DB65∕T 3916-2016 草莓脱毒苗组培快繁技术规程(新疆维吾尔自治区).pdf

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1、rq ICS 65.020.20 B 05 DB65 新疆维吾尔自治区地方标准DB 65/T 3916-2016 草莓脱毒苗组培快繁技术规程Technical specification for micropropagation of strawberry virus-free seedlings 2016一08-04发布2016-09一04实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布0865/T 3916-一2016目IJ吕本标准按照GB/T1.1-2009 标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归

2、口。本标准起草单位:新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所、新疆维吾尔自治区标准化研究院。本标准主要起草人:史芳芳、汪泉、李向泉、郭艳、胡晓憨、陈晓坤、胡小明、向征。I D865/T 391一2016草莓脱毒苗组培快繁技术规程1 范围本标准规定了草莓脱毒茵组培快繁技术的术语和定义、草莓组培快繁程序中的茎尖剥离技术及扩繁技术流程等要求。本标准适用于草莓脱毒茵的组培快繁技术规程管理的全过程。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。WS 233-2002 微生物和生物

3、医学实验室生物安全通用准则DB33/T 594.1一2005草莓脱毒种苗第1部分:脱毒种商DB3701/T 83一2007草莓种苗繁育技术规程3 术语和定义下列定义和术语适用于本文件。3.1 叶原基Leafprimordium 在茎尖生长点的基部形成的突起。3.2 茎尖stemapex 芽顶端部分(0.1 mmr-.-10mm)其中包括分生组织(0.05 mmr-.-O.lmm)及芽原基和正在发育的叶原基。3.3 茎尖分生组织stem-apexmeristem 茎部位具有持续和周期性分裂能力的细胞群。3.4 增殖proli ferat i on 外植体或继代组培苗产生出新的具有特定结构和功能的

4、组织或器官的现象。3.5 1 D865/T 3916-一2016继代subculture培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪截等转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。3.6 离体培养invitro culture 从植物分离出符合需要的器官、组织、细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。3.7 脱毒苗virus-freeseedling 经检测确认不带草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒和草莓皱缩病毒的试管苗。4 草莓脱毒组培快繁程序4.1 茎尖剥离4.1.1 外植体选择采样最佳时间为5月-8月晴天中午，选择回间

5、生产茵中无病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的匍匍茎2cm，-.，3cm，用流水冲洗干净。品种选择按照DB3701月83-2007中的第5章执行。4.1.2 茎尖剥离及接种将表面清洗干净的外植体移到超净工作台上剪掉芽上所有叶片，用70%酒精浸泡30s，用无菌水冲洗3次-5次，再移入O.1%升求溶液中浸泡3min-5min，用无菌水洗3次-5次。把消毒过的材料置于培养皿中灭菌滤纸上，吸去材料上的水分，先用慑子一层层剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后于解剖镜下(解剖镜光源用冷光源)，找到生长点，用接种针挑出带1个-2个叶原基的生长点(长约0.2mm-0.3 mm),转移到事先准备好的盛有诱导茎尖分化

6、培养基见附录A)的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养。4.1.3 茎尖分化诱导将接种好的茎尖放置在温度为220C，-.，260C之间，光照强度20001x-30001x，光照时间为16h/d的培养室内，培养90d120d，保持室内卫生，定期用84消毒液擦洗培养架和地板，当看到小苗长出根系并发育成带有3个4个叶片的小植株时，经病毒检测不带病毒的株系方可进行扩繁。检测使用试剂符合ws233-2002的规定。4.2 脱毒苗扩繁程序4.2.1 增殖继代培养经分化培养20d-30d后，茎尖分化出新芽并不断生长和增殖，形成芽丛。将分化产生的芽丛进行切割，每2芽-3芽切为一块，转接于草莓增殖培养基上(见附

7、录A)，经过周期为20dr-.-30d的培养，继代3次8次。在转接过程中，去掉原生叶片有利于新茵的分化:增殖培养中随时清除愈伤组织，有利于芽苗的增殖和生长。4.2.2 生根培养2 0865/T 3916:2016 切取在增殖培养中长成高达2cm以上的分生苗，转接于生根培养基上培养(见附录A)，培养条件同增殖培养，多数草莓品种经15d-20d培养，即可生出优质新根，生根率达100%。4.2.3 脱毒苗保存将经检测不带病毒、长出根系并发育成带有3个-4个叶片的脱毒苗小苗进行扩繁，扩繁2代或3代后，一部分放入温度为120C150C的光照培养箱内保存，一部分可继续扩繁。脱毒组培瓶苗质量要求按DB33/

8、T 594.1-2005执行。3 0865/丁391&一2016附录A(规范性附录草莓组培快繁各阶段培养基配方母液成分化学试剂质量浓度硝酸饵CKN03)1900mg/L 大硝酸锻CNH4N03)1650mg/L 量氯化钙CCaC12)440mg/L y巳素硫酸镇(MgS04.7H20)370mg/L 磷酸二氢伺(KH2P04)170mg/L 硫酸镜CMnS04.4日20)22.3mg/L 棚酸CH04)6.2mg/L 微硫酸铮CZnS04)8.6mg/L MS培养基主呈呈主一腆化饵CKI)O.83mg/L 7G 素硫酸铜CCUS04.5HzO)O.025mg/L 氯化钻CCoClz 6HzO)

9、O.025mg/L 铝酸纳CNazMo04.2比0)O.25mg/L 铁盐硫酸亚铁CFeS04.7HzO)27.8mg/L 乙二胶囚乙酸二纳CEDTA-2Na)37.3mg/L 烟酸0.5mg/L 有肌醇100mg/L 机甘氨酸2.0mg/L 成分盐酸硫胶紊(维生素B1)O.lmg/L 盐酸毗哆素(维生素B6)0.5mg/L 茎尖培养激素6-BA,NAA 6-BAO.5mg/L,NAA O.lmg/L 增殖培养激素6-BA,IBA 6-BAl.0mg/L,IBA O.05mg/L 生根培养激素IBA IBA O.3mg/L 1/2MS培养基注1:MS团体培养基为MS培养基+30g/L白砂糖+4.8g/L琼脂粉，pH为5.8.注2:铁盐母液的配制:两种试剂分别称量并分别加热溶解，待两种试剂均溶解后混合，混合后的溶液继续加热使其充分整合，冷却后定容备用。4 附录B(规范性附录)草莓脱毒苗快繁流程0865/T 3916-2016 未脱除病毒诱导草莓植株茎尖剥离如芽苗乒移栽驯化生根培养继代增殖JHHU 祁d检lli-F草母li-jll唱病喝叫原原种苗生棍苗咱丛生芽咱己脱毒的芽苗5