实验五(二)土壤中微生物的分离纯化及观察.ppt

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1、实验五实验五土壤中微生物的分离纯化 目的要求目的要求1.掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。物的基本操作技术。2.观察并识别微生物的菌落特征（群体形态）观察并识别微生物的菌落特征（群体形态）。（一）微生物的分离纯化及观察（一）微生物的分离纯化及观察基本原理基本原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。1.1.简易单细胞挑取法简易单细胞挑取法 （简易单孢子分离法）（简易单孢子分离法）2.2.平板分离法平板分离法

2、选择适宜的培养基选择适宜的培养基，微生物在，微生物在固体培养基固体培养基上上生长形成的单个生长形成的单个菌落菌落可以是由一个或几个细胞繁可以是由一个或几个细胞繁殖而成的集合体。殖而成的集合体。挑取单菌落可获得一种纯培养。挑取单菌落可获得一种纯培养。方法：方法：稀释涂布平板法稀释涂布平板法、平板划线分离法平板划线分离法器材器材分离源：分离源：自采集土壤样品自采集土壤样品培养基培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏号号培养基、马丁氏（孟加拉红）培养基培养基、马丁氏（孟加拉红）培养基溶液或试剂溶液或试剂 盛盛4.5ml4.5ml无菌水的试管，盛无菌水的试管，盛90ml90m

3、l无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶。仪器或其他用具仪器或其他用具 振荡器，无菌培养皿，无菌振荡器，无菌培养皿，无菌吸管，接种环，电磁炉，培养箱，吸耳球等。吸管，接种环，电磁炉，培养箱，吸耳球等。1 1、编号编号：取无菌平皿个：取无菌平皿个。另取无菌水支，依。另取无菌水支，依次标明次标明1010-2-2、10103 3、1010-4-4、1010-5-5。2 2、倒平板倒平板：分别将三种培养基：分别将三种培养基溶化后，溶化后，冷却至冷却至55556060时时，每种培养基，每种培养基各倒皿各倒皿，标注培养基名，标注培养基名称。其中，高氏称。其中，高氏号培养基在倒入前需先添

4、加号培养基在倒入前需先添加滴滴10%10%的苯酚。的苯酚。一、稀释涂布平板法（全组完成）一、稀释涂布平板法（全组完成）3、制备土壤稀释液 0.5ml各4.5ml 无菌水各取稀释样0.ml涂布放菌液时吸管尖不要碰到液面，即放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只接触一个稀释度。每一支吸管只接触一个稀释度。牛肉膏平板牛肉膏平板马丁氏平板马丁氏平板 102 10-3 10-4 10-510-1 10-2 10-3 10-4 10-5 0.5ml 0.5ml 0.5ml高氏高氏号平板号平板、涂布涂布、培养培养 将高氏将高氏号平板、马丁氏平板号平板、马丁氏平板倒倒置置于于28 28 培养培养d d，牛

5、肉膏蛋白胨平牛肉膏蛋白胨平板板倒置倒置于于37 37 培养培养培养培养1 12d 2d。、菌落观察菌落观察观察并描述土壤样品中分离到的细菌、放线观察并描述土壤样品中分离到的细菌、放线菌、霉菌的菌、霉菌的菌落特征菌落特征。二、平板划线分离法（个人完成）二、平板划线分离法（个人完成）1 1、倒倒平平板板：将将种种培培养养基基溶溶化化后后，各各倒倒一一皿皿。并并用用记记号笔号笔标标明培养基名称、样品编号、个人学号等。明培养基名称、样品编号、个人学号等。2 2、划划线线：分分别别挑挑取取土土壤壤样样品品中中10101 1的的土土壤壤悬悬液液一一环环，在三种平板上划线，以分离细菌、放线菌、霉菌。在三种平

6、板上划线，以分离细菌、放线菌、霉菌。分区划线、连续划线分区划线、连续划线分区划线分区划线（适用于浓度较（适用于浓度较大的样品）大的样品）连续划线（适用于浓度较连续划线（适用于浓度较小的样品）小的样品）3、培培养养将将高高氏氏号号平平板板、马马丁丁氏氏平平板板倒倒置置于于28 28 培培养养d d，牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨平平板板倒倒置置于于37 37 培培养培养养培养1 12d 2d。4 4、菌落观察菌落观察、挑挑菌菌 挑挑取取单单个个菌菌落落接接种种到到斜斜面面上上培培养养，此此后后镜镜检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分离纯化。检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分离纯化。实验结果实验结果(

7、P4 五、五、.(、)你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单菌你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单菌落？如果不是，请分析其原因。落？如果不是，请分析其原因。在不同的平板上你分离得到了哪些类群的微生物？简在不同的平板上你分离得到了哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征述它们的菌落特征。思考题思考题如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。验的主要步骤。(P(P4 4 五五.2.(1).2.(1)如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方案。案。倾注法倾注法涂布法涂布法倒平板倒平板a a 皿加法皿加法 b b手持法手持法细细 菌菌放线菌放线菌霉菌霉菌