗內容與給藥頻 率須依試驗動物品種特異性及抗原性修改說明2。一般基因毒性測試方法並不一定適用於生物製劑，因無法分析動物 經投入大量的胜肽/蛋白質物質而得的數據結果，同時生物製劑一般不 會與DNA或其他染色體物質直接結合作用說明3

40、但若有其他因素 考量，如蛋白質產品含有有機連接物或外來DNA等成份，則須進行基 因毒性試驗。8 .致癌性試驗生物製劑須視臨床給藥的時間與給藥對象決定是否須進行致癌性 評估，當嘴齒類動物不是該產品評估毒性或免疫性的特定品種一般傳 統致癌性測試方法並不適用，則以其他試驗方法評估其致癌性。生物製劑可能會引發細胞變型增殖或造成單株細胞大量增殖而產 生腫瘤者可能情況下，應進行致癌性試驗，以評估該生物製劑是否刺激 惡性細胞的形成、增殖或誘發惡性細胞在正常人體產生的生長能力。若 由體外試驗發現生物製劑有誘發腫瘤之可能，則須對相關動物進行活體 試驗。若生物製劑在嚼齒類動物活體中有生物活性且無免疫性，可考慮使

41、用一種動物進行致癌性的評估。進行試驗時須小心選擇給藥劑量，可依 據生物製劑的藥動學與藥效學試驗結果、受體的特性、及人體使用臨床 劑量選擇最適當的劑量。9 .局部容許劑量試驗一般欲上市生物製劑的配方須進行局部容許劑量測試，但若特殊情 況，也可測試其代表性的配方。同時，生物製劑的局部反應可藉由單 劑量或重覆劑量毒性試驗所得之資訊進行評估。説明1 .利用具有疾病的動物模式進行試驗有助於決定毒性終點、選擇臨床劑 量、並決定適當的處方，但此種試驗一般無相關試驗數據可作為評估試 驗結果的參考，因此進行試驗時須同時收集對照與基線數據，以作為試 驗的比較。2 .若有充足的類似化合物之生殖與發育毒性資訊，而唯一

42、相關的動物為靈 長類動物，且反應機制試驗顯示新藥物會產生相似的作用，則可免除生 殖與發育毒性試驗。3 .生物製劑會在動物體內累積產生自發性突變細胞，可視為致癌物質，而 標準的一般基因毒性試驗不適用於此類產品，則應以其他體外與活體試 驗方法進行評估。參考文獻1. International Conference on Harmonization Topic S6 Document “Prechmcal Testing of Biotechnology- Derived Produc.(Step3)2. International Conference on Harmonization (1995

43、). Guideline on the Assessment of Systemic Exposure in Toxicity Studies 60(40): 11264-11268第三章生物製劑之品質管制生物技術醫藥品的來源非常廣泛，且產品種類眾多，涵蓋由基因工程、細 胞工程及蛋白質工程方法製造而得之藥品或檢驗試劑，基於生物製劑在生產及 製造過程中可能因宿主細胞株的來源被污染，使所製造之產品會引起過敏性反 應或其他免疫病理效應，而造成毒害。若生物製劑是利用昆蟲、植物或哺乳類 細胞、或基因轉殖動物製造的，更應確定是否受病毒感染。因此生物製劑在製 程過程中必須能除去或消滅這些病毒及其他不純物，以

44、確保其安全性，並詳細 鑑定產品中的成份，方可進入非臨床試驗(參見圖)I。生物製劑之製造過程因產品性質不同而改變，須依產品之特性進行品質管 理及測試。生物製劑的絕對純度會因醺化作用(glycosylation)、脫醯胺作用 (deamidation)或其他異質性而難以測定，而這些變化會影響生物製劑之生物活 性、穩定性、免疫毒性及安全性。一般生物製劑的性質可利用相關的物化、生 化及免疫化學分析方法鑑定說明1。基因工程製劑及疫苗等以細胞成份生產的製劑，其製造管制須符合種源批 次系統(Seed Lot System)(表)，種源批次系統的組成包括(1)種源細胞庫 (Master Cell Bank ,

45、 MCB) (2)工作細胞庫(Manufacture Working Cell Bank MWCB) (3)最終產品細胞(Maximum End-of-Production Cells，MEPC)2 一 細胞株的鑑定2,3基因工程蛋白質的製造須基於定義良好的種源細胞庫(MCB)與 作細胞庫(MWCB)說明2。細胞株須經過無菌及黴漿菌(mycoplasma) 之測試，細胞株之歷史及細胞庫的製造須詳細敘述，包括細胞培養方法與 使用之試劑、體外細胞的代數與儲存條件，同時各細胞庫須標明其基因型 (genotype)與表現型(phenotype)，包括重組蛋白質的表現或重組基因載體 構造的表現，並對MC

46、B中的表現基因載體構造進行鑑定，若無法對MCB 進行測試，則應對每個MWCB進行測試。種源細胞庫(MCB)表現結構 之分析方法:1 .使用Restriction endonulease mapping或其他適當的技術分析表現基因 載體構造的複製數目，插入或刪除、及連結位置個數。對於 extrachromosoma!表現系統，則測定原有表現基因構造之宿主細胞所佔 之百分比。2 .確定表現基因載體構造之重組蛋白質的蛋白質序列(protein coding sequence) 對於extrachromosoma!表現系統，則分離表現基因載體構造 並確定產品的核酸序列。對於具有表現基因載體構造之複製染

47、色體細 胞，可由複製染色體的再複殖與定序確定其核酸序列。3 .生物製劑的核酸序列可以其他的技術加以確認，如sequencing of pooled c-DNA clones 或 polymerase chain reaction 技術 二細胞庫及製程的污染測試4一般由細胞株製造之生物製劑常會有受到病毒污染的危險，這樣的污 染會在臨床上造成嚴重的後果，且污染可源自於來源細胞株或生產過程。 因此在製造過程中須進行病毒偵測試驗，以確保所使用的細胞成份安全無 虞，無有害的病源體污染。1 .病毒來源生物製劑的病毒污染可能源自於細胞株的來源，或在製造過程中引 入病毒。a.內源性的病毒污染細胞可能受潛伏或殘存的病毒感染，或由代代細胞垂直轉移的內 源性反轉錄病毒感染，而這些病毒會以原性質呈現或呈現感染性病 毒。MCB受病毒感染的途徑有:(1)由受感染之動物的細胞株感染， (2)使用含病毒細胞建立細胞株