单克隆抗体技术及其应用.ppt

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1、Fish Disease Research Center单克隆抗体技术及其应用单克隆抗体技术及其应用报告人：报告人：杨金先杨金先Fish Disease Research Centerp1975年年，Kohler和和Milstein建建立立了了淋淋巴巴细细胞胞杂杂交交瘤瘤技技术术，两两人人由由此此杰杰出出贡贡献献而而荣荣获获19841984年年度度诺诺贝贝尔尔生理学和医学奖。生理学和医学奖。pp单单单单克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体（monoclonal monoclonal monoclonal monoclonal antibodyantibodyantibodyantibody）：针针

2、对对预预定定抗抗原原的的同同一一抗抗原原决决定定簇簇的的，高高度度同同质质的的，且且能能保保证证无限量供应的抗体。无限量供应的抗体。pp单单单单克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体技技技技术术术术的的的的理理理理论论论论依依依依据据据据：抗抗体体的的多多样样性性、克克隆隆选选择择学学说说、抗抗体体基基因因的的重重排排理理论论、抗抗体体结结构构与与生生物物合成合成机制。机制。单克隆抗体技术简介单克隆抗体技术简介Fish Disease Research CenterFish Disease Research Center骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞（SP2/O-Ag14）：）：单克隆技术的原理单克隆技术的原

3、理丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthine guanosine phosphoribosyl transferase，HGPRT）无法在无法在HAT选择培养剂中生长选择培养剂中生长能无限地快速增殖 既不合成轻链又不合成重链小鼠脾细胞小鼠脾细胞（B-Cell）：）：合成和分泌特异性抗体无法进行体外长期培养脾细胞脾细胞SP2/O融合细胞融合细胞：HGPRT，能在能在HAT选择培养剂中生长选择培养剂中生长能无限地快速增殖 合成和分泌特异性抗体合成和分泌特异性抗体HATFish Disease Research Center单克隆抗体制备过程（示意图）单克隆抗体制备过程（示意图

4、）克隆形成克隆形成单克隆细胞单克隆细胞扩大培养，制备抗体、液氮冻存扩大培养，制备抗体、液氮冻存SP2/OB细胞细胞融合细胞融合有限稀释法进行单克隆有限稀释法进行单克隆细胞融合的方法：细胞融合的方法：1、仙台病毒、仙台病毒2、PEG/DMSO3、电融合电融合Fish Disease Research Center严严格格进进行行无无菌菌操操作作，防防止止污污染染（细菌、霉菌、支原体、细胞）根根据据实实验验的的目目标标及及时时进进行行细细胞胞的的检检测测与与筛筛选选，（ELISA、IFA、凝集、中和，）对对筛筛选选得得到到的的阳阳性性细细胞胞克克隆隆进进行行早早期期单单克克隆隆（有限稀释法）在单克

5、隆细胞建株过程中不定期在单克隆细胞建株过程中不定期验证验证检测检测防止单克隆细胞过度生长防止单克隆细胞过度生长 老化老化 死亡死亡 单克隆抗体制备过程的注意事项单克隆抗体制备过程的注意事项Fish Disease Research Center单抗单抗Monoclonal antibody由杂交瘤细胞系产生的，针对同一抗原决定簇的抗体高度均质高度均质。由同一个B细胞克隆产生的同异质同异质的抗体组成，是针对针对抗原的单一决定簇抗体抗原的单一决定簇抗体。单抗纯度高纯度高，专一性强专一性强、重重复性好复性好。无披次差异。易于标准化易于标准化。能保证无限量供应。单克隆抗体与免疫血清的比较单克隆抗体与免

6、疫血清的比较免疫血清免疫血清又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由不同B细胞克隆产生的异质异质的抗体组成，是针对多个不同抗针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物原决定簇抗体的混合物。通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分特异性差。不同批次的抗体制剂质量差异很大。难以工业化批量制备。Fish Disease Research Center单克隆抗体技术的应用单克隆抗体技术的应用2 2、治疗试剂、治疗试剂、治疗试剂、治疗试剂n病毒等微生物的中和抗体中和抗体n抗毒素蛇毒、破伤风毒素，等n被动免疫治疗制剂n“生物导弹”3 3、分子生物学研究工具、分子生物学研究

7、工具、分子生物学研究工具、分子生物学研究工具n n蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；蛋白质等生物活性分子的纯化；n n细胞生物学细胞生物学细胞生物学细胞生物学组织定位；组织定位；组织定位；组织定位；n n分子病毒学分子病毒学分子病毒学分子病毒学结构分析；结构分析；结构分析；结构分析；n n特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；特定生物分子的功能研究；1 1、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）、免疫学快速诊断试剂（抗体）n n细菌细菌n n病毒病毒n n肿瘤因子肿瘤

8、因子n n特定蛋白特定蛋白n n农残检测农残检测 诊断技术方法：诊断技术方法：ELISA（间接法、夹心法、竞争法）免疫荧光法胶体金放射免疫法 Fish Disease Research CenterFish Disease Research Center我们实验室已经制备的单克隆抗体v鱼类Ig单抗欧洲鳗血清IgM欧洲鳗粘膜Ig石斑鱼IgM大黄鱼IgM鳜鱼IgM鮰鱼IgMv病原微生物嗜水气单胞菌杀鲑气单胞菌鸡IBDV中和单抗猪PRRSV猪旋毛虫囊蚴小瓜虫v其他单抗人神经胶质瘤信号肽GBM1和GBM2正在制备的单抗正在制备的单抗q鱼类虹彩病毒q鲤鱼SVCq刺激隐核虫单抗Fish Disease Research Center