动物细胞融合与单克隆抗体(1).ppt

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1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体温故而知新温故而知新植物细胞杂交植物细胞杂交（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物组织培养植物组织培养原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B一、动物细胞融合一、动物细胞融合1.1.概念：概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或两个或多个多个动物细胞结合形成动物细胞结合形成一个一个

2、细胞的过程。细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的息的单核细胞单核细胞，称为杂交细胞。，称为杂交细胞。2 2、动物细胞融合基本原理、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同与植物原生质体融合的基本原理相同，即细即细胞膜的流动性胞膜的流动性3、诱导方式、诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心电激、振动、离心聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇聚乙二醇（PEGPEG）例如：仙台病毒例如：仙台病毒4、过程、过程不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细

3、胞融合灭活病毒诱导细胞融合（先质后核）（先质后核）融合后的杂交细胞融合后的杂交细胞进行有丝分裂进行有丝分裂灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）（丧失感染性、保留抗原结构）、植物、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方

4、法诱导方法诱导方法用途用途获得获得杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱导使细胞分散后诱导细胞融合细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒、动物、动物细胞融合技术细胞融合技术的发展简史告诉我的发展简史告诉我们：们：科学技术是不断发展的科学技术是不断发展的。那么，实现。那么，实现动物细胞融合有什么动物细胞融合有什么意义意义呢？呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成

5、为可能；打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用广泛应用多个学科领域多个学科领域；重要用途：重要用途：制备单克隆抗体制备单克隆抗体。2 2、什么是抗体？、什么是抗体？二、单克隆抗体二、单克隆抗体回顾回顾3 3、抗体的分布？、抗体的分布？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。能的球蛋白。主要分布在血清中。主要分布在血清中。1 1、什么是克隆？、什么是克隆？“克隆克隆”从英文从英文“clone”clone”音译而来，是指从一音译而来，是指从一个共同祖先，通过个共同祖先，通过无性繁殖无性繁

6、殖的方法产生出来的一的方法产生出来的一群群遗传特性相同遗传特性相同的的DNADNA分子，细胞或个体。在细分子，细胞或个体。在细胞水平指胞水平指动物细胞培养动物细胞培养.抗体是怎样产生的？抗体是怎样产生的？抗体是怎样产生的？抗体是怎样产生的？问题问题l 每一个每一个B B淋巴细胞只合成和分泌一种特异性抗体。淋巴细胞只合成和分泌一种特异性抗体。单克隆抗体单克隆抗体自主阅读自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生特异性抗体产生特异性抗体。动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种动物在免疫反应过

7、程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。免疫作用。但但每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。、在体外，、在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。产量低、纯度低；产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。而且制备抗体特异性差。分析：分析：B B淋巴细胞与抗体的关系淋巴细胞与抗体的关系、单克隆抗体单克隆抗体McAb（概念）（概念）由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆），形（克隆），形成基因型相同的细胞群，成基因型相同的细

8、胞群，这一细胞群所产生的这一细胞群所产生的化学化学性质单一、特异性强的抗体性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。称为单克隆抗体。那么，如何那么，如何大量获得化学性质单一、特异大量获得化学性质单一、特异性强的抗体性强的抗体？（即？（即单克隆抗体单克隆抗体）大量生产大量生产单克隆抗体思路单克隆抗体思路B淋巴细胞具产生抗体的功能淋巴细胞具产生抗体的功能骨髓瘤细胞具无限增殖的特性骨髓瘤细胞具无限增殖的特性利用利用细胞融合的技术细胞融合的技术将两种细胞融将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的特性的杂交瘤细胞杂交瘤细胞利用利用动物细胞培养技术动物细胞培养技术大量培

9、养杂大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞杂种细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术、设计方案：、设计方案：动物细胞融合动物细胞融合创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗既能产生特异性抗体，又能大量繁殖体，又能大量繁殖动物细胞动物细胞融合技术融合技术B、BB、B瘤瘤、瘤瘤、瘤瘤、瘤、瘤只有杂种细只有杂种细胞才能活胞才能活动物细胞培养动物细胞培养3.3.单克隆抗体制单克隆抗体制备过程备过程获得产生相应抗获得产生相

10、应抗体的体的B淋巴细胞淋巴细胞2 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（B-B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体课堂课堂小结小结4 4、单克隆抗体的单克隆抗体的特点和应用特点和应用与常规抗体相比，与常规抗体相比，单克隆抗体单克隆抗体特异性强，特异性强，灵敏度高，产量灵敏度高，产量高高，优越性优越性十分明显。十分明显。应用：应用：特点：特点：可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点可用于疾病治疗可用于疾病治疗可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物生物导弹导弹“。）。）“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物