DB65∕T 3893-2016 羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范(新疆维吾尔自治区).pdf

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1、L _1 二二-二二二:二工二二二二二二l_ICS 11.220 B 41 二二二IDB65-ff-JUVUU.川LU-uBhBh-L-准标万刷出ETE,区主J口自泸;-t/1、吾维茵茵-3哥新DB 65/T 3893-2016 羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范Technical code of the collection and technical specification of the sample for sheep brucellosis supervasion 2016-08-01实施2016-06-10发布发布新疆维吾尔自治区质量技术监督局J 1-0865/T 3893-201

2、6 目IJ 本标准按照GB/T1.1-2009(标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心和乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站提出。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。本标准起草单位:乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心和乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站。本标准主要起草人:李爱巧、蔡扩军、吴星星、王涛、陈娟、何生、施远翔、王爱菊、程维疆、赵军、帕提玛、赵庆、范玉娟、李惠、李烈刚。I 丁一一一一一一-一一一一_r 二7二:二二三气D865/T 3893-2016 羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范1 范围本标准规定了羊布鲁氏菌病采样的术语和定义、采样准备工作、消

3、毒压尘、样品采集和编号、采样单填写、样品包装、保存和运送的技术要求。本标准适用于羊布鲁氏菌病诊断、监测、流行病学调查时样品的采集、保存、运送。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 布鲁氏菌病brucellosis 布鲁氏菌病(也称布氏杆菌病，以下简称布病)是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的传染病。我国将其列为二类动物疫病。3.2 动物疫病animalep

4、idemic 主要指生物性病原引起的动物群发性疾病，包括动物传染病和寄生虫病。3.3 动物防疫animalepidemic prevention 动物疫病的预防、控制、扑灭和动物、动物产品检疫的总称。3.4 样品sample 取自动物或环境、拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。3.5 诊断diagnosis 1-0865/T-2016 通过观察和检查对病例的病性和病情作出判断。3.6 血清学监测serologicaldetection 利用抗体和其对应抗原之间发生专一的一种检测方法。3.7 微生物学诊断microbiologicaldiagnosis 用微生物学方法检查和鉴

5、定病源体，对疾病作出诊断。3.8 消毒压尘disinfection and dustproof 通过喷雾的方式消毒，以减少空气中飞扬的尘土，消灭尘土中携带的病原微生物，达到消毒和降低尘土颗粒的数量，防止病原微生物通过附着在尘土上被人吸入而感染疫病。4 采样准备工作4.1 基本要求4.1.1 采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具和一次性采血器的使用，掌握羊组织样品和血清样品等正确的采样方法，具有基本的生物安全意识和自我保护、防范意识，采取必要的自身防护措施。羊保定人员必须熟悉羊的脾气和秉性，掌握正确的保定方法，防止受到羊的攻击和其他伤害。4.1.2 采样人员和消毒人员必须掌握消毒药的配制和消

6、毒喷雾器具的正确使用，保证消毒灭菌效果。4.2 采样器具4.2.1 组织病料采集器具:采样箱、解剖刀、小型解剖斧头、剪刀、有齿银子、酒精灯、75%酒精棉球、腆酒棉球、一次性注射器及针头、玻片、培养器皿、大小不同规格的封口袋(或采样袋)、5mL-10mL的离心管、棉试子和塑料包装袋等。4.2.2 血样采集器具:采样箱、弯剪、有齿慑子、75%酒精棉、干棉球、5mL(9号针头)一次性采血器、1.5mL-5mL塑料离心管、大小不同规格的封口袋(或采样袋)等。4.2.3 冷藏器具:保温箱、出诊箱、冰袋等。4.2.4 消毒器具:大小不等的喷雾器、喷壶等。4.3 记录物品防水记号笔(蓝色或黑色、碳素笔、不干

7、胶标签、采样单、记录本、记录纸板、家畜标识阅读器等。4.4 防护物资消毒药品、N95口罩、一次性乳胶手套或耐酸碱橡胶手套、一次性防护服、防护帽、胶鞋或一次性防水鞋套、护目镜等。5 消毒压尘2:1 D865/T 3893-2016 5.1 选择消毒药消毒药品选用烧碱、醒类、氧化剂类、氯制剂类等。如2%-3%火碱溶液(又叫烧碱、氢氧化纳、0.3%新1吉尔灭3%-5%来苏儿0.2%-2.5%石灰粉;含氯制剂的消毒药。消毒药每隔1周-2周要定期更换，防止细菌产生耐药性。5.2 配备消毒药不同的消毒药按照各自的说明书进行配备。5.3 喷洒消毒药对羊圈舍、场地等，可采用消毒液喷洒或用盆泼洒等方式消毒;以地

8、面完全湿润为直。6 样晶采集和编号6.1 基本要求6.1.1 做好消毒工作6.1.1.1 采样人员采样前要穿戴好工作服、帽子、N95口罩、护目镜、乳胶手套、胶靴或一次性鞋套，有条件具备紫外线消毒灯的，在进入羊圈前要进行紫外灯照射3min-5min。6.1.1.2 采样结束后，离开感染或可能感染场地，对场地及其设施进行彻底消毒。在场内或处理地的出口处脱掉一次性防护装备，将脱掉的防护装备和包装袋等废弃物置于容器内进行消毒处理或焚烧或深埋等无害化处理。在离开羊圈和处理地后有条件的要进行紫外灯照射3min-5 min，还要对可多次使用穿戴的工作服、帽子、胶靴和器械等采用浸泡、喷洒、洗涤等消毒方式消毒:

9、工作人员的手及皮肤裸露部位应清洗、消毒。6.1.1.3 采样物品和器械的消毒:刀、剪子、镶子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精棉球擦拭，同时点燃酒精棉球进行火焰消毒。培养皿、试管等玻璃皿器和封口袋(或采样袋等塑料制品经103kPa高压30min后备用，采血器一般使用一次性采血器和针头。采集过病料的用具应先消毒再清洗。6.1.2 做好个人防护工作。进入感染或可能感染羊布病的场点，必须做好个人防护工作，同时注意防止针头刺伤，严防人畜共患病的感染。6.1.3 发现患羊急性死亡，天然孔出血，血凝不良，尸僵不全等疑似炭瘟时，禁止随意解剖病羊。排出炭瘟后方可采样。6.1.4采集羊内脏病料时，最好在扑杀

10、后立即采集或死亡后6h内采集，采集后的病害肉尸按照GB 16548处置。6.1.5 采样注意场地的顺序，先到规模养殖场，后到散养户，先到羊群健康的养殖户，后到羊群发病的养殖户，采样过程注意无菌操作，避免交叉污染。6.1.6健康监测:所有暴露于感染羊布病和可疑羊布病养殖环境的人员均属高危人群，应接受当地卫生部门医学监测:出现波浪热、乏力、关节疼等临床症状的要及时到当地卫生部门做布病检测。6.2 采集血清样品6.2.1 采样方法:一般使用5mL一次性采血器(9号针头在羊的颈静脉处采集羊血样，采血前在羊的颈静脉沟上1/3与中1/3交界处的皮肤先剪毛，75%酒精棉球消毒，一手拇指按压采血部位下方的颈静

11、脉沟血管，促使颈静脉怒张，待采血部位干燥后，另一手使用一次性采血器，与皮肤呈45。角由下3 D865/T-2016 而上刺入血管采集血液，每只羊采全血3mL-5mL采血完毕后，局部消毒并用干棉球按压止血。抽血时，不宜将一次性采血器抽满，抽血完毕后，将一次性采血器内芯活塞抽至最大量程，以便析出血清。6.2.2 血清收集方法:全血样品采集后，防止太阳暴晒:防止全血温度过高腐败而溶血:防止温度过低全血结冰而溶血:最好在室温下C200C-3TC)放置1h-毡，或自然过夜，待全血自然凝固并析出血清后，倒入、装入或用移液器注入1.5mL-5mL灭菌的离心管中，加盖密封后做好标记，保存备用。一般采集全血24

12、h内分离血清。若全血凝固后并没有析出血清、或血液凝固不全、或有部分溶血现象时，可以用离心机2000r/min3 OOOr/min，离心3minr-.;5min，取上清至1.51丑Lr-.;5mL离心管中备用。6.2.3 血清要求:血清要求无蛋白凝块、无溶血、无腐败气味，每份血清不少于O.5mL，不同羊的血样不能混合。6.2.4 一次性采血器的包装塑料膜和内芯杆等及时收集后，与用后的防护装备一并无害化处理。6.3 采集微生物学诊断病料6.3.1 抗;疑血样品进行血液学分析的样品，一般使用一次性C5mL的)EDTA1抗凝管采集2mL采集后立即上下轻微晃动5次6次，充分混匀，防止在是集即可。进行布鲁

13、氏菌病细菌培养的全血样品，最好选择羊在菌血症时采集，一般用一次性肝素纳抗凝管C5mLr-.;10mL)采集3mLr-.;5mL的抗凝血，采集后立即上下轻微晃动5次-6次，充分混匀，防止凝集即可。6.3.2 乳汁样品对于泌乳期的母羊，可以先用消毒药水擦洗乳房，再用温清水洗净或擦净，最初所挤的3把5把乳汁弃掉，后面所挤的乳汁采集到5mL10mL的灭菌离心管中，做血清学检测的乳汁不能冻结、加热或强烈震动。6.3.3 关节腔积液在羊肿胀的关节处用酒精棉球进行消毒，然后用一次性采血器抽取1mL3mL的积液。6.3.4组织病料用常规解剖刀剥离羊的皮肤，用酒精棉球进行消毒，打开腹腔，以无菌操作的方式采集羊的

14、肝、脾、肺、淋巴结等部分组织脏器，每个组织块分别放在一个封口袋(或采样袋)内，并标明组织块的名称，不同的组织不能放在同一个封口袋内，防止组织块间相互污染。同一只羊的不同组织分开包装，最后再装入一个大的包装袋中。6.3.5 羊的流产胎儿、绒毛膜水肿液、胎儿胃内容物等组织采集羊的流产胎儿必须做无菌取材，羊胎儿肝、脾全取，胃液不少于1mL;绒毛膜水肿液1mL、胎儿胃内容物等少许，样品分置无菌容器内，一个流产胎儿一个编号。6.4 采样数量6.4.1 微生物学诊断时15只病羊的有病变的器官组织或按照抽样方案实施。6.4.2 免疫效果监测时:按照当地流行率和免疫监测方案的抽样数量进行采集。6.4.3 流行

15、病学调查和疫情监测时:根据抽样的目的和抽样方案，分别采集血清、棉试子、乳汁、流产胎儿等，采样数量可根据羊的年龄、季节、周边疫情情况和本地的流行率或估算其感染率，然后计算应采样品数量，一般监测结果有95%的置信区间的样品采集数量详见附录A。或者按照抽样方案采集。6.4.4 种群监测净化:按照规定的统计学要求或抽样方案采集。6.4.5 抽检的样品数量要满足检测工作需要:如果有留样要求的，采集检测的每份样品至少还需留一份备份样品。6.5 样品编号4 二二二-二二工二丁I二二_J工-二I_L_-二二三三乙二lD865/T 3893-2016 6.5.1 在装病料的容器上贴上标签或自封袋(或采样袋)上或

16、盛血清的离心管管盖或管壁上用防水记号笔，按照各自程序文件的样品管理办法或相关规定做好样品的唯一性编号，血清样品要与一次性采血器上的编号一致，样品编号不能重复或相同、不能缺失。6.5._2 样品编号是样品的唯一性标识，采样人员在现场采样及时加贴标签，采样人将样品编号记录在相应的样品采集记录表上，编号的原则为8-13位的数字和字母相间组合的一组符号，详见下图所示。如2016Y12J12，即2016年羊的第12批次的监督检验的第12号样品。口口口口c 样品顺序流水号检验类别代码样品批次号为畜种缩写代码为年代号j主:前4位数字代表年代号:为当年年份的号:如2016年，即写2016第5位-6位是大写的英

17、文字母，代表畜手中缩写代码:一般以畜禽第一个或第一、第二个大写拼音字母的缩写为主:如牛一-N;羊一-Y;猪一-z;禽一-Q;狗一-G;马一-M;骆驼一-L;其他动物一-QT。第7位-9位是一组数字，代表样品的批次号:按检测任务受理时间或抽样时间顺序从每年年初接受样品的批次1号顺延往下编排，不同检测任务和不同畜种的编号实行连续性顺序号依次往下编排样品批次号的方式。第10位为大写的英文字母，代表检验类别的代码:以检验不同类别的第一个拼音字母大写缩写为主w一一委托检验J一一监督检验(包括集中监测检验、紧急流行病学调查检测、村级防疫员考核试验、质控考核等);Q一一其他检验(包括参加实验室比对试验、能力

18、验证试验、项目检验、新方法确认实验、试剂盒验证、练兵试验等)。第11位-13位为一组数字，代表本批次样品的个体顺序号:如该批血清样品为30份，即每份样品的编号依次为:1,2,.30。7 填写采样单采样的同时填写采样单，羊布病的采样单必须包括畜别(注名绵羊、山羊、种公羊、样品名称、样品编号、采样地点、采样数量、饲养基数、采样日期、监测项目、畜主或被采样单位或被采样人签字、至少2名采样人或抽样人签名等，不得使用省略或简易符号替代。采样单要用碳素笔或签字笔逐项填写，所有表格填写内容要真实准确、样品信息全面完整、字迹清楚工整、可靠、可追溯，发生疫情的要明确地理位置，采样单一般一式三份，一份随样品送实验

19、室诊断，一份采样单位留存，一份被采样人留存。采样单根据流行病学调查和集中监测等目的不同，所需信息量也不同，详见附录B和C。8 样品包装包装样品的容器必须完整无损，密封不漏出液体。每个样品独立包装，同一采样点的同一类样品要放置在同一个自封袋(或采样袋中，用防水记号笔在袋子外标记采样地点、份数、编号范围等信息。同一区县、乡镇、村的样品，可以集中在另外一个较大自封塑料袋中，在袋子外面用防水记号笔记录区县名称、采样点数量、样品总数等信息。9 样品保存5 D865/T-2016 9.1 血清学检测样品的保存:血清如不能在24h内送实验室，样品应置于放了冰袋的保温箱中低温保存。分离后的血清一般在7d内做试

20、验的，可以放在20C-J80C冷藏柜或冰箱的冷藏格中冷藏;待实验结束后尽快冷冻保存。分离后的血清如果超过7d才做实验的，要尽快放置-200C度冷冻保存;血清样品避免反复冻融而影响检测效果和准确性。9.2 全血样品的保存:进行血液学分析的样品，一般常温保存在一次性EDTAK2+抗凝管C5mL)中即可，禁止冷冻。进行布鲁氏菌病细菌培养的全血样品，可以放置一200C冷冻保存。9.3 乳汁和关节腔积液样品的保存:乳汁和关节腔积液在7d内做ELISA试验的可放在20C冷藏冰箱内，如果做微生物学诊断培养细菌的可以放置-200C冷冻保存。9.4 组织病料的保存:蘸取病料的棉试子可放在灭菌的离心管中-200C

21、冷冻保存。采集的实质脏器等组织病料在短时间内夏季不超过20h，冬季不超过2d)可放在带冰块的保温箱内或冰箱的冷藏柜中保存，否则放置在一200C以下冷冻保存。10 样品运送10.1 样品应以最快的方式直接送交到实验室，一般采集后不超过24h送到的样品，可放在40C左右的容器中运送。10.2 血清样品的运送。如果血清样品在他内送到实验室的，可用冰袋冷藏运输，如果超过他或7d后再进行的，要将血清先冷冻后，再放在加冰袋的保温箱内运输。10.3 全血样品的运送10.3.1 进行血液成分分析的样品，要在冷藏的情况8h内送到实验室。10.3.2 进行布鲁氏菌病细菌培养的全血样品，在冷藏的条件下8h内送到实验

22、室，超过他的，在一200C冷冻保存后冷藏运输。10.4 乳汁和关节腔积液样品的运送。一般采集后不超过24h送到的样品，可放在40C左右的容器中运送。10.5 组织病料的运送。采集后24h内及时送检的样品，可放在40C左右的容器中运送，否则在-200C冷冻保存后运输。10.6 样品置于保温容器中运输，保温容器必须密封，防止渗漏。10.7 样品送检时，必须同时提交采样单。6 1 二二一_J_l1-J _J二D865/T 3893-2016 附录A(规范性附录)表A.1 使监测结果有95%的置信区间的样品采集数量飞二群p自1大采在1旦主样数百飞飞量飞分飞飞率飞、50 40 30 25 20 15 1

23、0 5 2 1 0.5 0.1 20 20 19 19 19 19 19 18 16 13 9 6 2 30 28 28 28 28 27 27 25 22 16 11 7 2 40 37 37 36 36 35 34 32 26 18 12 7 2 50 45 45 44 43 42 40 37 30 19 12 7 2 60 52 52 51 50 49 46 42 33 21 13 7 2 70 60 59 58 57 55 52 47 36 22 13 7 2 80 67 66 65 63 61 57 51 39 22 13 7 2 90 73 73 71 69 66 62 55 41

24、 23 14 8 2 100 80 79 77 75 72 67 59 43 24 14 8 2 150 108 107 103 99 94 85 72 50 26 14 8 2 200 132 130 124 119 111 99 82 54 27 15 8 2 500 218 213 197 183 165 141 109 64 29 15 8 2 1000 278 270 244 224 198 164 122 69 30 15 8 2 注1:流行百分率:发病动物数/全群动物数的百分比注2:群的大小:全群动物数注3:采样数量:抽检动物样品数量注4:流行百分率和采样数量的关系:呈正向分布的

25、反比例的统计学关系。7 D865/T-2016 附录B资料性附录)表8.1 家畜布病流调表调查地点区(县乡(镇)村(发现疑似病例)地理坐标:场(户名称联系电话动物种类及饲养数量口绵羊口山羊(湖羊、小尾寒羊)口奶牛口肉牛口其他动物一一一-所有饲养动物的品种和牛头，羊只，数量其他动物:头种用动物性别公:只(头母:只(头)养殖规模口规模场;口手中畜场;口散养户;饲养动物来源口全部自繁自养口主要自繁自养+部分外购牲畜口全部外购口部分自繁自养+主要外购牲畜外购牲畜进场前是否布口所有牲畜检疫合格后进场口抽样检疫合格后进场病检疫口不检疫直接进场口不检疫，隔离观察后进场饲l喂方式口全年放牧为主，偶尔舍饲口夏秋

26、放牧，冬春舍饲口全年舍饲为主，偶尔放牧或不放牧口育肥户牧场类型口自有草场，不与别的畜群共牧口公共草场，与别的畜群一起共牧口自有草场和公共草场都放牧种畜管理口自用种公畜，自由交配口租用或借用手中公畜，自由交配口共用其他畜群种公畜，自由交配口人工受精布病免疫状况口未免疫口免疫最后一次免疫时间:免疫疫苗种类:一一种畜布病检疫口从不口不清楚口1次/年口2次/年口口2次以上/年畜舍消毒口从不消毒口1次/周口l次/月口1次/年口其他口整群监测，采样数量,RBPT阳性数量一一一SAT阳性数量;是否进行布病抗体监测口抽检，抽检数量,RBPT阳性数量SAT阳性数量;口没有血清样品合计:口羊份:阳性份。血清样品口

27、牛份;阳性份。口种畜份:阳性份调查和采样人签字、采样时间:年月日被采样单位负责人或畜主签字8 二1_ _1二二一;二二LD865/T 3893-2016 表8.2家畜布病采样登记表采样信息登记:采样人:备注备注样品编号耳标号畜别样品编号耳标号畜别(手中公(种公畜畜)宁9 0865/T一2016附录G(资料性附录)表C.1 布病监测采样登记表采(抽)样地点县乡村(大队)组小队)被采样单位名称联系人|联系电话饲养数量样品名称和样品数量全血)血清()份乳汁()关节腔积液)份组织()份J 流产胎儿(份生殖道分泌物()份其他()份采(抽)样方式口总体随机口分层随机口系统随机口整群口分散口其它被采样动物同群养殖方式口种畜场口规模场口散养户口屠宰场口活畜交易市场被采样动物健康状况口健康口发病口死亡接种时间疫苗类别近6个月内的免疫情况监测疫病项目口布病口其他(最后一次免疫状况样品编号样品类型畜别年龄疫苗种类生产厂家产品批号接种日期本次抽样始终在本人陪同下完成，记录经核准无误，本次抽样严格按照要求及相关国家标准进行，并作|同意按期送样。纪录如上。被抽样单位或人签字:抽样人或采样人签字:(签章)(签章)年月日年月日各注10