实验9影响酶活性的因素.ppt

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1、实验 9 影响酶促反应的因素影响酶促反应的因素温度、pH、激活剂及抑制剂实验目的实验目的1.1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素2.2.学习测定酶活力的实验方法学习测定酶活力的实验方法实验原理实验原理 生物机体广泛存在各种不同功能的酶，催化不同生物机体广泛存在各种不同功能的酶，催化不同的生物化学反应：的生物化学反应：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水;唾唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖，液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽糖，用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水解反用碘显色或本尼

2、迪试剂可以检验酶催化的水解反应产物，并比较反应速度，从而衡量酶的比活性。应产物，并比较反应速度，从而衡量酶的比活性。通过试管颜色反应，可以定性研究影响酶活性的通过试管颜色反应，可以定性研究影响酶活性的因素。因素。酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强度等因素的影响。一般，温度每增高度等因素的影响。一般，温度每增高1010，反应，反应温度增加一倍，但同时，酶作为蛋白质，温度过温度增加一倍，但同时，酶作为蛋白质，温度过高会发生变性逐渐失活，反应速度达到最大值时高会发生变性逐渐失活，反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。的温度称为某种酶的最适温度。

3、酶活力与环境酸碱度密切相关，某种酶只在一酶活力与环境酸碱度密切相关，某种酶只在一定定pHpH范围才具有活力，酶活最高时的范围才具有活力，酶活最高时的pHpH称为该酶称为该酶的最适的最适pHpH。ClCl-可以使淀粉酶的活力增加，是其激活剂；而可以使淀粉酶的活力增加，是其激活剂；而CuCu2+2+使淀粉酶的活力下降，是其抑制剂。使淀粉酶的活力下降，是其抑制剂。实验器材实验器材材料：唾液材料：唾液试剂：试剂：0.1%0.1%蔗糖，蔗糖，0.1%0.1%淀粉，淀粉，1%1%淀粉，淀粉，0.2 0.2 mol/L Namol/L Na2 2HPOHPO4 4,0.2 mol/L NaH,0.2 mol

4、/L NaH2 2POPO4 4,1%NaCl,1%NaCl,1%CuSO1%CuSO4 4,1%Na,1%Na2 2SOSO4 4,本尼迪试剂，碘水，本尼迪试剂，碘水，用具：用具：50 mL 50 mL 烧杯烧杯 2 2，试管，玻璃漏斗，刻度移，试管，玻璃漏斗，刻度移液管（液管（2mL,5 mL)2mL,5 mL)，1000 uL1000 uL移液器，移液器，3737恒温恒温水浴，冰浴，电炉，沸水浴，水浴，冰浴，电炉，沸水浴，6 6孔白瓷板，一次孔白瓷板，一次性吸管性吸管 实验操作与现象实验操作与现象一.一.酶液的收集制备酶液的收集制备 漱口后，收集唾液漱口后，收集唾液 0.5mL,0.5m

5、L,加入加入3030倍去离子倍去离子水稀释，混合。水稀释，混合。配制酶促反应液时，其它组分均用刻度移液管配制酶促反应液时，其它组分均用刻度移液管进行；最后添加酶液时，可用移液器；显色反进行；最后添加酶液时，可用移液器；显色反应，可用一次性吸管滴加试剂。应，可用一次性吸管滴加试剂。实验操作与现象实验操作与现象一.一.酶的专一性酶的专一性结论：唾液淀粉酶结论：唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解专一性催化淀粉水解。无酶对照底物对照试试 管管1#2#3#4#备备 注注0.1%淀粉淀粉(mL)2-2-0.1%蔗糖蔗糖(mL)-2-2唾液唾液(mL)-0.50.5水（水（mL)0.50.5-现现 象象在白瓷盘中

6、滴加在白瓷盘中滴加2 2滴碘液，反应开始时和反应结束后分别取两滴反应滴碘液，反应开始时和反应结束后分别取两滴反应液，观察显色反应（液，观察显色反应（37 37 反应反应10 10 分钟）。分钟）。（此处可初步判断酶活力）（此处可初步判断酶活力）现现 象象本尼迪试剂本尼迪试剂(mL)0.10.10.10.1沸水浴（沸水浴（min）5555现现 象象二二 温度对酶活力的影响温度对酶活力的影响 试试 管管1#2#3#4#5#备备 注注1%淀粉淀粉(mL)1.01.01.01.01.0温度预处理温度预处理（2 min）37 0 沸水浴0 沸水浴唾液唾液(mL)0.50.50.5 0.50.5反应反应

7、5 min 37 0 沸水浴冷却0 37 沸水浴37 碘液碘液（滴）（滴）2 2222现现 象象结论：结论：本次实验条件下，本次实验条件下，唾液淀粉酶最适温度为？唾液淀粉酶最适温度为？0 0 可逆性抑制酶活性；沸水浴则使酶变性失活。可逆性抑制酶活性；沸水浴则使酶变性失活。操作注意：严格控制温度，碘显色反应均在控温处进行。酶活操作注意：严格控制温度，碘显色反应均在控温处进行。酶活力较大、小的组，可以调节酶用量，或室温代替力较大、小的组，可以调节酶用量，或室温代替37 进行。进行。三三 pHpH对酶活力的影响对酶活力的影响试试 管管1#2#3#4#5#备注备注0.2 M Na2HPO4(mL)0.

8、160.561.472.432.840.2 M NaH2PO4(mL)2.842.441.530.570.16反应体系反应体系 pH5.66.26.87.48.01%淀粉淀粉(mL)11111温度预处理温度预处理混匀，混匀，37 孵育孵育2 min唾液唾液(mL)0.50.50.50.50.5反应监控反应监控每每 1 min 取一滴，碘显色，至一管颜色变淡时取一滴，碘显色，至一管颜色变淡时取出所有试管，各加入取出所有试管，各加入2-5 滴碘液。摇匀，观察滴碘液。摇匀，观察现现 象象结论：结论：实验测得唾液淀粉酶的最适实验测得唾液淀粉酶的最适pHpH为？为？四四 离子对酶活力的影响离子对酶活力的

9、影响试试 管管1#2#3#4#备备 注注1%淀粉淀粉(mL)1.01.01.01.01%NaCl(mL)1-1%CuSO4（mL)-1-1%Na2SO4（mL)-1-水（水（mL)-1摇匀，摇匀，37 37 反应反应2 2分钟。分钟。（据第一次显色情况，调节观测频度）（据第一次显色情况，调节观测频度）唾液唾液(mL)0.50.50.50.5在白瓷盘中滴加在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始后每滴碘液，反应开始后每1-2min各管取两各管取两滴反应液，碘显色观察；记录最先显著变浅的管号和反滴反应液，碘显色观察；记录最先显著变浅的管号和反应时间。将所有试管取出，加入应时间。将所有试管取出，加入2滴碘液，比较颜色。滴碘液，比较颜色。结论：结论：实验测得实验测得ClCl-是唾液淀粉酶的？而是唾液淀粉酶的？而CuCu2+2+是？是？讨论：1.酶催化反应的主要特征有哪些？酶催化反应的主要特征有哪些？2.2.实验考查的各项因素对酶活性的调节机制？实验考查的各项因素对酶活性的调节机制？3.3.酶活性在代谢途径中的快速调节方式有哪几种重酶活性在代谢途径中的快速调节方式有哪几种重要的方式？要的方式？4.4.本次实验中影响实验成败的关键环节有哪些？本次实验中影响实验成败的关键环节有哪些？5.5.你认为本项实验设计还可以有哪些改进？为什么？你认为本项实验设计还可以有哪些改进？为什么？