828-结直肠癌异时性肝转移的分子标志物：miR-181a及其生物学功能.ppt

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1、结直肠癌异时性肝转移的分子标结直肠癌异时性肝转移的分子标志物：志物：miR-181amiR-181a及其生物学功能及其生物学功能顾晋顾晋 陈治国陈治国北京肿瘤医院北京肿瘤医院北京大学临床肿瘤学院北京大学临床肿瘤学院研究背景研究背景microRNAmicroRNA的概念及其作用机制的概念及其作用机制 研究背景研究背景miRNAmiRNA对肿瘤的发生发展起着重要的作用对肿瘤的发生发展起着重要的作用miRNAmiRNA在不同肿瘤组织中具有特征性表达模式在不同肿瘤组织中具有特征性表达模式miRNAmiRNA与肿瘤的生物学行为密切相关与肿瘤的生物学行为密切相关可用于诊断可用于诊断CLLCLL、乳腺癌和软

2、组织肉瘤等肿瘤、乳腺癌和软组织肉瘤等肿瘤miRNAmiRNA与结直肠癌（与结直肠癌（CRCCRC）肝转移的关系？）肝转移的关系？实验目的实验目的筛选可能有助于预测筛选可能有助于预测CRCCRC肝转移的肝转移的miRNAsmiRNAsCRCCRC肝转移相关的肝转移相关的miRNAsmiRNAs功能研究功能研究 无肝转移的无肝转移的CRCCRC肝转移肝转移 miRNAmiRNA表达的芯片检测表达的芯片检测 伴有同时性肝转移的伴有同时性肝转移的CRCCRC 生物信息学分析生物信息学分析 原位杂交检测原位杂交检测筛选出筛选出CRCCRC肝转移相关肝转移相关miRNAsmiRNAs 分子生物学验证分子生

3、物学验证 组织芯片构建组织芯片构建实验方案实验方案实验方案实验方案体外培养体外培养病毒感染病毒感染 基因增强表达效率测定基因增强表达效率测定 比较转染前后生物学性状的改变比较转染前后生物学性状的改变 低转移潜能低转移潜能CRCCRC细胞系细胞系HT29HT29接种接种裸鼠移殖瘤裸鼠移殖瘤裸鼠局部成裸鼠局部成瘤能力瘤能力浸润浸润能力能力生长生长增殖增殖裸鼠局部瘤的裸鼠局部瘤的转移潜能转移潜能携带携带miRNAmiRNA前体的慢前体的慢病毒表达载体病毒表达载体实验结果实验结果完成完成miRNAmiRNA芯片检测芯片检测 无肝转移的无肝转移的CRCCRC组织：组织：5 5例例伴有同时性肝转移的伴有同

4、时性肝转移的CRCCRC组织：组织：5 5例例筛选出筛选出7 7个在两组间差异表达倍数大于个在两组间差异表达倍数大于1.71.7倍的倍的miRNAsmiRNAsmiR-181amiR-181a，152152，320a320aLet-7dLet-7d，miR-15bmiR-15b，20b20b，223223实验结果实验结果构建组织芯片构建组织芯片同时性肝转移的同时性肝转移的CRCCRC原发灶原发灶：n=160异时性肝转移的异时性肝转移的CRCCRC原发灶原发灶：n=37无肝转移的无肝转移的CRCCRC原发灶：原发灶：n=97远癌正常远癌正常CRCCRC粘膜：粘膜：n=72原位杂交原位杂交DigD

5、ig标记的标记的LNALNA探针探针实验结果实验结果构建慢病毒过表达载体构建慢病毒过表达载体LV-miR-181a-GFPLV-NC-GFP慢病毒载体转染慢病毒载体转染HT29HT29细胞系细胞系实验结果实验结果Figure 1.Figure 1.miRNAmiRNA detection detection in colorectal cancer in colorectal cancer tissues by LNA-ISH.tissues by LNA-ISH.表表1.1.miRNAsmiRNAs在在CRCCRC组织中的表达情况组织中的表达情况Figure 2.overall surviv

6、al in CRC patients with Figure 2.overall survival in CRC patients with different expression level of miR-181a different expression level of miR-181a Figure 3.The expression of reporter gene GFP in HT29 cell lineFigure 4.The fold change of the miR-181a expression in cell lineFigure 5.miR-181a enhance

7、 the proliferation of HT29 cellFigure 6.miR-181a enhance the migration of HT29 cell in vitroFigure 7.miR-181a enhance the migration and invasion of HT29 cell in vitroFigure 8.In vivo tumor growth in NOD-SCID miceFigure 9.Xenograft tumors in three groups 结论结论miR-181a对预测CRC异时性肝转移可能具有重要的意义miR-181a高表达是预后不良的分子标志物miR-181a促进HT29细胞的生长，迁移和浸润对miR-181a功能的后续研究可能有助于阐明CRC异时性肝转移的调控机理