免疫组化5-结果的分析和判断.ppt
( 4.5 )《免疫组化5-结果的分析和判断.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫组化5-结果的分析和判断.ppt（36页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、免疫组化结果的分析和判断免疫组化结果的分析和判断一、一、免疫组化结果的判断原则免疫组化结果的判断原则 必必须须同同时时设设对对照照染染色色。没没有有对对照照染染色的免疫组化染色结果是不可信的。色的免疫组化染色结果是不可信的。抗抗原原表表达达必必须须在在特特定定部部位位。如如LCALCA应应定位在细胞膜上；定位在细胞膜上；CKCK应定位在细胞浆内；应定位在细胞浆内；PCNAPCNA及及p53p53蛋蛋白白应应定定位位在在细细胞胞核核内内；EMAEMA应应定定位位在在细细胞胞膜膜上上，等等等等。不不在在抗抗原原所所在在部部位的阳性着色，一概不能视为阳性。位的阳性着色，一概不能视为阳性。阴阴性性结结
2、果果不不能能视视为为抗抗原原不不表表达达。由由于于检检测测方方法法灵灵敏敏度度有有高高低低之之分分，有有时时可可因因染染色色方方法法灵灵敏敏度度不不够够，而而导导致致阴阴性性反反应应，判断时应注意。判断时应注意。尽尽量量避避开开出出血血、坏坏死死及及切切片片刀刀痕痕和和界界面面边边缘缘细细胞胞的的阳阳性性表表达达，特特别别是是酶酶免免疫疫标标记记。因因为为这这类类阳阳性性着着色色多多系系内内源源干扰，或系人为因素所致。干扰，或系人为因素所致。对对免免疫疫组组化化标标记记结结果果的的意意义义不不能能绝绝对对化化，应应结结合合临临床床资资料料、X X线线等等影影像像学学及实验结果综合分析。及实验结
3、果综合分析。二、对照染色设计二、对照染色设计 (一）对照染色的目的一）对照染色的目的-排除假阴性和假阳性。排除假阴性和假阳性。假阴性的原因主要有三：假阴性的原因主要有三：组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽组织处理不当，抗原丢失过多或被遮蔽抗抗抗抗体体体体失失失失活活活活、效效效效价价价价过过过过低低低低或或或或稀稀稀稀释释释释度度度度不不不不合合合合适适适适（主主主主要要要要指指指指一抗，即特异性抗体）一抗，即特异性抗体）一抗，即特异性抗体）一抗，即特异性抗体）染染染染色色色色步步步步骤骤骤骤遗遗遗遗漏漏漏漏及及及及差差差差错
4、错错错，或或或或显显显显色色色色剂剂剂剂的的的的选选选选择择择择、缓缓缓缓冲冲冲冲液的液的液的液的pHpHpHpH和离子强度不当等。和离子强度不当等。和离子强度不当等。和离子强度不当等。假阳性系由多种因素造成的假阳性系由多种因素造成的非特异着色非特异着色所致，原因主要有：所致，原因主要有：自发荧光或内源酶等干扰自发荧光或内源酶等干扰自发荧光或内源酶等干扰自发荧光或内源酶等干扰抗体试剂不纯抗体试剂不纯抗体试剂不纯抗体试剂不纯(特别是一抗）特别是一抗）特别是一抗）特别是一抗）操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不
5、当操作失误，如污染、切片干枯或显色剂操作不当等等等等FcFc受体的干扰，等等受体的干扰，等等受体的干扰，等等受体的干扰，等等（二）对照的种类及其选用目的（二）对照的种类及其选用目的 对对照照染染色色大大致致可可分分为为：阳阳性性组组织织对对照照、阴阴性性组组织织对对照照及及阴阴性性试试剂剂对对照照和和自身对照自身对照四大类四大类：阳性组织对照阳性组织对照 用用已已证证实实含含有有靶靶抗抗原原的的同同源源及及不不同同源源组组织织切切片片或或细细胞胞涂涂片片与与待待检检实实验验切切片片同同时时作作同同样样处处理理和和免免疫疫染染色色的的组组织织对对照照。正正确确的的结结果应呈现阳性果应呈现阳性目目
6、的的：证证实实所所用用免免疫疫组组化化染染色色流流程程的的有有效效性，排除性，排除假阴性假阴性的可能。的可能。阴性组织对照阴性组织对照 用用已已证证实实不不含含靶靶抗抗原原的的同同步步处处理理和和免免疫疫标标记记染染色色的的组组织织对对照照。正正确确的的结果应为阴性结果应为阴性目的：目的：排除排除假阳性假阳性的可能。的可能。3、阴性试剂对照、阴性试剂对照 用用于于证证实实在在免免疫疫组组化化染染色色中中所所用用试试剂剂，尤尤其其是是特特异异性性抗抗体体试试剂剂的的有有效效性性和和可可靠靠性性而而所所设设立立的的同同步步免免疫疫染染色色对对照照，包包括括有有：空空白白对对照照；替代对照；吸收试验
7、和抑制试验替代对照；吸收试验和抑制试验等。等。目目的的：排排除除假假阳阳性性和和证证实实所所用用免免疫疫组组化化试试剂剂及及其其技技术术方方法法的的有有效效性性和和待待检检实实验验切切片片免免疫疫标记阳性结果的可靠性。标记阳性结果的可靠性。空白对照空白对照 以以缓缓冲冲液液（PBS、TBS等等）取取代代第第一一抗抗体体（主主要要的的，必必要要时时还还可可做做第第二二抗抗体体及及桥桥联联抗抗体体的的空空白白取取代代），其其他他各各步步不不变变的试剂对照染色，结果应为阴性。的试剂对照染色，结果应为阴性。取取代代对对照照 指指以以所所用用方方法法第第一一抗抗体体同同源源动动物物的的正正常常血血清清，
8、或或与与本本实实验验无无关关的的抗抗体体(靶靶生生物物缺缺如如的的)取取代代第第一一抗抗体体，其其他他步步骤骤不不变变的试剂对照染色，结果应为阴性。的试剂对照染色，结果应为阴性。吸吸收收试试验验 是是指指用用事事先先经经过过量量抗抗原原吸吸收收的的第第一一抗抗体体上上清清液液取取代代第第一一抗抗体体，其其他他步步骤骤不不变变的的免免疫疫染染色色试试剂剂对对照照。结结果果应应是是阴阴性性或或阳阳性着色明显减弱（吸收不全时）。性着色明显减弱（吸收不全时）。抑抑制制试试验验 是是指指用用标标记记抗抗体体和和未未标标记记抗抗体体（可可以以是是一一抗抗，也也可可以以是是二二抗抗或或桥桥抗抗体体）两两者者
9、的的混混合合物物作作试试剂剂，其其他他步步骤骤不不变变的的免免疫疫组组化化染染色色试试剂剂对对照照，结结果果其其阳阳性性着着色色应应成成比比例例的的减减弱弱（等等量量或或1：9）。此试剂对照多用于直接法。此试剂对照多用于直接法。这这类类阴阴性性试试剂剂对对照照的的选选用用原原则则是是：空空白白对对照照不不能能省省，其其他他对对照照在在预预实实验验中中应应尽尽量量多多做做，尤尤其其是是应应用用新新抗抗体体试试剂剂对照必需与实验片同步进行染色对照必需与实验片同步进行染色对照的结果应附合要求。对照的结果应附合要求。自自身身对对照照 是是指指在在同同一一标标记记切切片片上上的的自自身身组组织织成成分分
10、的的阴阴性性背背景景对对照照。即即与与靶靶抗抗原原阳阳性性反反应应细细胞胞或或成成分分相相邻邻的的阴阴性性背背景景结结构构的的显显色色，结结果果应应为为阴阴性性或或着着色色较较浅浅，需需与与阳性着色成分呈鲜明对比阳性着色成分呈鲜明对比目目的的：排排除除内内源源性性干干扰扰产产生生的的假假阳阳性性和和因抗原弥散移位造成的错误结果。因抗原弥散移位造成的错误结果。三、非特异染色三、非特异染色 非特异染色非特异染色是指免疫组化染色过程是指免疫组化染色过程中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳中产生的非靶抗原的呈色结果，属假阳性，又称背景着色，能严重干扰免疫组性，又称背景着色，能严重干扰免疫组化染色结果的正
- 配套讲稿：
如PPT文件的首页显示word图标，表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制：
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片，仅作为作品整体效果示例展示，禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词：
- 免疫 结果 分析 判断
淘文阁 - 分享文档赚钱的网站所有资源均是用户自行上传分享，仅供网友学习交流，未经上传用户书面授权，请勿作他用。
限制150内