第6章色谱分离技术ppt课件.ppt

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1、在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么第七章第七章色谱分离技术色谱分离技术在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么概述概述吸附色谱法吸附色谱法分配色谱法分配色谱法离子交换色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法凝胶色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法亲和色谱法亲和色谱法色谱

2、法色谱法在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么色谱分离基本原理：使用外力使含有样品的流动相（气体、液体或超临界流体）通过一固定于柱或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。处于柱起始端的样品中各组份与两相进行不同程度的作用。与固定相作用强的组份随流动相流出的速度慢，而与固定相作用弱的组份随流动相流出的速度快。由于流出的速度的差异，使得混合组份最终形成各个组份的“带(band)”或“区(zone)”，对依次流出的各个组份物质可分别

3、进行定性、定量分析。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 2.2.色谱法的特点色谱法的特点 （1）概念）概念 色谱法是一种物理的分离方法，利用不同物色谱法是一种物理的分离方法，利用不同物质在质在两相两相中具有不同的分配系数，并通过两相中具有不同的分配系数，并通过两相不断的相对运动而实现分离的方法。不断的相对运动而实现分离的方法。其中一相是其中一相是固定相固定相，通常是表面积很大的或多，通常是表面积很大的或多孔性固体；另一相是

4、孔性固体；另一相是流动相流动相，是液体或气体。，是液体或气体。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 流动相流经固定相时，由于物质在两相间的流动相流经固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离；分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离；或者说，易分配于固定相中的物质移动速度慢，或者说，易分配于固定相中的物质移动速度慢，易分配于流动相中的物质移动速度快，因而逐易分配于流动相中的物质移动速度快，因而逐步分

5、离。步分离。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （2）基本特点基本特点：分离效率高。分离效率高。其效率是所有分离纯化技术中最高其效率是所有分离纯化技术中最高的，这种高效的分离尤其适于极复杂混合物。的，这种高效的分离尤其适于极复杂混合物。应用范围广。应用范围广。（非）极性、（非）离子型、小分（非）极性、（非）离子型、小分子和大分子、无机和有机及生物活性物质、热（不）稳子和大分子、无机和有机及生物活性物质、热（不）稳定化合物；

6、定化合物；尤其是对生物大分子的分离尤其是对生物大分子的分离，其他方法无法，其他方法无法取代。取代。选择性强。选择性强。可变参数很多：不同的色谱分离方法、可变参数很多：不同的色谱分离方法、固定相和流动相、操作条件。固定相和流动相、操作条件。设备简单，操作方便，且不含强烈的操作条件，设备简单，操作方便，且不含强烈的操作条件，因而不容易使物质变性，特别适于不稳定的大分子因而不容易使物质变性，特别适于不稳定的大分子有机化合物。有机化合物。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自

7、己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 缺点：缺点：处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，工业生产上应用较少。主要用于实验室，工业生产上应用较少。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 3.3.色谱法的分类色谱法的分类分离机理分离机理操作方法操作方法流动相的物态流动相的物态实验技术实验技术吸附色谱法吸附色谱法分配色谱法分配色谱法离子交换色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法

8、凝胶色谱法亲和色谱法亲和色谱法柱色谱法柱色谱法纸色谱法纸色谱法薄层色谱法薄层色谱法气相色谱法气相色谱法液相色谱法液相色谱法迎头法迎头法顶替法顶替法洗脱分析法洗脱分析法在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 4.4.色谱分离方法的选择色谱分离方法的选择初级代谢产物：初级代谢产物：氨基酸、有机酸、核苷酸、氨基酸、有机酸、核苷酸、单糖类、脂肪酸单糖类、脂肪酸次级代谢产物：次级代谢产物：生物碱、萜类、糖苷、色素、生物碱、萜类、糖苷、色

9、素、鞣质类、抗生素鞣质类、抗生素生物大分子：生物大分子：蛋白质、酶、多肽、核酸、多糖蛋白质、酶、多肽、核酸、多糖目目的的产产物物在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 色谱分离方法的选择依据色谱分离方法的选择依据：目的产物的分子结构、物理化学性质及相对目的产物的分子结构、物理化学性质及相对分子质量；分子质量；主要杂质，特别是分子结构、大小和理化特主要杂质，特别是分子结构、大小和理化特性与目的产物相近的杂质成分与含量；性与目的产

10、物相近的杂质成分与含量；目的产物在色谱分离过程中的生理活性的稳目的产物在色谱分离过程中的生理活性的稳定性。定性。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 二、吸附色谱法二、吸附色谱法 依靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差依靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的方法。异而分离的方法。吸附剂吸附剂是一些多孔性物质，表面布满许多吸是一些多孔性物质，表面布满许多吸附位点，即活性中心。吸附色谱过程就是样品附位点，即活性中心。吸附色谱

11、过程就是样品中各组分的分子与流动相分子不断争夺吸附剂中各组分的分子与流动相分子不断争夺吸附剂活性中心并不断达到平衡的过程。活性中心并不断达到平衡的过程。被吸附的物质称为被吸附的物质称为吸附物吸附物。吸附力吸附力主要是范德华力，有时也可能形成氢主要是范德华力，有时也可能形成氢键或化学键。键或化学键。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （一）基本原理（一）基本原理 溶液中某组分的分子在运动中碰到一个固体表溶液中某组分的分子在运

12、动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固体表面上，发生吸附作用。面时，分子会贴在固体表面上，发生吸附作用。1.1.发生吸附作用的原理：发生吸附作用的原理：固体表面分子（或原子）与固体内部分子（或原子）固体表面分子（或原子）与固体内部分子（或原子）所处的状态不同：所处的状态不同：固体固体内部内部分子（或原子）受临近四周分子的分子（或原子）受临近四周分子的作用力是作用力是对称对称的，作用力总和为零，即彼此互相抵消，故分子处的，作用力总和为零，即彼此互相抵消，故分子处于平衡状态。于平衡状态。界面上界面上的分子所受的力的分子所受的力不对称不对称，作用力总和不等于零，作用力总和不等于零，合力指向固体内部。合

13、力指向固体内部。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 2.2.吸附的类型：吸附的类型：物理吸附物理吸附化学吸附化学吸附交换吸附交换吸附在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么物理吸附物理吸附 化学吸附化学吸附产生方式产生方式分子力（范德华力）分子力（范德华力）

14、库仑力库仑力(电子转移，生成化学键电子转移，生成化学键)活化能活化能低低高高进行温度进行温度低温低温高温高温释放热量释放热量小小很大很大速度速度较快，容易达到平衡较快，容易达到平衡慢，平衡慢慢，平衡慢选择性选择性不严格不严格强强在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 交换吸附交换吸附：吸附剂表面如果由极性分子或离子组成，则会吸附剂表面如果由极性分子或离子组成，则会吸引溶液中带相反电荷的离子形成双电层，同时吸引溶液中带相反电荷的

15、离子形成双电层，同时放出等物质的量的离子，发生离子交换。放出等物质的量的离子，发生离子交换。离子的电荷离子的电荷是决定因素，离子所带电荷越多，是决定因素，离子所带电荷越多，在吸附剂表面的相反电荷点上的吸附力越强。在吸附剂表面的相反电荷点上的吸附力越强。电荷相同的离子，水化半径越小，越容易被吸电荷相同的离子，水化半径越小，越容易被吸附。附。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 3.3.常用的吸附剂：常用的吸附剂：有机吸附剂：有

16、机吸附剂：无机吸附剂：无机吸附剂：活性炭、纤维素、大孔吸附树脂、活性炭、纤维素、大孔吸附树脂、聚酰胺聚酰胺 氧化铝、硅胶、人造沸石、磷酸钙、氧化铝、硅胶、人造沸石、磷酸钙、氢氧化铝氢氧化铝按按化化学学结结构构分分在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 4.4.吸附色谱的基本过程和分类吸附色谱的基本过程和分类 固定相对各组分吸附力的大小次序：固定相对各组分吸附力的大小次序：（1）过程）过程在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现

17、象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（2）分类）分类吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法柱色谱法柱色谱法操作方法的操作方法的不同不同在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 5.5.吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法 （thin layer chromatography,TLC）薄层色谱法：薄层色谱法：将吸附剂或

18、支持剂均匀的铺在将吸附剂或支持剂均匀的铺在玻璃板上，铺成一薄层，然后把要分离的样品玻璃板上，铺成一薄层，然后把要分离的样品点到薄层的起始线上，用合适的溶剂展开，最点到薄层的起始线上，用合适的溶剂展开，最后使样品中各组分得到分离。后使样品中各组分得到分离。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （1 1）原理：原理：利用混合物中各组分的物理化学性质的差异，利用混合物中各组分的物理化学性质的差异，在层析过程中，在不相溶的两相中分布

19、不同，从在层析过程中，在不相溶的两相中分布不同，从而达到分离的目的。而达到分离的目的。吸附剂吸附剂：涂布在薄层板上：涂布在薄层板上（固定相）（固定相）展开剂展开剂：在展开过程中流过固定相的溶剂：在展开过程中流过固定相的溶剂 （流动相）（流动相）两两相相在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中用适宜的溶剂（展开剂）展开。密闭的容器中用适宜的溶

20、剂（展开剂）展开。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和展开剂当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、解吸附、再吸附、再之间发生连续不断的吸附、解吸附、再吸附、再解吸附。解吸附。由于吸附剂对不同物质的由于吸附剂对不同物质的吸附力吸附力大小不同：大小不同：对极性大的物质吸附力强，对极性大的物质吸附力强，对极性小的物质吸附力弱。对极性小的物质吸附力弱。在日常生活中，随处都可以

21、看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 移动速度的不同移动速度的不同：易被吸附的物质相对移动较慢，在薄层板上移易被吸附的物质相对移动较慢，在薄层板上移动的距离就小；动的距离就小；较难被吸附的物质移动较快，移动的距离大。较难被吸附的物质移动较快，移动的距离大。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点

22、点算不了什么 经过一段时间的展开，不同物质就被彼此分开，经过一段时间的展开，不同物质就被彼此分开，最后形成互相分离的斑点。最后形成互相分离的斑点。将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，用特将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出后，用特定的方法使斑点显色，达到定性和定量的目的。定的方法使斑点显色，达到定性和定量的目的。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （2 2）吸附剂和展开剂的选择：吸附剂和展开剂的选择：吸附剂：氧化铝、硅胶和

23、聚酰胺吸附剂：氧化铝、硅胶和聚酰胺 展开剂：由实验确定。展开剂：由实验确定。极性越大，对物质的洗脱能力越强极性越大，对物质的洗脱能力越强在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （3 3）基本操作基本操作 薄层色谱板的制备薄层色谱板的制备点样点样展开展开显色显色在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在

24、浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 薄层板的制备：薄层板的制备：在一块玻璃板（薄厚一致，表面光滑平整）表面涂在一块玻璃板（薄厚一致，表面光滑平整）表面涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等。上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等。(-(-涂布涂布)为了增加薄层的牢固性且易于保存，可在涂布过程为了增加薄层的牢固性且易于保存，可在涂布过程中加入某些中加入某些黏合剂黏合剂。如羧甲基纤维素钠（。如羧甲基纤维素钠（CMC-NaCMC-Na）在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪

25、费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 点样：点样：用毛细管吸取样品溶液，轻轻接触到薄层上，用毛细管吸取样品溶液，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上。使样品自动吸到薄层上。1.5 2 cm直径直径 3 3 mm在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 展开：展开：在密闭容器中进行：层析缸。在密闭容器中进行：层析缸。最常用的展开法：最常用的展开法：上行展开法上行展开法 薄板放入层析缸时，切勿使溶剂浸没样品点。薄板放入层析缸时，切

26、勿使溶剂浸没样品点。当溶剂移动到接近薄板上端边缘时，取出薄板，当溶剂移动到接近薄板上端边缘时，取出薄板，划出溶剂前沿。划出溶剂前沿。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 显色：显色：也称定位，即用某种方法使经色谱展开后的混也称定位，即用某种方法使经色谱展开后的混合物各组分斑点呈现颜色。合物各组分斑点呈现颜色。每类化合物都有特定的显色剂。每类化合物都有特定的显色剂。各类物质常用的显色剂和万能薄层显色剂各类物质常用的显色剂和万能

27、薄层显色剂在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 显色的方法：显色的方法：喷雾显色法喷雾显色法紫外线照射法紫外线照射法碘蒸气显色法碘蒸气显色法生物显迹法生物显迹法有些化合物在紫外灯下会有些化合物在紫外灯下会产生荧光或暗色斑点产生荧光或暗色斑点在充满碘蒸气的容器中，多数在充满碘蒸气的容器中，多数天然药物成分会产生棕色斑点天然药物成分会产生棕色斑点抗生素等生物活性物质抗生素等生物活性物质每类化合物都有特定的显色剂每类化合物都有特定

28、的显色剂在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 6.6.吸附柱色谱法吸附柱色谱法 （1 1）基本原理同薄层色谱法。）基本原理同薄层色谱法。吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺、活性炭吸附剂：氧化铝、硅胶、聚酰胺、活性炭 （2 2）色谱柱：玻璃柱）色谱柱：玻璃柱 在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，

29、也许你认为浪费这一点点算不了什么柱色谱装置柱色谱装置柱色谱装置柱色谱装置在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（3 3）基本操作）基本操作装柱装柱上样上样洗脱洗脱吸附剂吸附剂干法装柱干法装柱湿法装柱湿法装柱被分离物质被分离物质干法上样干法上样湿法上样湿法上样梯度洗脱，各组分先后被洗出梯度洗脱，各组分先后被洗出在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随

30、处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 三、分配色谱法三、分配色谱法 分配色谱法分配色谱法：利用溶质在固定相和流动相之利用溶质在固定相和流动相之间的分配系数不同而进行分离的方法。间的分配系数不同而进行分离的方法。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 分配色谱法分配色谱法：利用被分离物质中各成分在两利用被分离物质中各成分在两种不相混溶的种不相混溶的液体液体之间的分布情况不同而使

31、混之间的分布情况不同而使混合物得到分离。合物得到分离。（相当于一种连续性的溶剂提取方法，只是（相当于一种连续性的溶剂提取方法，只是把其中一个溶剂设法固定，用另一种溶剂来冲把其中一个溶剂设法固定，用另一种溶剂来冲洗，这种分离不经过吸附程序，仅由溶剂的提洗，这种分离不经过吸附程序，仅由溶剂的提取而完成，所以叫取而完成，所以叫。）。）（一）基本原理（一）基本原理在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么固定相：固定在柱内的液体固定相：固

32、定在柱内的液体流动相：用作冲洗的液体流动相：用作冲洗的液体载体：使固定相停留在柱内的固体载体：使固定相停留在柱内的固体 在洗脱过程中，流动相与固定相发生接触，由在洗脱过程中，流动相与固定相发生接触，由于样品中各成分在两相之间的分布不同，因此向于样品中各成分在两相之间的分布不同，因此向下移动的速度不同，易溶于流动相中的成分移动下移动的速度不同，易溶于流动相中的成分移动快，而在固定相中溶解度大的成分移动慢，因此快，而在固定相中溶解度大的成分移动慢，因此得到分离。（溶解度）得到分离。（溶解度）将含固定相的将含固定相的载体装在柱内载体装在柱内加入被分离溶液加入被分离溶液洗脱洗脱分离：分离：在日常生活中

33、，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（二）载体、固定相和流动相的选择（二）载体、固定相和流动相的选择1.1.载体的选择载体的选择 惰性、无吸附能力、能吸留较大量固定相。惰性、无吸附能力、能吸留较大量固定相。主要有硅胶、硅藻土、纤维素，聚乙烯粉主要有硅胶、硅藻土、纤维素，聚乙烯粉2.2.固定相的选择固定相的选择 水、缓冲液、酸的水溶液水、缓冲液、酸的水溶液 “反相层析法反相层析法”：有机溶剂作固定相：有机溶剂作固定相3.3.展开剂的选择展

34、开剂的选择 在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（三）基本操作（三）基本操作装柱装柱上样上样洗脱洗脱在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 四、离子交换色谱法四、离子交换色谱法 与离子交换法的区别？与离子交换法的区别？离子交换法离子交换法：应用离子交换剂作为

35、吸附剂，通过静：应用离子交换剂作为吸附剂，通过静电引力将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂电引力将溶液中带相反电荷的物质吸附在离子交换剂上，然后用合适的洗脱剂将吸附物从离子交换剂上洗上，然后用合适的洗脱剂将吸附物从离子交换剂上洗脱下来，从而达到分离、浓缩、纯化的目的。脱下来，从而达到分离、浓缩、纯化的目的。离子交换树脂离子交换树脂 组成组成 活性离子活性离子 离子交换色谱法的固定相应该是什么？离子交换色谱法的固定相应该是什么？在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自

36、己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 离子交换色谱法离子交换色谱法：利用离子交换树脂作为固定利用离子交换树脂作为固定相，以适宜的溶剂作为流动相，使溶质按它们的相，以适宜的溶剂作为流动相，使溶质按它们的离子交换亲和力的不同而得到分离的方法。离子交换亲和力的不同而得到分离的方法。利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离方法。定溶液中阳离子和阴离子的一种分离方法。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识

37、到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 基本原理基本原理：带电物质因电荷力作用而在固定相和流动相之带电物质因电荷力作用而在固定相和流动相之间分配得以相互分离。间分配得以相互分离。两性电解质（蛋白质、氨基酸）在不同溶液中两性电解质（蛋白质、氨基酸）在不同溶液中所带的净电荷的种类和数量不同：所带的净电荷的种类和数量不同：pH=pI;pH pI?溶液溶液pHpH偏离偏离pI越远，则净电荷量越大。越远，则净电荷量越大。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也

38、许你认为浪费这一点点算不了什么 由于各种蛋白质等生物大分子的等电点不同，由于各种蛋白质等生物大分子的等电点不同，可以通过可以通过改变溶液的改变溶液的pHpH和和离子强度离子强度来影响它们与来影响它们与离子交换树脂的吸附作用，从而将它们分离。离子交换树脂的吸附作用，从而将它们分离。离子交换树脂（固定相）的性质、种类、选择离子交换树脂（固定相）的性质、种类、选择依据、离子交换色谱的操作及应用依据、离子交换色谱的操作及应用在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许

39、你认为浪费这一点点算不了什么 五、凝胶色谱法五、凝胶色谱法 凝胶色谱法凝胶色谱法：以凝胶为固定相、基于以凝胶为固定相、基于分子大分子大小不同小不同而进行分离的一种方法。因其整个过程而进行分离的一种方法。因其整个过程和过滤相似，又称凝胶过滤、分子筛过滤等。和过滤相似，又称凝胶过滤、分子筛过滤等。凝胶凝胶：一种不带电荷的具有三维空间的一种不带电荷的具有三维空间的多孔多孔网网状结构的物质，凝胶的每个颗粒的细微结构就状结构的物质，凝胶的每个颗粒的细微结构就如一个筛子。如一个筛子。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都

40、可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为载体，利用有一定孔径的多孔的亲水性凝胶作为载体，当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，直径当分子大小不同的混合物通过这种凝胶柱时，直径大于凝胶孔径的大分子由于不能进入胶粒内部，便大于凝胶孔径的大分子由于不能进入胶粒内部，便随着溶剂在胶粒间隙向下移动并最先流出柱外；直随着溶剂在胶粒间隙向下移动并最先流出柱外；直径小于凝胶孔径的分子能不同程度的自由出入凝胶径小于凝胶孔径的分子能不同程度的自由出入凝胶珠的内外。这样不同大小的分子由于所经的路径不珠的内外。这样不同大小的分子由于所

41、经的路径不同从而得到分离，大分子物质先被洗脱下来，小分同从而得到分离，大分子物质先被洗脱下来，小分子物质后被洗脱下来。子物质后被洗脱下来。（一）原理（一）原理在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么小分子小分子在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（二）凝胶过滤

42、介质（二）凝胶过滤介质基本要求：基本要求：u 不能与原料组分发生除排阻之外的任何其他相互作用，如电荷作用、化学作用、生物学作用u 高物理强度、高化学稳定性u 耐高温高压、耐强酸强碱u 高化学惰性u 内孔径分布范围窄u 颗粒大小均一度高在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么常用的凝胶过滤介质常用的凝胶过滤介质葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未

43、意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 1.葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 应用最广泛的一类凝胶。应用最广泛的一类凝胶。u 由葡聚糖由葡聚糖Dextran交联而得。交联而得。在制备凝胶时添加不同比例的交联剂可得到交联度在制备凝胶时添加不同比例的交联剂可得到交联度不同的凝胶。交联剂在原料总质量中所占的百分数叫不同的凝胶。交联剂在原料总质量中所占的百分数叫做做交联度交联度。交联度大：网状结构紧密，吸水量小交联度大：网状结构紧密，吸水量小 交联度小：网状结构疏松，吸水量多交联度小：网状结构疏松，

44、吸水量多u 化学性质比较稳定，不溶于水、弱酸、碱和盐溶液化学性质比较稳定，不溶于水、弱酸、碱和盐溶液在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 2.琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶u 来源于一种海藻多糖琼脂，是一种来源于一种海藻多糖琼脂，是一种天然凝胶天然凝胶，不是共价交联，而是以不是共价交联，而是以氢键氢键交联，键能较弱。交联，键能较弱。u 孔隙度孔隙度通过改变琼脂糖浓度而达到（与葡聚糖不同）通过改变琼脂糖浓度而达到（与葡聚糖不同）（联系琼

45、脂糖凝胶电泳）（联系琼脂糖凝胶电泳）u 化学稳定性：琼脂糖凝胶化学稳定性：琼脂糖凝胶 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶u 没有干胶，必须在溶胀状态保存。没有干胶，必须在溶胀状态保存。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么u 能分离几万至几千万能分离几万至几千万高相对分子质量高相对分子质量的物质，的物质，分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随分离范围随着凝胶浓度上升而下降，颗粒强度随浓度上升而提高。浓度上升而提高。适用于核酸、多糖和蛋白

46、质类物质的分离。适用于核酸、多糖和蛋白质类物质的分离。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 3.聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶u 人工合成，在溶剂中能自动吸水溶胀成凝胶。人工合成，在溶剂中能自动吸水溶胀成凝胶。u 对芳香族、杂环化合物有不同程度的吸附作用。对芳香族、杂环化合物有不同程度的吸附作用。在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到

47、浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么（三）操作方法（三）操作方法凝胶的预处理凝胶的预处理层析柱的选择层析柱的选择凝胶柱的装填凝胶柱的装填样品处理和加样样品处理和加样洗脱与收集洗脱与收集凝胶的保存凝胶的保存在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么1 1、凝胶的预处理、凝胶的预处理：充分溶胀：充分溶胀2 2、层析柱的选择、层析柱的选择 体积体积 柱比：层析柱的长度与直径的比柱比：层析柱的长度与

48、直径的比 （样品的数量、性质、分离目的）（样品的数量、性质、分离目的）3 3、凝胶柱的装填、凝胶柱的装填 进胶过程宜连续、均匀、不中断，并不断搅拌。进胶过程宜连续、均匀、不中断，并不断搅拌。4 4、样品处理和加样、样品处理和加样（样品的浓度、黏度）（样品的浓度、黏度）5 5、洗脱与收集、洗脱与收集（洗脱液的成分、流速、目的物）（洗脱液的成分、流速、目的物）6 6、凝胶的保存、凝胶的保存（去除杂质）（去除杂质）在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪

49、费这一点点算不了什么 六、高效液相色谱法六、高效液相色谱法(High performance Liquid chromatography,HPLC)高效液相色谱法：高效液相色谱法：特指一种以液体为流动相的色谱分离分析方法。特指一种以液体为流动相的色谱分离分析方法。它是在经典液相色谱的基础上，引入了气象色谱它是在经典液相色谱的基础上，引入了气象色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点。敏度高、操作自动化的特点。在日常生活中，随处都可以看到浪费

50、粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么 （一）（一）HPLC的分类和基本原理的分类和基本原理 固定相固定相液液-液色谱液色谱液液-固色谱固色谱作用原理作用原理液液-固吸附色谱固吸附色谱液液-液分配色谱液分配色谱凝胶渗透或体积排除色谱凝胶渗透或体积排除色谱离子交换色谱离子交换色谱亲和色谱亲和色谱在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己在浪费，也许你认为浪费这一点点算不了什么在日常生活中，随处都可以看到浪费粮食的现象。也许你并未意识到自己