仪器设备标准操作规程.docx

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1、仪器设备标准操作规程江苏市中医药研究院中医药分子生物学卖瞼金2008-2-29冷冻干燥机标准操作规程1BF410发酵罐标准操作规程4ZEISS荧光倒置显微镜标准操作规程6BECKMAN台式髙速冷冻离心机标准操作规程16PROTEAN IEF等电聚焦电泳仪标准操作规程17Protean I!电泳槽标准操作规程18PROTEAN Plus Dodeca Cel! 标准操作规程20PowerPac Universal电泳仪标准操作规程23全波长酶标仪标准操作规程(Skanlt software 2. 2) 24髙压匀质仪标准操作规程(触屏操作)32Avanti J-26p落地式大容量高速离心机标准操

2、作规程34蛋白纯化系统标准操作规程35Elix/Rios纯水仪标准操作规程37MILLI-Q超纯水纯化系统标准操作规程39台式普通离心机标准操作规程40台式低温冷冻离心机标准操作规程41髙压蒸汽灭菌器标准操作规程42Eppendorf Research Pro电动移液器标准操作规程43多道移液器标准操作规程45普通移液器标准操作规程47Mini Pellicon超滤系统标准操作规程48大型蛋白超滤系统标准操作规程50Mini Protean电泳槽标准操作规程52UVP高性能紫外透照仪标准操作规程54HERAcell培养箱标准操作规程55C.B.S液氮罐标准操作规程59MMM ECO CELL干

3、燥箱标准操作规程60A2型生物安全柜标准操作规程63超低温冰箱标准操作规程65BI0-RAD1575洗板机标准操作规程66SANYO制冰机标准操作规程68SANYO层析柜标准操作规程69奥林巴斯显微镜标准操作规程70备 注71冷冻干燥机标准操作规程各键介绍Turn and Push button:导航键Standby：停止键Run：运行键/mbar：蒸汽压曲线对照LockAJnlock：锁定键。长按该键2秒钟后,各键将会锁死,避免误操作, 再次长按2秒可解锁。二 Option 菜单导航键旋转至option,按下确认。A:选择contrast可以改变液晶显示对比度;B:选择language可以选

4、择语言（英语和德语）；C:选择 MISC,出现下级菜单（Date/Time, Vacuum Pump, Process , Calibration, Ulock , Security, Close）5选定 Date/Time 用于设定系统时 间;Vacuum Pump显示泵油使用时间;Process用于选择冻干类型（Process A 或者 Process B）三Values菜单选中Values后，在下拉菜单中选择show value window,冻干的设定参 数和显示参数将采用大字体对比显示。进入该显示界面以:如果再用导航键移至Values确认,下拉菜单中将多 出选择项 Display c

5、onfiguration,旋转至 Display Configuration,并确定,则可 以自定义调整各实际参数的位置等；选择Show Mimic Diagram,系统将回到 原始:窗口。四设定冻干过程参数Value-Set Values for Manuel-Mode然后可以使用导航键下按（选择和退出该单项）或旋转（改变该单项参数），例如:当光标移至 Normal Main-drying （或者Final Freezing 等）。按下导航键,则进入主干燥（或后干燥等）的参数设定。然后继续旋转 导航键至隔板温度（ShelfT）,真空度（Vacuum）,安全压（Safety Pressure）

6、 并按下,则可以通过旋转导航键来改变各项数值）。五 Manuel Mode使用导航键到Manuel,并按下进入Manuel Mode ,然后可以通过旋转 和按下导航键选择Freezing （预冻）、Freezing+Warm-up VP（预热真空泵）、 Main-Drying （主干燥）、Final-Dring （后干燥）启动干燥过程。各过程设定详 见上节。六 Program用于新建、存储、修改、复制、删除冻干程序,可存储30个自定义冻干 程序,每个自定义程序可以分为32步连续进行。其中Load用于载入已有冻 干程序,Modi内用于修改程序,Copy用于复制冻干程序，Delete用于删除冻 干

7、程序,New用于新建冻干程序，Insert Sec用于插入新的步骤,Delete Sec 用于删除新的步骤,Add. Set Values用于设定真空泵的预热时间。预热完毕 程序自动执行各步。编辑冻干程序方法:将导航键移至SECTION-NO,并按下导航键,然后 旋转导航键使需要改动的步骤进入编辑框,然后再次按下导航键,旋转导航 键至需要改动的各参数,通过下按选择需要更改的参数,通过旋转改变数值 大小。七 各参数设定完成后,按下RUN按钮。通过MANUEL菜单选项启动冻干步骤。 注意：真空泵有1-2分钟的延迟时间,等待后会听到泵启动的声音。 结束后,按下Standby,手动排气 九 自动除霜时

8、,导航键选择Manuel,选择defrosting。冻干机注意事项该机使用环境温度决不可以大于25C,否则系统压过高会导致机器产生故障。 样品在一80C至少冷冻2小时,最好过夜,样品厚度不超过!cm,如果是 放在托盘上的样品,托盘也要预冻。二打开真空泵,预热30分钟,以确保真空泵处于高温的状态,以减少溶剂蒸气在泵油中聚集,造成泵油变质,从而损坏真空泵润滑性,加速真空泵的损坏。三空气振流阀在主干燥中打开,在干燥后期可关闭,打开振流阀的目的是更好地导出泵内的有害气体,关闭是为了更好的抽真空,稳定真空度。四打开冻干机,迅速放置预冻过的托盘、样品。五关闭橡胶阀和排水阀。六如果接外挂瓶,压定要降到1.0

9、3mbar以下方可挂外挂瓶,等压下降,瓶子吸紧真空数值显示向下后方可松手,需要再次挂瓶时必须挂好该 瓶后压再次至1.03mbar方可进行另个瓶子的操作。七冻干后，关闭真空泵，若有微通气阀或进气阀就使用微通气阀或进气阀,若没有,则使用橡胶阀缓慢进气,当显示800mbar以后方可略为开大进气 阀。注意:放气一定要缓慢，800mbar后可适当加快，否则会冲坏真空传 感器。八如果要取外挂瓶,手托住外挂瓶然后关闭橡胶阀,再拿下瓶子,等压再降至1.03mbar以后可以取另外一个瓶子，否则压回升过快会导致其 它瓶子脱落。九关闭冷阱电源,打开排水阀,擦干冻干腔中的水。将真空密封罩移去,正面向下放在旁边,不用时

10、绝对不可以盖上。十设置真空泵使用时间,每500小时换一次真空泵油。H初次使用真空泵100小时,换油一次,以后每500小时更换一次。准备工作1 .检查水电是否正常,水压应在2-3公斤,水压不足会使灭菌时间延长甚至达 不到灭菌温度。2 .将配好的培养基等用量桶从接种口倒进发酵罐。3 .进行PH电极校准,校准完毕将PH电极装进发酵罐。4 .检查其他电极的连接是否正确,检查各接口是否拧紧。5 .拉出进气口定位销,向上提起进气管,将其固定在灭菌位;关闭尾气冷凝器 管路上的阀门。6 .检査并水压正常,确认阀门已经开启。二灭菌1 .在触摸屏上设定以下参数:AGITAITON：设为PID状态,设定转速为250

11、RPM, TEMP ：设为P1D状态,工作温度根据用户需要设定 AIR ：设为PID状态,通气量为1:12 .触摸屏上点击STERIZE菜单,进入灭菌参数设置界面,检查各参数是否正确:EXHAUST TIME： 1-2 分钟HEATB： 100STERIZE TIME：由用户根据培养基组成设置,一般在30分钟左右 VALAVE SEQUENCE与SHUT DOWN在安装调试时已经设好,一般不需 要重新设置。3 .灭菌参数设置完毕后,点击STERIZE按钮,启动灭菌。4 .灭菌过程自动完成,此时可进行接种，酸,碱，以及其它准备。三接种及发酵:1 .灭菌完毕拉出进气口定位销,放下进气管,打开尾气冷

12、凝器管路上的阀门。2 . DO校准：零点校准：通常采用拔下电极联线的方法。100%校准:将转速设定比正常转速高200RPM,通气量1:1等待10分钟左右 将此时的DO设为100%,校准完毕,将转速设为正常值。3 .安装取样器:将通气量降到0.5-1SLPM,用酒精擦拭下取样后装上经过 灭菌的取样器。4 .PH校准:如有必要,可以取样后用另一精密PH计校准PH电极。5 .接种：将通气量降到0.5-1SLPM,然后打开接种口,在火焰保护下倒入菌种 接种完毕将接种口盖紧。6 .保持步5的通气量,进行酸,碱,营养,消泡剂等的连接,连接完毕,将通 气量恢复正常。7 .如有需要可进行有关参数的联动设置,如

13、果购买了数据记录软件,此时可启 动数据记录。8 .进入正常发酵状态,根据需要进行取样检测,补充酸,碱,营养,消泡剂等。四下罐及清洗:1 .发酵结束后，关闭除通气外的各参数,并把通气降到1SLPM,用无菌管道连 接收获容器及底部阀门,打开阀门即可收获发酵液。2 .收获完毕,关闭阀门及通气,进行清洗冰检查有无垫圈需要更换,以备下次 发酵。ZEISS荧光倒置显微镜标准操作规程一 ZEISS显微镜日常使用的注意事项1 .显微镜开关时卤素灯电压应调至最低。2 .转换物镜时,应旋转物镜架,不要直接转物镜。3 . 荧光光源汞灯由于使用寿命短,为保证尽可能的延长使用时间和安全,汞灯 电源开/关间隔时间必须大于

14、三十分钟。4 .显微镜的各光学部件应调节到位（如,DIC插件,荧光滤片,物镜等）,以 免影响显微镜的正常工作。如果不到位,那么观察时通常会看到月牙形阴影.5 . 使用油镜时应使用ZEISS所配专业用油，不要用其它介质（如香柏油），以 免损伤镜头。每次使用完油镜后,需将油镜擦拭干净（物镜及玻片）。（正 置显微镜,油滴在样品上。倒置显微镜,油直接滴在物镜上。）6 .不要用手直接触摸光学部件的表面（如物镜，荧光模块,目镜等）,以免留 下手指印在上面,影响观察效果。7 .在拆卸全自动显微镜的聚光镜,荧光滤片盒（倒置显微镜）等部件时,应 在断电的情况下进行操作。8 .因为各款ZEISS显微镜的有效工作距

15、离/特性等各有不同,使用前应充分了 解所用仪器的特性及观测范围,以免因不恰当的操作,对显微镜及其配件 造成损害。提示:L观测样品时（特别是金相样品）,切不可将物镜撞及样品,以免将物镜 镜头压碎。2.移动显微镜时,应做到小心轻放,以免因震动而对光学部件及光路造 成损害,影响显微镜的使用。（建议移动显微镜时,先将各光学部件拆 除,移位后,再重新安装。）二ZEISS显微镜的日常保养及日常维护1. ZEISS显微镜日常的般保养1）显微镜每次使用完毕后,应切断电源,并罩上防尘罩。2） 不要将显微镜放置在潮湿的房间内,保持良好的通风。显微镜室的温度应 保持在+10+35度之间,湿度在+35度时不超过75%

16、。建议配置除湿机。3） 显微镜的各光学部件,如长期不用,应取下妥善保管,建议放置在干燥皿 内。4）不要用手直接触摸光学部件的表面（如物镜，荧光模块,目镜等）,以免留 下手指印在上面。2. ZEISS显微镜的清洁1）去除光学部件表面的灰尘,应使用软毛刷,洗耳球,擦镜纸或长纤维的脱 脂棉签。2）去除可溶与水的污物,用适量不含有害物质的清洁剂加水进行擦拭。3）去除油或油渍（手指印）,用长纤维的脱脂棉签蘸特别配制的光学清洁溶剂 进行擦拭。提示:1.擦拭光学部件表面时,应先用洗耳球去除光学部件表面的较大灰尘颗 粒，以免在擦拭时划伤光学部件的表面。再用棉签从光学部件表面的 中心开始,由内向外画同心圆进行擦

17、拭,用要均匀,不能太过用。 不要用同一根棉签反复擦拭光学部件的表面;擦拭方法如下图所示:2 .光学清洁溶剂配置（70%分析纯无水乙酸+30%分析纯无水酒如何将镜头纸卷绕在根木棒上如何将镜头纸卷绕在您的手指上尖部沾上一的清洗液擦拭方向（从中心往外成螺旋形擦拭）精）。3 .荧光模块等经过特殊处理的光学部件,不应用任何溶剂进行擦拭, 以免受损。4 .禁止使用苯类溶剂。5 . 在擦拭霉斑时,应先于ZEISS维修部联系,以免因使用的溶剂对光 学部件造成损伤。三一般观察方式的调节1.明场（任何染色的片子）拍摄明场图像主要就是考虑白平衡和平场问题。因此显微镜的调节也 要围绕这两个方面来调节。显微镜可能需要设

18、置主要有以下部分:（先调节 好柯勒照明,详见后文）1） 将荧光滤镜轮转到空位,聚光镜转轮位置也放在空位（0、BF或H） 定不要使用PH或C或Do2） 透射光滤光片除了 GIF （绿色）外建议均使用（NCB （日光平衡片）,这 样就不用提高电压也可以提高色温,使得背景光为白色。3） 放入需要观察的片子,调节调焦装置,使得图像最清楚。4）调节聚光镜孔径光栏的位置,使之于物镜的数值孔径对应。（经验值是 数值孔径数值X 0.7）,这样观察的图像的对比度是最佳的效果。记住每 个换个物镜都要改变其位置。5）使用相机拍摄张图片,看看是否偏色和光场不匀。如果偏色那么就使用 相机带的白平衡设置软件来进行白平衡设

19、置。如果光场不匀那么使用相机 软件中的平场校正来校正。2. 暗场1） 原理对于透明样品,例如没有染色的生物样品,像细菌或者活的培养的细胞等通常在透射光的情况下很难被看见或看不清楚。但是如果使用暗视野 观察法（样品通过比观察的范围要大的环型光照明）这些都将被观察的很 清楚。对于只有散射和衍射的暗场来说,成像最重要的就是直射光不能进入物镜, 这也是暗场可以观察更细微的机构的原因之一。有时候在透射光下看起来 比较暗的结构在暗场下将变的很亮。2）暗场配置a）带暗场环的万能聚光镜。b）消色差消球差万能聚光镜0.9H/0.8-0,9DF。c） ICS物镜可使用的最高数值孔径为0.75,如果要使用更高的数值

20、孔经的物镜 则一定要配备数值孔经为121.4用油的暗场聚光镜。3）暗场设置a）先调节柯勒照明。但是这里使用最高的数值孔经物镜代替10X物镜。b）取下个目镜,通过目镜筒确定暗场环在视野中心,如果不是则调节至中心 位置。c）调节暗场环中心位置,使用1.5的螺丝刀按照位置调节,通过目镜筒可以观 察到调节的状态。注意:a）由于带有内值孔径光阑的物镜的孔径相对于透射光暗场的要求来说太 大了,所以孔径光阑必须关小到0.65孔径以下。b）显微镜暗场的观察要求样品必须非常干净,像指纹,灰尘等都会对观 察的细节造成严重的影响。因为他们会使背景变得很亮,减少了观察 样品的对比度。3. 相差1） 原理相衬显微技术最

21、适合检测薄的非染色样品,例如细菌细胞。人眼不能 看出不同细胞成分之间相的差异（折射率和厚度的差异）。相衬显微技术使用光学元件相板和“相环”和中间图像信息的干涉作 用,将较小的相差转化为眼睛可以看到的强度和颜色的差异。高强度的直射光部分被环形通道（光学定义是“相板和相环“）衰减, 并产生恒定的相变。而在细胞的不同组分上衍射的非直射光线则不受这 光学通道的影响,只受样品中同相折射率和厚度差异的影响。在中间图像平面中,受不同影响的部分光线发生干涉,根据相位置的不 同,产生了增强或衰减。这干涉的结果就使图像的内容在强度和颜色上 显示出了人眼可以看到的区别。拍摄相差图片主要考虑的就是相差环和物镜的配合。

22、2） 配置a） 带有适用于不同的平均数值孔径的Phi、Ph2或Ph3相环的物镜,这种物镜 也可不受限制地适用于明场观察。b） 带有转盘的万能聚光镜,转盘中装有适合于不同平均数值孔径的Phi、Ph2 和Ph3相板。聚光镜上插入的相板必须与物镜上的相应标签相一致,例如, Phi 3）设置透射光相a） 将相衬物镜,例如,标有Ph 1的物镜转进光路。b） 插入万能聚光镜转盘上与相衬物镜标签相同的相板,例如,Phi相板。c） 如果要检查较亮的相板（在聚光镜上）和较暗的相环（在物镜上）是否重 合,请从观察筒上取下个目镜,换上辅助目镜上的校正装置对物镜出口 图像中的相板和相环进行聚焦。4）显微镜主要状态设置

23、如下:a） 荧光滤镜轮转到空位,聚光镜孔径光栏打到最大位置（或PH位置）。b） 聚光镜转轮要根据物镜来选择使用哪个,5X使用PHL/PHO, 10X和20X使用PHI, 40X使用PH2, 100X使用PH3。这些都写在物镜上。c） 透射光滤光片除了 GIF （绿色）外均可使用NCB （日光平衡片）一定要使 用,这样就提高色温,使得背景颜色更白些。d）拍摄相差图像时就可以直接拍摄黑白图像。因此可以使用相机的黑白模式 来拍摄。使用相机拍摄张图片,看看是否光场不匀,如果光场不匀那么 使用相机软件中的平场校正来校正。5）相差环的调节方法如下:相差显微镜安装完成后,先调节柯勒照明,然后将目镜取下,换上

24、调 中望远镜（或使用目镜筒中集成的伯兰特透镜），将物镜和其对应的相差环 放入光路,调节调中望远镜的高低,直至可以清楚的看到个黑色的圆环 和一个亮的圆环。调节的目的就是将这两个环重合。调节是通过调节聚光镜上的相差环上的调节螺丝来完成的。4. DIC观察1) 基本原理透射光DIC是一种使用偏振光来加强明暗对比的种观察方法。使得 透明的样品可以观察到非常清晰逼真的3D效果。光经过双折射棱镜后分裂成两束。这两束光分别投射到距离很近的两 个样品区域上,由于屈光度和样品厚度的差异造成了光路距离的差异。两 束光在另块双折射棱镜后聚集,在通过检偏器后,以相同的振荡距离衡 量。所以,两束光在中间图像中相互干扰,

25、折射路径的差异导致了灰度值 (密度)的区别。DIC只适用于样品的载体是玻璃的情况。如果是采用塑料的培养皿等 就不会观察到应有的效果。2) 配置条件a)配置DIC的物镜，如Plan-Neofluar。b) 与物镜相匹配的DIC滑块。c) 装有D1C棱镜(DIC I, DIC II, DIC III)转轮的聚光镜。d) 起偏器,如带有二相滤镜转换器的D模式。e) 检偏器,一定要选择可以装在反射光转盘上的模块。0最好配备可旋转的机械载物台。3) DIC设置a)选择适当的DIC物镜,将匹配的DIC滑块推入物镜转换器上的插槽。保证DIC滑块插到位。b)反射光转盘,转入检偏器模块。C) 聚光镜上转入于物镜

26、相匹配的DIC模块。d) 按照柯勒照明调节视场光栏和孔径光栏。e) 旋转DIC滑块上的旋钮来调节最适宜对比度。如果想得到更好的效果,还可以在物镜转换轮上加入?I补偿片来观察彩 色的DIC。对于63X物镜,对于不同的样品可额外选择高分辨率DIC滑块和 高对比度滑块。5.荧光观察和拍摄1) 原理对于发出传统荧光色的荧光体来讲,落射荧光技术可以保证获得高对 比度的图像。在落射荧光显微镜中,大功率照明器发出的光线通过热反射 滤片到达激发滤片形成激发光。激发光经过二色分光镜反射形成比较单纯 的短波长激发光,通过物镜聚焦到样品上。样品吸收短波长激发光,发射 出长波长荧光(STOKE定律),发射光由物镜获取

27、,穿过二色分光镜。最 后,发射光通过吸收滤片,保证只有来自样品的长波长发射光通过。安装 在荧光反射模块的激发滤片和吸收滤片以及适当的二色分光镜必须完全匹 配。2) 配置a) 推荐物镜:PlanNeofluar or Fluar objectives (UV excitation)b)带荧光模块的反射滤镜轮c) 100W的汞灯照明器d) 100W的卤素灯作为透射光的光源3) 设置a)打开卤素灯。b)旋入20X物镜。c)首先转入聚光镜H位,使用透射光聚焦好样品。d)在打开汞灯之前确保FL光路关闭。e)打开汞灯电源,预热15分钟。f） 在发射镜转盘上选择含有所需荧光滤片组（根据激发光）的荧光反射镜模

28、 块,然后转入光路。g）将光路中的反射光快门打开,关闭透射光。h）从双目镜筒中拿走一个目镜,通过镜筒调节孔径光栏至可见,然后通过 调 节钮调节其至中心位置。i） 重新放回目镜,关闭视场光栏至眼睛可见,如果需要调节其至视场中心, 然后打开视场光栏至其视野中刚好看不见位置。j） 最后,重新调焦至样品清晰,调节汞灯,使其工作在最佳位置。尤其是当 使用短波长激发光时,使光场尽量均匀。长波长时不用考滤其位置。注意:在使用落射荧光时,确认汞灯已经按照调节好,已经将补偿器DIC Slider移出光路。四 显微镜调节一般步骤（柯勒照明）1. 放张你即将观察的样本,使用明场照明状态（聚光镜转轮选择H或BF,荧

29、光滤镜轮选 择空位,DIC附件全部拉出光路,照相光路转换到观察状态）。 10X物镜,通过粗调和微调将其调节到样本能观察到的最清楚的状态。然后 不要再动调焦螺旋。2. 将视场光栏和孔径光栏调到最小的状态,如果显微镜的调节状态正确的话, 此时在视野中应该可以看到个边缘清楚的多边形。如果看到的不是个边缘清楚的多边形,则说明光路中的聚光镜上下位置 不准确,此时通过调节聚光镜左手侧的上下调节旋钮使得视场中形成一个 边缘清晰的多边形,此时的聚光镜位置就是最佳位置,以后的调节或观察 的时候都不要再移动其位置了。3. 视野中的多边形的正确位置应该是在视野的正中心,如果不在说明光路有偏移,需要调节柯勒照明光路调

30、节旋钮（聚光器对中螺钉）通过调节聚光 镜上的柯勒照明光路调节旋钮（两个银色的旋钮）使多边形在视野的中心。4. 将视场光阑慢慢放大,当多边形正好外切于视场的时候就是视场光栏的最 佳工作位置。在此过程中其他位置的调节不可以再动。5. 保持聚光镜,视场光栏和聚光器对中螺钉的位置,以后不要再调节其位置。6. 取下一目镜,将孔径光阑调至视域的2/3,再装回目镜。至此,库勒照明系统调节完毕，基本上就可以正式观察和拍照，使您能得到个满意的观测 效果。孔径光阑:其主要作用是调节进入视场的光的多少，这个对于观察和拍摄图 片来说都是很重要的。它同时控制分辨率、对比度、景深等要 素。它们不能各自独立的进行调节。分辨

31、率对比度景深光亮度孔径光阑全开高低浅亮孔径光関关小低高深暗孔径光阑的调节是要和物镜上的数值孔径对应的,经验值是数值 孔径数值X0.（如10X物镜的数值孔径是0.30,那么对应的孔径光栏的调 节位置就应该0.3X0.8 = 0.24）。附录:物镜是显微镜的光学核心。以下是物镜标志实例。ACHROPLAN 10x/0.25oo/0,17此处:10X:物镜放大倍率,物镜上还有标示各放大倍率级别的代表色环 （蔡司公司色彩代码）。0.25;数值孔径。8 ：无穷大图像距离。这类物镜只能用于蔡司公司的ICS显微镜。0.17:只能与厚度D=0.17毫米的盖玻片起使用。或者一：只能与厚度D=0或0.17毫米的盖

32、玻片起使用。Oil：油镜。Ph2：带绿色环的相差物镜,相差环为Ph2。物镜放大倍率的色环代码:物镜上的 色环里 、棕红橙黄绿亮蓝暗蓝白放大倍率1.25X2.5X4X;5X6.3X10X16X;20X;25X;32X40X;50X63X100X;150X物镜放大倍率乘以目镜放大倍率（通常为10X）即为总光学放大倍率。例 如,10X10100X。使用显微镜进行工作时,总放大倍率不能低于或超过有效放大倍率范围。 有效放大倍率范围由欧内斯特阿贝定律决定,为所用物镜数值孔径的500到 1000倍。超出这范围,并不能进步分辨细微结构。例如，数值孔径为0.3 的物镜,其有效放大倍率范围在150X到300X之

33、间。所用物镜的数值孔径越大,就越有必要使用厚度0.17mm的盖玻片。因此, 特制的物镜也适用厚度不同的盖玻片（基于校正卡口）。最后,在观察样品时, 当聚焦效果和图像反差最好时,就可以确定校正环的位置了（始终需要重新聚 焦）。使用浸润型物镜时,应该用某种液体驱除盖玻片与物镜间的空气，这种液 体在绝大多数条件下是镜油。518N浸油/518F荧光油（nD=1.515）（可装20毫 升的塑料油盒）特别适合于这用途。为了避免转动物镜转换器时浸油污染样品,顺时针转动浸油物镜的弹性底座,就可以高位锁定浸油物镜,（别忘了解除锁定!）BECKMAN台式高速冷冻离心机标准操作规程除了进行室温离心,为使转头迅速达到

34、温度的平衡,应对转头进行预冷或预 热。低温离心时可采取在所需温度和2000rpm条件下进行30分钟运转的方法使 离心机预冷。 电源开关按至ON （I）,按OPEN DOOR键打开腔门。二安装转头前,确信锥形轴套座落于驱动轴上,若脱落,不能操作转头。三参照相应的转头说明书安装转头,任何情况下,转头均需平衡运行。四关闭离心机门并向下轻按,直听到两个门锁的锁紧声。五输入运行参数:（顺序按键）1. 选择转头号ROTOR, 或, ENTERO2. 设定运转速度RPM, 或或RCF, 或3. 设置运行时间TIME, 或.4. 设定运行温度TEMP, 或.5. 选择加速模式（0至9） ACCEL, 或.6.

35、 选择减速模式（0至9） DECEL, 或六核对所有参数无误,并锁紧机门，按ENTER键和START键。七设定时间计算至。,或按STOP键或按FAST STOP键结束运行。 转头停止后,OPEN DOOR亮,按OPEN DOOR键,门锁释放打开门。九按相应转头资料卸下转头。注意:1.转头旋转期间,切勿试图开启门锁系统。2.转头运行同时决不能提升或移动离心机。PROTEAN IEF等电聚焦电泳仪标准操作规程 从冰箱中取20c冷冻保存的水化上样缓冲液（不含DTT,不含Bio-Lyte） 一 小管（1ml/管）,置室温溶解。二在小管中加入0.01gDTT, Bio-Lyte4-6 5-7各2.5卩1

36、,充分混匀。三从小管中取出400山水化上样缓冲液,加入100山样品,充分混匀。四 从冰箱取-20C冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7）,于室温放置10分钟。 五沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左 右不要加样,中间的样品液一定要连贯。注意:不要产生气泡,否则影响到 胶条中蛋白质的分布。六当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后,用镒子轻轻的去除 预制IPG胶条上的保护层。七分清胶条的正负极,轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶 液上,使得胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正极。确保胶条与电极紧密 接触。不要使样品溶液弄到胶条

37、背面的塑料支撑膜上,因为这些溶液不会被 胶条吸收。同样还要注意不使胶条下面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡, 用镜子轻轻地提起胶条的一端,上下移动胶条,直到气泡被赶到胶条以外。在每根胶条上覆盖2-3ml矿物油,防止胶条水化过程中液体的蒸发。需缓慢的 加入矿物油,沿着胶条,使矿物油滴滴慢慢加在塑料支撑膜上。九对好正、负极,盖上盖子。设置等电聚焦程序。十 聚焦结束的胶条。立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳,否则将胶条置于 样品水化盘中,-20C冰箱保存。Protean I!电泳槽标准操作规程456如图1在一水平桌面放好三明治灌胶夹（箭头相对）,在长一短两块玻璃 板中间放上黑色边条,做成玻璃三

38、明治夹心。二 把此玻璃三明治夹心在桌面上立起,拧紧三明治夹上的螺丝（黑色）。三 把灰色胶垫放到灌胶架上,把做好的玻璃三明治夹心放置其上,插入硬纸 板,略微拧松夹子上的螺丝,调节边条的位置,完成后拧紧螺丝,图2。四双手同时用拧紧灌胶架两侧的栓梢,图3。五 在玻璃板之间灌入配制好的凝胶溶液，图4。如需要梳子，灌入凝胶溶液后 水平放好梳子,待其凝固。六 取出整个灌胶夹,箭头冲里（短玻璃板冲里）,慢慢推入冷却槽模块,双 手食指上抬冷却槽模块上的黑色固定夹,拇指下压灌胶夹帮助灌胶夹入位, 图5。七 在冷却槽模块两侧都如第6步装好玻璃板灌胶夹,如只跑块凝胶,需在 另一侧装入档板（档板的安装:将档板如第1步

39、放入三明治夹，上缘对齐, 拧紧螺丝）。 在电泳槽内加入配好的缓冲液，外槽液面没过电极丝,约10cm高,内槽没 过短玻璃板。为取得更好的电泳效果,在电泳前把缓冲液在4度冷却,在 冷却槽两端接上冷却循环水保持低温。九加入样品。十 盖上电泳槽盖子,接上电泳仪,注意电极方向,正极对正极（红对红）。十一在电泳仪上设定电泳条件,常规条件。十二 电泳完成后,关闭电源,打开电泳槽盖子,取出冷却模块,平放在桌面上。 十三拇指下压冷却槽模块上的黑色固定夹，食指上抬灌胶夹,取出灌胶夹,图5。 十四拧松灌胶夹上的螺丝,取出玻璃板夹心,轻轻撬开玻璃板,取出凝胶。.Proper Set-up of the Buffer

40、Recirculation Pathway (BRP).PROTEAN Plus Dodeca Cel! 标准操作规程简介:PROTEAN Plus Dodeca Cel!高通量电泳槽能容纳12块大型板凝胶,与PROTEANIEF等高通量电泳联用。所需电泳缓冲液体积为22.5升,冷却水推荐流速为 10-15gal/min注意:PROTEAN Plus Dodeca Cell使用,在移动电泳槽盖子前,必须先切断电源。推荐电泳实验条件:200V衡压,6小时。外接冷凝水能使电泳缓冲液的温度 冷却至18-20度。 PROTEAN Plus Dodeca Cell 仪器主要部分(图 1)1 .负极2 .

41、歧管道3,歧管装置4 .正极5 .缓冲液排气管6 .阳极板7 .玻板夹8 .缓冲液管道9 .陶瓷冷却芯10 .缓冲循环通道11 .冷却循环通道12 .阴极板二仪器使用按图2所示将缓冲液循环系统连接好:循环泵是缓冲液循环系统关键部件,包括电源 线及备用保险丝。缓冲液从电泳槽盖子顶部管道通 过循环泵再从电泳槽底部接口进入电泳槽完成循 环,必须正确连接保证正确的循环方向。将循环泵流速调到最到。三仪器操作1.标准电泳缓冲液(IX)制备:按照下表来选择并制备适合实验的电泳缓冲液 并装满缓冲液槽。1) Tris/Glycine/SDS ： 25 mM Tris-Base (M.W. 121.1), 192

42、 mM Glycine (M.W.75.07), 0.1%SDS, pH 8.32) Tris/Tricine/SDS： 100 mM Tris-Base (M.W. 121.1), 100 mM Tricine (M.W.2.2) 2), 0.1%SDS,pH 8.33) Tris/Boric Acid/EDTA (TBE)： 89 mM Tris-Base (M.W. 121.1), 89 mM boric acid (M.W. 61.83), 2 mM EDTA (M.W. 372.26), pH 8.34) Tris/Acetic Acid/EDTA (TAE)： 40 mM Tris

43、, 20 mM acetic acid, 1 mM EDTA, pH 8.02.凝胶制备1)在多板凝胶灌制器中交错加入丙烯模块和塑料薄垫片,并估计留出手灌胶多 套电泳玻璃板的空间。2)插入成套的电泳玻璃板,每套电泳玻璃板间用塑料薄垫片隔开。3)装上塑料阀门(stopcock valve),并平衡地旋紧四个螺丝。4)从顶部灌胶,或者通过485型梯度生成仪从底部注入梯度胶。5)调节塑料阀门,使胶面达到实验所需高度。6)待胶凝结后,打开多板凝焦胶灌胶器,将含凝胶的玻璃电泳板如图3所示方 向插入电泳槽中。注意:当使用PROTEAN II 20x20CM的预制胶时，需按图4所示将II个歧管道 胶管插入歧

44、管装置中以保证缓冲液的循环。BUFFER TANK图 1 ITTTTTTTTTTtPROTEAN Plus Dod*ca call MPROTEAN Plus Dodeca cll lidTrrnTTTTTT3 .盖上盖子,接通缓冲液循环系统电源,接通冷却循环系统电源。4 .将连接线插入相应电泳仪（PowerPac HC或PowerPac Universal）,接上电源, 进行电泳,电泳条件:200V约6个小时。5 .电泳结束1）关掉电泳仪,关掉缓冲液循环系统,关掉冷却循环系统电源,从电泳槽中将 凝胶玻板取出。2）将玻板连接处向左,短玻板朝上平放在桌上,用剥胶板将短玻板轻轻向上分 开并完全打开

45、，沿两边玻璃垫片将凝胶分开。3）双手将凝胶完全从玻璃板上剥离。4）进行电泳之后的工作如染色分析或转膜。四仪器保养注意事项缓冲液电泳槽、垫片、电极板及盖子均需要在实验之后进行清洗。如果 长期不使用需将剩余缓冲液倒掉并彻底冲洗所有部件。PowerPac Universa!电泳仪标准操作规程PowerPac Universa!电泳仪提供电泳中所需的恒流或恒压电流,并可提供限 流或限压,PFd断电保护,可在断电重启后，自动继续中断的程序（程序为定时 或多步程序）;其RRCd电阻过快变化保护,可控制电阻在短时间内的过快变化。输出参数为电压:10-500V;电流:0.01-2.5A:功率:1-500W （

46、最大）。1 .打开电源,电源开关在仪器右侧。2 .连接电泳槽等设备:注意电源线上有红/黑标记仪器面板主视图RUN/RJKUSE KEYSTOP/HOME KEYSETUP KEY忿 Q 0 0 。松口卷.ALPHANUMERIC KEYPADCLEAR ENTRY KEYIR PORTSOFT KEYSEDIT KEYARROW KEYS按键说明:Run/Pause运行/暂停Stop/Home停止/主菜单Setup设置EDIT编辑/确认Arrow Keys上下移动CE删除键3 .如是定时的程序,系统会自动停止运行:如是不定时的程序,按Stop钮终止。4 .关闭电泳仪电源之前,先按Stop 全波长酶标仪标准操作规程（Skanlt software 2. 2）一新建用户1 .点击桌面上的快捷方式,出现对话框,默认的用户名是admin,没有密码。 当然,也可以不建新的用户名,直接以admin进入后面的程序。2 .在用户管理窗口,点