第十章维生素的测定.ppt

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1、第十章第十章 维生素的测定维生素的测定 （一）概述（一）概述 维生素的测定是食品分析的重要内容。测定方法有：维生素的测定是食品分析的重要内容。测定方法有：生物鉴定法，需进行动物饲养试验。费时、费力。如测生物鉴定法，需进行动物饲养试验。费时、费力。如测V VD D2121天，少用天，少用 微生物法微生物法:如如VBVB2 2 列入国标、繁琐、耗时。列入国标、繁琐、耗时。化学法化学法:常用滴定法具有简便、快速、易普及常用滴定法具有简便、快速、易普及 仪器法仪器法:常用方法有：比色法、紫外、荧光、色谱（薄层、气相、液相）常用方法有：比色法、紫外、荧光、色谱（薄层、气相、液相）(二二)脂溶性维生素的测

2、定脂溶性维生素的测定1 1、理化性质、理化性质 （1 1）溶解性：易溶于脂肪、乙醚、丙酮、氯仿等有机溶剂）溶解性：易溶于脂肪、乙醚、丙酮、氯仿等有机溶剂 （2 2）耐酸碱性）耐酸碱性 A D EA D E 酸酸 碱碱 （3 3）耐热、氧化性耐热、氧化性 热热 氧化氧化 2 2、样品处理、样品处理 样品样品3 3、基本分析方法、基本分析方法 比色比色 紫外紫外 荧光荧光 色谱色谱A A 325nm D D 265nm E E 4 4、比色法测定、比色法测定（1 1）V VA A的测定（三氯化锑比色法）的测定（三氯化锑比色法）V VA A（0 050g/ml50g/ml）1ml1ml 25 25三

3、氯化锑三氯化锑三氯甲烷三氯甲烷9ml 9ml 3cm 3cm比色皿比色皿 =620nm=620nm（蓝色络合物）（蓝色络合物）6s6s内测定内测定A A（灵敏、不稳定）（灵敏、不稳定）（2 2）V VD D的测定的测定 用用分离柱分离柱装入无水硫酸钠；白色硅藻土、聚乙二醇；中性装入无水硫酸钠；白色硅藻土、聚乙二醇；中性氧化铝；无水硫酸钠氧化铝；无水硫酸钠;用石油醚洗涤，收集用石油醚洗涤，收集200ml200ml淋洗液。用水淋洗液。用水在分液漏斗中洗淋。将石油醚层经无水硫酸钠脱水后，减压抽在分液漏斗中洗淋。将石油醚层经无水硫酸钠脱水后，减压抽干，用干，用5ml5ml三氯甲烷溶解备用三氯甲烷溶解备

4、用分离纯化液分离纯化液 吸取分离纯化液吸取分离纯化液1ml1ml于于1cm1cm比色杯中，加入三氯化锑（比色杯中，加入三氯化锑（2525）三氯甲烷三氯甲烷乙酰氯溶液乙酰氯溶液3ml3ml于于=500nm=500nm（橙黄色化合物）测（橙黄色化合物）测A A（测定值为（测定值为D D2 2、D D3 3的总和）的总和）（3 3）V VE E的测定的测定皂化：皂化：皂化处理需在皂化处理需在N N2 2气流中进行气流中进行纯化：纯化：将处理样液注入装有吸附剂将处理样液注入装有吸附剂FloridinXSFloridinXS的分离柱，用苯的分离柱，用苯淋洗出淋洗出25ml25ml样液样液定容：定容：取样

5、液取样液1-2ml1-2ml于于2525容量瓶中，加入容量瓶中，加入0.20.2FeClFeCl3 3乙醇液，乙醇液，加入加入0.50.5,联氮苯，乙醇联氮苯，乙醇比色：比色：溶液溶液1ml1ml用无水乙醇定容。用无水乙醇定容。10min10min后于后于=520nm=520nm，测，测A A（V VE E使使FeFe3 3+Fe Fe2 2+，FeFe2 2+,联氮苯红色化合物）联氮苯红色化合物）（也可用邻二氮菲比色）（也可用邻二氮菲比色）5 5、紫外分光光度法、紫外分光光度法（1 1）V VA A的测定的测定V VA A在异丙醇溶液中，在在异丙醇溶液中，在=325nm=325nm下有吸收峰

6、下有吸收峰,吸收处理液吸收处理液（同比色法）用异丙醇定容，于（同比色法）用异丙醇定容，于=325nm=325nm处测处测A A（2 2）V VD D的测定的测定:样品处理同比色法样品处理同比色法;处理样品用无水乙醇溶处理样品用无水乙醇溶解，定容。于解，定容。于=265nm=265nm处测处测A A6 6、高效液相色谱法、高效液相色谱法（1 1）V VA A、V VE E以流动相（甲醇：水以流动相（甲醇：水=98=98：2 2）溶解样品处理液（过）溶解样品处理液（过0.45m0.45m滤）取滤）取20L;20L;用用C C1818反相柱分离反相柱分离VAVA、VE;VE;用紫外检测器检测用紫外检

7、测器检测 V VA A=325nm;V=325nm;VE E=294=294（）298298（）（2 2）V VD D 流动相：乙腈：甲醇流动相：乙腈：甲醇=1=1：1;1;紫外检测器波长紫外检测器波长;=254nm;=254nm7 7、荧光法、荧光法 激发波长激发波长 发射波长发射波长 VA 340 490 nm VD 425 475 nm VE 295 324 nm（三）水溶性维生素的测定（三）水溶性维生素的测定1 1、荧光法测定、荧光法测定B B1 1、B B2 2、C C、(GB)(GB)（1 1）荧光物质）荧光物质硫胺素硫胺素K3Fe(CN)6 NaOH 硫色素（荧光物质）硫色素（荧

8、光物质）核黄素（荧光物质）核黄素（荧光物质）抗坏血酸抗坏血酸(O2,活性碳活性碳)脱氢抗坏血酸脱氢抗坏血酸 （邻苯二胺邻苯二胺）喹喔啉（荧光物质）喹喔啉（荧光物质）（2 2）测定条件）测定条件 B B1 1 B B2 2 C C激发光（激发光（nmnm）365 440 338365 440 338发射光（发射光（nmnm）435 525 420435 525 420 2、2 2，66二氯靛酚滴定法测二氯靛酚滴定法测VcVc （1 1）原理）原理 GB6195-86 在酸性溶液中氧化型在酸性溶液中氧化型2 2，66二氯靛酚呈红色，当用二氯靛酚呈红色，当用2 2，66二氯靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性

9、溶液时，在抗坏血酸尚二氯靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未全部被氧化时，滴下的未全部被氧化时，滴下的2 2，66二氯靛酚立即被还原为无色，二氯靛酚立即被还原为无色，抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的2 2，66二氯靛酚溶液呈红二氯靛酚溶液呈红色，所以，在滴定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表色，所以，在滴定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。

10、含量。（2 2）2 2，66二氯靛酚溶液的标定二氯靛酚溶液的标定 称称取取2 2，66二二氯氯酚酚靛靛酚酚钠钠盐盐50mg50mg溶溶于于200ml200ml含含52mg 52mg 碳碳酸酸氢氢钠钠热热水水中中，冷冷后后加加水水稀稀释释至至250ml250ml，过过滤滤后后装装入入棕棕色色瓶瓶于于冰冰箱箱中中保保存存，临临用用前前按按下下法法标标定定：取取5ml5ml标标准准抗抗坏坏血血酸酸溶溶液液于于三三角角瓶瓶中中，加加5ml 5ml 2%2%标标准准抗抗坏坏血血酸酸溶溶液液于于三三角角瓶瓶中中，加加5ml 5ml 2%2%草草酸酸，用用2 2，66二二氯氯酚酚靛靛酚酚溶溶液液滴滴定定至至

11、微微红红色色，15S15S不不褪褪色色即即为终点，并计算出每为终点，并计算出每1ml1ml染料溶液相当的抗坏血酸毫克数。染料溶液相当的抗坏血酸毫克数。(3)(3)操作步骤操作步骤A.A.称取捣碎的果蔬样品称取捣碎的果蔬样品20g20g，放在研钵中，加，放在研钵中，加2%2%草酸溶液少许草酸溶液少许研碎，再转入研碎，再转入200ml200ml容量瓶中，加容量瓶中，加 草酸稀释至刻度，过草酸稀释至刻度，过滤备用。如果滤液有颜色，可用白陶土脱色。滤备用。如果滤液有颜色，可用白陶土脱色。B B吸取样品滤液吸取样品滤液10ml10ml于烧杯中，用已标定的于烧杯中，用已标定的2 2，6-6-二氯酚靛二氯酚

12、靛酚溶液滴定至出现微红色，且酚溶液滴定至出现微红色，且15s15s不褪色为止，记下染料用量。不褪色为止，记下染料用量。同时，以同时，以10ml 2%10ml 2%草酸溶液作为空白按同上方法进行滴定，作草酸溶液作为空白按同上方法进行滴定，作三个重复。三个重复。(4)(4)结果计算结果计算 （VVoVo）T X（mg/100g）100 W 式中：式中：W100gW100g样品中含有的抗坏血酸毫克数；样品中含有的抗坏血酸毫克数；VoVo空白空白滴定消耗的染料毫升数；滴定消耗的染料毫升数；VV样品滴定消耗的染料毫升数；样品滴定消耗的染料毫升数；T1mlT1ml染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数；染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数；WW滴定时吸滴定时吸取的样品溶液相当样品的质量（取的样品溶液相当样品的质量（g)g)思考题：思考题：1 1、测定维生素、测定维生素A A、D D、E E、B B1 1、B B2 2、C C 各有各有哪些方法？（写出方法名称）哪些方法？（写出方法名称）