微生物实验设计.ppt

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1、08级微生物学实验考试试题解答级微生物学实验考试试题解答PPTlPPT制作人：36号 龚鹏l解说人 ：35号 张青 36号 龚鹏 37号 曾泽文问题：问题：l某细菌肥料是由相关的不同 组成的一个菌群并通过混合培养得到的一种产品。的多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计一个实验方案来检测该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？微生物微生物活菌数活菌数我们的思路我们的思路l一、题目分析l二、实验设计l三、解题总结一、题目分析一、题目分析l 某细菌肥料是由相关的 组成的一个菌群并通过混合培养得到的一种产品。的多少是质量好坏的一个重要标志之一，请设计一个实

2、验方案来检测该细菌肥料的质量？在实验过程中为减少实验误差提高数据的可靠性，应该注意那些操作步骤？l 从题目我们可以看出该题目的要求是 ；因此，必须考虑以下几个问题：不同微生物不同微生物活菌数活菌数检测单位质量细菌肥料中的活菌数检测单位质量细菌肥料中的活菌数减少实验误差减少实验误差 1、该细菌肥料中的不同微生物该细菌肥料中的不同微生物l通过查找资料我们了解到细菌肥料，一般有 、和 等分成。由此，我们推断该细菌肥料中大概有 、和 。瘤菌剂瘤菌剂固氮菌剂固氮菌剂磷细菌剂磷细菌剂抗生菌剂抗生菌剂复合菌剂复合菌剂细菌细菌真菌真菌放线菌放线菌有哪几种？有哪几种？2、如何如何 这些微生物？这些微生物？l选择

3、性培养基培养；l用平板分离法分离。分离纯培养分离纯培养3、怎样怎样 l采用平板培养计数法要求操作熟练、准确，否则难以得到正确结果。l要求样品成分混匀，保证每个活细胞都能分别形成菌落；尽可能选用选择性培养基，保证计数菌落围有效菌落。减少实验误差减少实验误差？解决方法：解决方法：思考之后思考之后l鉴于，以上几点我们综合考虑，最终决定采 用 分离纯化微生物并测定样品中活菌数。稀释涂布平板法稀释涂布平板法二、实验设计二、实验设计l1、实验目的、实验目的l2、实验原理、实验原理l3、实验过程、实验过程1、实验目的、实验目的l检测单位质量样品细菌肥料中的 。活菌数2、实验原理、实验原理l ，分离培养样品中

4、的不同微生物。不同的培养基，由于营养成分不同，因此具有选择性，适合改培养基的微生物就可以生长；反之，则不能生长，根据不同的选择培养基，我们可以分离出样品中的不同微生物。l ，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。利用选择培养基利用选择培养基平板菌落计数法平板菌落计数法3、实验过程、实验过程（一）样品的处理和稀释（一）样品的处理和稀释（二）培养基的配置

5、及倒平板（二）培养基的配置及倒平板（三）涂布（三）涂布（四）培养（四）培养（五）计数和报告（五）计数和报告（一）样品的处理和稀释（一）样品的处理和稀释 1.以无菌操作取检样10g，放于盛有90ml灭菌蒸馏水的灭菌三角瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分研磨、摇床震荡制成1：10的均匀稀释液。2.用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌蒸馏水稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。3.另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。操作示意图：操作示意图：【注意【注意1：样品稀释误差】：样品稀释误差】1

6、、为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。2、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。3、为减少稀释误差，最好采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。（二）培养基的配置及倒平板（二）培养基的配置及倒平板 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用)2、高氏I号培养基（培养放线菌用）3、马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）倒倒36个培养皿个培养皿操作图【注意【注意2：倒平板误差】：倒平板误差】l1.倒平板时倾注培养基的量规定不一，从1220ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影

7、响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。l2.为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。（三）涂布（三）涂布l操作方法：选择个 4个稀释度，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液放在无菌的已经凝固的培养基平板上，然后用无菌的玻璃涂棒把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，每个稀释度做3个平皿。（四）培养（四）培养 l待琼脂凝固后，将含高氏I号培养基和马丁氏琼脂培养基的平板倒置与28温室中培养3-5d，牛肉膏蛋白胨

8、平板倒置与37温室中培养1-2d。【注意【注意3】l1、无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。l 2、操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。（五）计数和报告（五）计数和报告l操作方法：培养到时间后，取出培养皿，计算平板内菌落数目。计数时可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算出每克样品中的菌落数。l计算方法：每克样品中的菌落数（个）=同稀释度的各平板平均菌落数（个）稀释倍数结果统计结果统计l将计数结果填入下表【注意【注意4：计数误差】：计数误差】l1.到达规定培养时间，应立即计数。l2计数时应选取菌落数在30300之间的平板l3不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。l4当平板上有链状菌落生长时，要仔细观察 清楚再计数。三、解题总结三、解题总结l首先，看到这个题目时，我们觉得最难的就是，不知道该细菌肥料中有些什么微生物。因此，弄清楚样品肥料中微生物的种类成为了解题的关键。l其次，弄清楚了微生物的种类，接下来就是要如何分离纯培养这些微生物近而达到计数的目的。l最后，实验的成功还要求熟练的操作，一定要做好“无菌操作”。