生物化学实验基本操作.ppt

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1、生物化学实验基本操作生物化学实验基本操作 一一.玻璃仪器的洗涤玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。水珠附着在玻壁上。常用的洗涤方法：常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗少量蒸馏水冲洗23次，倒置在器皿架上晾干或置于烘次，倒置在器皿架上晾干

2、或置于烘箱烤干备用。箱烤干备用。2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡46小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。再

3、用蒸馏水冲洗，最后干燥。3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：法：（1）先用）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；然后用自来水冲洗；（2）也可用）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后再氨水浸泡，使血浆溶解，然后再依次用依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重铬酸钾洗液铬酸钾洗液46小时，再用大量自来水冲洗，小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗最后用蒸馏水冲洗23次。次。4.新购置的玻璃仪器，应先

4、置于新购置的玻璃仪器，应先置于12%稀盐酸稀盐酸溶液中浸泡溶液中浸泡26小时，除去附着的游离碱，再小时，除去附着的游离碱，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗23次。次。5.凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干涸后洗涤十分困难。如不能及时洗涤，先用流涸后洗涤十分困难。如不能及时洗涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意以下几点：以下几点：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。需用洗液

5、浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等离子可与洗液发生化学等离子可与洗液发生化学反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。因反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。因此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述离子（可用稀硝酸或离子（可用稀硝酸或510%EDTA钠清除）。钠清除）。3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失效。因此，容器壁上附有大量油类、有机物时，效。因此，容器壁上附有大量油类、有机物时，应先除去。应先除

6、去。4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤或烧坏。或烧坏。5.洗液颜色由深棕色变为绿色时，说明洗液已洗液颜色由深棕色变为绿色时，说明洗液已经失效，应停止使用，更换新液。因重铬酸变经失效，应停止使用，更换新液。因重铬酸变成硫酸铬后不再具有氧化性。成硫酸铬后不再具有氧化性。重铬酸钾洗液的配制重铬酸钾洗液的配制:取重铬酸钾取重铬酸钾20g溶于溶于20ml蒸馏水中，加热至蒸馏水中，加热至沸。冷却后再将沸。冷却后再将200ml浓硫酸慢慢加入，边加浓硫酸慢慢加入，边加边搅拌。注意：此时

7、可产生高热。为防止容器边搅拌。注意：此时可产生高热。为防止容器破裂，应选用耐酸搪瓷缸或耐高温的玻璃器皿，破裂，应选用耐酸搪瓷缸或耐高温的玻璃器皿，切忌用量筒及试剂瓶等配制。为防止洗液吸收切忌用量筒及试剂瓶等配制。为防止洗液吸收空气中的水分而被稀释变质，洗液应贮存于带空气中的水分而被稀释变质，洗液应贮存于带盖的容器中。当清洁效力降低时，再加入少量盖的容器中。当清洁效力降低时，再加入少量重铬酸钾及浓硫酸就可继续使用。重铬酸钾及浓硫酸就可继续使用。二二.吸量管的使用吸量管的使用吸量管和定量吸吸量管和定量吸(移移)液器液器(微量加样器微量加样器)均为用来均为用来转移一定体积溶液的量器。转移一定体积溶液

8、的量器。吸量管：吸量管：生化实验中常用的有三种，最常用生化实验中常用的有三种，最常用的是刻度吸量管。的是刻度吸量管。1.刻度吸量管：刻度吸量管：刻度吸量管的种类：刻度吸量管的种类：按容量规格来分，有按容量规格来分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等数种。其精密度按不同的容等数种。其精密度按不同的容积可达移取量的积可达移取量的0.11%。通常将管身标明的。通常将管身标明的总容量分刻为总容量分刻为100等分。因此，等分。因此，10ml的吸量管的吸量管一格代表一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.01ml,其余类推。其余类推。按按“零零”点位置来分，有

9、点位置来分，有“O”点在吸量管点在吸量管上端的（即读数从上而下逐渐增大），也有上端的（即读数从上而下逐渐增大），也有“O”点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐增大增大)。两种标示方法，在使用时各有方便之。两种标示方法，在使用时各有方便之处。处。按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一种是刻度刻到尖端的，将液体放出时，应吹出种是刻度刻到尖端的，将液体放出时，应吹出残留在吸量管尖端的少量液体残留在吸量管尖端的少量液体(我实验室的刻我实验室的刻度吸量管全部是这一种度吸量管全部是这一种)，另一种是刻度不刻，另一种是刻度不刻到尖端的。到

10、尖端的。刻度吸量管的正确使用方法：刻度吸量管的正确使用方法：用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低点与吸量管的面缓慢降落，至管内试液弯月面的

11、最低点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容器刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。液体流完后再等液体流完后再等15秒钟，捻动一下吸量管后移去秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下吸量管移去）。吸量管移去）。使用刻度吸量管的注意事项：使用刻度吸量管的注意事项：选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积选择适当规格的吸量管：吸量管的最大容积应等于或略大于所需容积（应等于或略大于所需容积（ml数）。数）。仔细

12、看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括仔细看清吸量管的刻度情况：刻度是否包括吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还吸量管尖端的液体？读数方向是从上而下，还是从下而上？是从下而上？拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读拿吸量管时，刻度一定要面向自己，以便读数。数。吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管吸取试剂时应注意三点：一是先吹去吸量管内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试内可能存在的残留液体，二是将吸量管插入试剂液面深部剂液面深部(以免吸液过程中因液面降低而吸以免吸液过程中因液面降低而吸入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球入空气产生气泡或管内试剂进入洗耳球)，三，三是使用洗耳球是使用洗耳球(不

13、可直接用口吸不可直接用口吸)。按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。按吸量管上口时应该用食指，不能用拇指。吸取粘滞性大的液体吸取粘滞性大的液体(如血液、血浆、血清如血液、血浆、血清等等)时，除选用合适的吸管时，除选用合适的吸管(奥氏管奥氏管)外，应注外，应注意拭净管尖附着的液体，尽量减慢放液速度意拭净管尖附着的液体，尽量减慢放液速度(用食指压力控制用食指压力控制)，待液体流尽后吹出管尖残，待液体流尽后吹出管尖残留的最后一滴液体。留的最后一滴液体。使用的吸量管应干净、干燥无水。如急用而使用的吸量管应干净、干燥无水。如急用而又有水时，可用少量欲取试剂冲洗又有水时，可用少量欲取试剂冲洗3次，以免次，

14、以免试剂被稀释。试剂被稀释。2.移液吸量管：移液吸量管：也有两种，常见的一种是吸量也有两种，常见的一种是吸量管的上端只有一个刻度，另一种是除了在吸量管的上端只有一个刻度，另一种是除了在吸量管上端有刻度外，在吸量管下端狭窄处也有一管上端有刻度外，在吸量管下端狭窄处也有一刻度线。无论哪一种，在使用时将量取的液体刻度线。无论哪一种，在使用时将量取的液体放出后，只需将吸量管的尖端触及受器壁约半放出后，只需将吸量管的尖端触及受器壁约半分钟即可，不得吹出尖端的液体。分钟即可，不得吹出尖端的液体。3.奥氏吸量管：奥氏吸量管：准确度最高，使用时必需吹出准确度最高，使用时必需吹出留在尖端的液体。留在尖端的液体。

15、定量吸定量吸(移移)液器液器(微量加样器微量加样器)：定量吸液器定量吸液器是吸量管的革新产品。由塑料制成。目前，因是吸量管的革新产品。由塑料制成。目前，因产地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。产地厂家不同其质量、价格差异十分悬殊。1.定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅定量吸液器的优点：使用方便，取、加样迅速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品速，计量准确，不易破损，能吸取多种样品（只换吸嘴即可）。（只换吸嘴即可）。2.定量吸液器的类型：定量吸液器的类型：有两种类型。有两种类型。固定式：固定式：只能取加一定容量的试剂，不能随只能取加一定容量的试剂，不能随意调节取加样量。其规格有意调节取加样量

16、。其规格有10l、20l、25l、30l、50l、100l、200l、250l、300l、400l、500l、1000l等。等。可调式：可调式：在一定容量范围内可根据需要进行在一定容量范围内可根据需要进行调节取加样量。例如规格为调节取加样量。例如规格为50200l的可调的可调式定量吸液器，可以在式定量吸液器，可以在50到到200l的范围内根的范围内根据需要调节成设计容许的各种取加样容量据需要调节成设计容许的各种取加样容量（60l、85l、110l、170l、200l等）。等）。一般来讲，固定式吸液器比较准确，可调式吸液一般来讲，固定式吸液器比较准确，可调式吸液器使用较为方便。器使用较为方便。3

17、.定量吸液器的使用方法：定量吸液器的使用方法：选择适当的吸液器。吸液前先把吸嘴套在吸引选择适当的吸液器。吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要轻轻旋紧一下，以保证结合严密。管上，套上后要轻轻旋紧一下，以保证结合严密。持法：右手四指（除大拇指外）并拢握住吸液持法：右手四指（除大拇指外）并拢握住吸液器外壳（使外壳突起部分搭在食指近端），大拇器外壳（使外壳突起部分搭在食指近端），大拇指轻轻放在吸液器的按钮上。指轻轻放在吸液器的按钮上。取样取样(吸液吸液)：用大拇指按下按钮到第一停止点，：用大拇指按下按钮到第一停止点，以排出一定容量的空气，随后把吸嘴尖浸入取样以排出一定容量的空气，随后把吸嘴尖浸入取样液

18、内，徐徐松开大拇指，让按钮慢慢自行复原，液内，徐徐松开大拇指，让按钮慢慢自行复原，取样即告完成。取样即告完成。排液：将吸液器的吸嘴尖置于加样容器壁上，排液：将吸液器的吸嘴尖置于加样容器壁上，用大拇指慢慢地将按钮按下到第一停止点，停留用大拇指慢慢地将按钮按下到第一停止点，停留1秒钟（粘性较高的溶液停留时间应适当延长）。秒钟（粘性较高的溶液停留时间应适当延长）。然后再把按钮按到第二停止点上，让吸嘴沿管壁然后再把按钮按到第二停止点上，让吸嘴沿管壁向上滑动。当吸嘴尖与容器壁或溶液离开时，方向上滑动。当吸嘴尖与容器壁或溶液离开时，方可释放按钮，使其恢复到初始位置。可释放按钮，使其恢复到初始位置。吸液器用

19、后应及时取下吸嘴。将吸嘴用自来水吸液器用后应及时取下吸嘴。将吸嘴用自来水冲洗后浸入盛水的容器内（以防干涸），待实验冲洗后浸入盛水的容器内（以防干涸），待实验结束后集中仔细清洗。结束后集中仔细清洗。三三.溶液的混匀溶液的混匀 混匀的目的：混匀的目的：使反应体系内的各种物质分子很好地互相接使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行反应；触，充分进行反应；使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。混匀的方法通常有以下几种：混匀的方法通常有以下几种：使盛器作离心运动。使盛器作离心运动。左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管

20、内溶液作旋转运动。使管内溶液作旋转运动。利用旋涡混合（振荡）器混匀。利用旋涡混合（振荡）器混匀。不得已时可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。不得已时可用干燥清洁的玻璃棒搅匀。混匀的注意事项：混匀的注意事项：防止盛器内的液体溅出或被污染。防止盛器内的液体溅出或被污染。严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。四四.离心机的使用离心机的使用 离心法是分离沉淀的一种方法。它是利用离心离心法是分离沉淀的一种方法。它是利用离心机转动产生的离心力，使比重较大的物质沉积机转动产生的离心力，使比重较大的物质沉积在管底，以达到与液体分离的目的。因液体在在管底，以达到与液体分离的目的。因液体在沉淀

21、的上部，故称清亮的液体部分为上清液。沉淀的上部，故称清亮的液体部分为上清液。电动离心机的使用方法：电动离心机的使用方法：1.将欲离心的液体，置于离心管或小试管内。将欲离心的液体，置于离心管或小试管内。并检查离心管或小试管的大小是否与离心机的并检查离心管或小试管的大小是否与离心机的套管相匹配。套管相匹配。2.取出离心机的全部套管，并检查套管底部是取出离心机的全部套管，并检查套管底部是否铺有软垫，有无玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎否铺有软垫，有无玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必须取出，漏孔应该用蜡封住）。检查合格片必须取出，漏孔应该用蜡封住）。检查合格后，将盛有离心液的两个试管分别放入套管中，后，将盛有离心

22、液的两个试管分别放入套管中，然后连套管一起分置于粗天平的两侧，通过往然后连套管一起分置于粗天平的两侧，通过往离心管与套管之间滴加水来调节两边的重量使离心管与套管之间滴加水来调节两边的重量使之达到平衡。之达到平衡。3.将已平衡的两只装有离心管的套管，分别放将已平衡的两只装有离心管的套管，分别放入离心机相互对应的两插孔内。盖上离心机盖。入离心机相互对应的两插孔内。盖上离心机盖。打开电源开关。逐档扭动旋钮，缓慢增加离心打开电源开关。逐档扭动旋钮，缓慢增加离心机转速，直至所需数值。达到离心所需时间后，机转速，直至所需数值。达到离心所需时间后，将转速旋钮逐步回零，关闭电源，让离心机自将转速旋钮逐步回零，关闭电源，让离心机自然停止转动后（不可人为制动），取出离心管。然停止转动后（不可人为制动），取出离心管。