植物组织培养脱毒快繁技术的综述75769.docx

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1、 广西职业技术学院毕业论文（设计） 第- - 14 - -页植物组织培养脱毒快繁技术的综述李西雁（广西职业技术学院农业技术工程系2002级应用生物技术专业）摘要：脱除除病毒是是植物组组织培养养深入探探讨研究究中的一一个技术术难题。本本文结合合在桂林林莱茵生生物科技技股份有有限公司司的实践情情况，简简要介绍绍植物组组织培养养的基本本原理和和方法，综综述植物物脱除病病毒的热热处理、茎茎尖培养养和抗病病毒药剂剂三种方方法的原原理、发发展史和和技术方方法，并并介绍了了几种常常用的病病毒检测测方法。本本文以马马铃薯为为例，重重点介绍绍了利用用热处理理加茎尖尖组织培培养法获获得马铃铃薯脱毒毒苗的具具体技术

2、术方法，脱脱毒率可可达1000%。同同时还对对植物组组织培养养脱毒快快繁技术术的应用用前景作作了分析析。关键词：茎茎尖培养养，组织织培养，快快繁脱毒毒技术，病病毒检测测，应用用前景1植物组织织培养研研究概况况1.1研究究简史自从19443年怀怀特（WWhitte）提提出植物物细胞“全能性性”（Tottipootenncy）学学说及诸诸多后学学者（SStewwardd，19558，Guhha和Marrtesshwaari，19664）相相继证实实后，引引发植物物组织和和细胞培培养快繁繁技术的的勃然兴兴起。我我国的专专家学者者在200世纪700年代后后也在此此领域做做了大量量的研究究和开发发工作，

3、创创造了很很多新方方法、新新技术，提提出不少少新成果果，开拓拓了植物物组织培培养快繁繁技术的的新局面面1。目前采采用组织织培养脱脱病毒快繁繁及离体体快繁生生产株苗苗的技术术已发展展相当成成熟22。脱毒株株苗具有有无杂菌菌、适应应能力较较强、繁繁育较快快、质量优、抗性性好、分分蘖性强强、繁殖殖系数高、大批量生生产、周周年供应应、便于于运输等等优点，已得得到有关关专家的的鉴定及及高度评评价和种种植试验验区、种种植产区区果农的的认可。例例如脱毒毒马铃薯薯、脱毒毒红薯、脱脱毒生姜姜、脱毒毒大蒜、脱脱毒草莓莓、脱毒毒苗木、脱脱毒花卉卉等等，已已成为现现代农民民致富的的新宠2。1.2植物物组织培培养和脱脱

4、毒快繁繁的定义义植物组织培培养（PPlannt ttisssue cullturre）是是指在无无菌的条条件下，将将离体的的植物（根根、茎、叶叶、花、果果实、种种子等）、组组织（形形成层、花花药组织织、胚乳乳、皮层层等）、细细胞（体体细胞和和生殖细细胞）以以及原生生质体，培培养在人人工配制制的培养养基上，给给予适当当的培养养条件，使使其长成成完整的的植株。由由于培养养物是脱脱离植物物母体，在在玻璃瓶瓶中进行行培养，所所以也叫叫做离体体培养。其其完整过过程是： 脱分化化 再再分化 生长长 根茎叶叶外植体愈伤伤组织 生生长点 或 完整整植株发生 胚胚状体在有些情况况下，再再分化也也可不经经愈伤组组

5、织阶段段，而直直接发生生于脱分分化的细细胞11。植物组织培培养脱毒快快繁是人工在在无菌条条件下利利用植物物体的一一部分，在在人工控控制的营营养和环环境条件件下繁殖殖植物，脱脱除病毒毒得到无无毒苗株株，继而而在大田田快速繁繁殖的技技术。脱脱毒及离离体快繁繁，这是是目前植植物组织织培养应应用最多多、最广广泛和是是有效的的一个方方面。主主要是进进行茎尖尖培养脱脱除病毒毒。对于于脱毒苗苗、新育育成、新新引进、稀稀缺良种种、优良良单株、濒濒危植物物和基因因工程植植株等可可通过离离体快速速繁殖，同同时可不不受地区区和气候候的影响响，比传传统的繁繁殖方法法快数万万倍。植植物组织织培养已已发展成成为一门门富有

6、生生命力的的学科。追究植物组组织培养养脱毒快快繁技术术的发展展简史，在在11世纪纪就出现现的热处处理脱毒毒法，最最早解决决一些作作物的病病毒病害害问题1。本本世纪550年代代发展的的植物组组织培养养技术为为脱毒提提供了一一条有效效途径。现现在植物物的脱毒毒技术有有多种，其其中应用用最广泛泛的有三三种：热热处理法法、茎尖尖培养脱脱毒法、抗抗病毒药药剂法，将将不同的的方法相相结合起起来应用用效果更更好。它它们的脱脱毒原理理各不相相同。2 脱毒技技术及其其原理2.1 热热处理法法2.1.11 概述述热处理法是是利用病病毒和寄寄主植物物对高温温的忍耐耐性的差差异，使使植物的的生长速速度超过过病毒的的扩

7、散速速度，得得到一小小部分不不含病毒毒的植物物分生组组织，然然后进行行无毒个个体培育育。热处理法中中，最主主要的影影响因素素是温度度和时间间。热处处理可通通过热水水浸泡或或湿热空空气进行行。热水水浸泡对对休眠芽芽效果较较好，湿湿热空气气对活跃跃生长的的茎尖效效果较好好，既能能消除病病毒又能能使寄主主植物有有较高的的存活机机会。热热空气处处理比较较容易进进行，把把旺盛生生长的植植物移入入到1个热疗疗室中，在在3540下处理理一段时时间即可可，处理理时间的的长短，可可由几分分钟到数数月不等等4。热处处理的方方法有恒恒温处理理和变温温处理，处处理的材材料可以以是植株株，也可可以是接接穗。2.1.22

8、原理热处理脱毒毒是根据据病毒与与寄生细细胞对高高温的忍忍耐程度度不同，选选择适当当的温度度和处理理时间，植植物组织织中的很很多病毒毒被部分分地或完完全地钝钝化而可可控制其其的活动动，但很很少伤害害甚至不不伤害寄寄主组织织，从而而让植物物细胞加加快生长长，使生生长点附附近不带带病毒，从从而达到到脱毒的的目的。2.1.33简史用热处理脱脱除马铃铃薯卷叶叶病毒（PLRV）是世界上脱除已知病毒最早的例子。早在1889年，印度尼西亚爪哇人就把繁殖用的甘蔗切断放在50左右的热水中浸泡30min来防止枯萎病（现已知是病毒病）的发生。现在世界许多国家在种植前仍使用这种方法处理甘蔗。但是后来人们发现热水对植物的

9、伤害大，Bake (1972)研究表明在热水处理中，由于植物组织经过淋洗，在水中长期浸泡常常会窒息死亡，并且这种处理也会打破或延长植物的休眠期。所以现在更常用的方法是将病毒感染的植物用3538热空气处理24周或者更长时间进行脱毒4。此法尤其适合处理生理干旱的材料和处于休眠状态的果树。热处理脱毒毒法已应应用多年年，被世世界多个个国家利利用。该该项技术术要求的的设备条条件比较较简单，脱脱毒操作作也比较较容易。主主要缺点点是脱毒毒时间长长，脱毒毒不完全全，例如如TMVV这类杆杆状病毒毒就不能能用这种种方法脱脱除，因因而该方方法有一一定的局局限性。2.2 茎茎尖培养养脱毒法法2.2.11概述茎尖培养脱

10、脱毒就是是采取茎茎尖分生生组织离离体培养养的方法法获取无无病毒试试管苗，其其方法是是在解剖剖镜下，用用锋利的的解剖刀刀进行迅迅速准确确地茎尖尖剥离，因因为茎尖尖分生组组织基本本不带病病毒，利利用植物物茎尖分分生组织织进行离离体培养养，再结结合病毒毒检测，就就可以获获得无病病毒的植植株。茎尖培养中中最主要要的影响响因素就就是切取取茎尖的的大小，一一般要求求茎尖长长度小于于1mmm。技术术上通常常切取茎茎尖越小小，脱毒毒效果越越好，但但是茎尖尖培养成成活率变变低。曹曹为玉等等研究发发现葡萄萄茎尖长长度与存存活率成成正相关关，与脱脱毒率成成反相关关。当切切取茎尖尖长度为为0.220.3mmm时，存存

11、活率为为21%388%，脱脱毒率为为91.4%977%；当当切取00.5mmm以上上时，存存活率为为75%833%，脱脱毒率仅仅为700.6%766.5%8。茎尖培养脱脱毒法脱脱毒率高高，脱毒毒速度快快，能在在较短的的时间内内得到较较多的原原种繁殖殖材料，但但这种方方法存在在的缺点点是植物物的存活活率低。为为了克服服这一缺缺点，现现在经常常是将茎茎尖培养养与热处处理相结结合来使使用。茎茎尖培养养与热处处理相结结合之所所以能够够提高脱脱毒效果果，是由由于热处处理可使使植物生生长本身身所具有有的顶端端免疫区区得以扩扩大，有有利于切切取较大大的茎尖尖（在11mm左左右），从从而能够够提高培培养或嫁嫁

12、接的成成活率。如如大樱桃桃置于445的恒温温培养室室内，培培养355天，再再切取00.20.44mm的的茎尖培培养，平平均脱毒毒率为998%。2.2.22原理 茎尖培养养脱毒的的原理是是植物体体内病毒毒靠维管管束系统统移动，分分生组织织中没有有维管束束存在，病病毒只靠靠胞间连连丝移动动，速度度很慢，难难以追上上生长活活跃的分分生组织织，所以以旺盛生生长的根根尖、茎茎尖一般般都无病病毒或很很少有病病毒分布布。2.2.33简史Whitee于19443年首首先发现现在感染染烟草花花叶病毒毒的烟草草生长点点附近病病毒的浓浓度很低低，甚至至没有病病毒。这这一发现现为茎尖尖培养脱脱除病毒毒提供了了理论依依

13、据。怀怀特（WWhitte ,19334）在在体外培培养感染染了TMMV病毒毒的马铃铃薯根，并并用枯斑斑寄主法法测定了了根不同同部位的的病毒含含量，发发现根尖尖部位的的病毒含含量比其其他部位位少，甚甚至不存存在病毒毒。Moorell等19552年首首先从感感染了花花叶病毒毒和斑萎萎病毒的的大丽花花植株上上切取茎茎尖，通通过组织织培养获获得了无无病毒的的大丽花花，证明明了前人人假设的的正确性性1。此后后，人们们采用茎茎尖培养养技术相相继获得得了多种种植物的的无病毒毒植株。现现在茎尖尖培养脱脱毒法已已经成为为植物无无毒苗生生产中应应用最广广泛的一一种方法法。1998年年，桂林林市大地地生物技技术研

14、究究所与广广西山河河经济发发展公司司联合开开展罗汉汉果脱毒毒苗的培培育生产产技术科科技攻关关，在选选出的健健康植株株中选取取营养体体,经过过茎尖培培养与其其它脱毒毒方法相相结合脱脱毒后进进行组织织培养，从从而获得得不带病病的健康康苗。经经农业种种植区试试点种植植表明，这这些经茎茎尖培养养脱毒快快繁得到到的罗汉汉果脱毒毒苗植株株健壮无无病，长长势旺，结结果早，数数量多，品品质高，与与传统压压蔓技术术种植的的普通苗苗相比，种种后第一一年结果果的植株株达500%70%，增增加近一一倍；平平均每株株挂果约约30个，增增加了两两倍，一一级果增增加了115%，有有效成分分罗汉果果甜甙的的收取率率则提高高了

15、5%。广西农科院院生物所所杭玲等等在罗汉果果茎尖脱脱毒快繁繁技术一一文中试试验，选选择罗汉汉果青皮皮果品种种，采用种种子播种种的实生生苗,经经接花叶叶病毒而而致病的的植株，运运用茎尖尖培养与与热处理理相结合合的方法法对供试试材料进进行除病病毒，经经用生物物学指示示植物鉴鉴定,脱脱毒率达达1000%。据研究，植植物体内内某一部部分组织织器官不不带病毒毒的原因因是：分分生组织织的细胞胞生长速速度快，病病毒在植植物体内内繁殖的的速度相相对较慢慢，而且且病毒的的传播是是靠筛管管组织进进行转移移或通过过细胞间间连丝传传递给其其他细胞胞，因此此病毒的的传递扩扩散也受受到一定定限制，这这样便造造成植物物体的

16、部部分组织织细胞没没有病毒毒。根据据这个原原理，可可以利用用茎尖培培养来培培育无病病毒苗木木。2.3 抗抗病毒药药剂法2.3.11概述抗病毒药剂剂法，这这是一种种新的脱脱毒方法法，运用用一些抗抗病药剂剂的作用用影响病病毒RNNA的复复制形成成，干扰扰病毒的的正常生生长，从从而达到到除去病病毒的目目的。常常用的抗抗病毒化化学药物物有三氮氮唑核苷苷（病毒毒唑），5-二氢尿嘧啶（DHT）和双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶（DA-DHT）。这些药物常常通过直接注射到带病毒的植株上，或者加到植株生长的培养基上。这种方法一般要与茎尖培养相结合应用。经过抗病毒药剂处理的嫩茎，切取茎尖，再进行组织培养，就会提高脱毒

17、率和成活率。采用病毒抑抑制剂与与茎尖培培养相结结合的脱脱毒方法法，可以以较容易易的脱除除多种病病毒，而而且这种种方法对对取材要要求不严严，接种种茎尖可可大于11mm，易易于分化化出苗，提提高存活活率。2.3.22原理抗病毒药剂剂法的作作用原理理是抗病病毒药剂剂在三磷磷酸状态态下会阻阻止病毒毒RNAA帽子结结构形成成而达到到除去病病毒的效效果。3.3.33简史罗晓芳等于于19996年曾曾在培养养基中加加入病毒毒唑，脱脱除了两两种苹果果潜隐病病毒11。除了以上三三种脱毒毒方法以以外，花花药培养养法、茎茎尖嫁接接脱毒、愈愈伤组织织培养法法、胚珠珠培养法法也可用用于植物物组织培培养快繁繁脱毒。3 脱毒

18、效效果的检检测方法法经过脱毒处处理的植植株是否否还存在在病毒，必必须经过过病毒学学检测才才能确定定。可靠靠的病毒毒检测方方法与建建立有效效的脱毒毒方法同同等重要要。传统统上一直直沿用的的检测方方法是目目测法，但但是这种种方法无无法剔除除潜隐性性病毒。后后来出现现的指示示植物法法，扩大大了检测测范围。近近年来随随着生物物科学的的迅猛发发展，免免疫学方方法，分分子生物物学方法法等许多多先进的的理化技技术的应应用，促促进了病病毒检测测技术的的改进与与发展。下下面简要要介绍几几种检测测脱毒苗苗的方法法。3.1植株株直接测测定法直接观察植植株茎叶叶有无某某种病毒毒引起的的可见症症状，是是最简单单的测定定

19、方法。不不过，由由于某些些寄主植植物感染染病毒后后需要较较长的时时间才出出现症状状，有的的并不能能使寄主主植物出出现可见见的症状状，因而而无法快快速检验验。3.2指示示植物法法此法最早是是美国的的病毒学学家Hoolmees ll9299年发现现的11。利利用病毒毒在其他他植物上上出现症症状的特特征，作作为鉴别别种类的的标准。当原始寄主的症状不明显时，就可用指示植物法，这是因为指示植物比原始寄主更容易表现症状。具体做法是将病叶研磨，把汁液接种到寄主植物上，对于木本植物，是将原始寄主嫁接到指示植物上。指示植物法简便易行，成本低，但它灵敏性差，所需时间长，难以区分病毒种类。3.3血清清学方法法 抗血

20、清鉴鉴定法要要进行抗抗原的制制备(包包括病毒毒的繁殖殖，病叶叶研磨和和粗汁液液澄清等等)，抗抗血清的的采收、分分离等。血血清可分分装到小小玻璃瓶瓶中，贮贮存在1525的冰冻冻条件下下。测定定时，把把稀释的的抗血清清与未知知的病毒毒植物在在小试管管内混合合，这一一反应导导致形成成可见的的沉淀，然然后根据据沉淀反反应来鉴鉴定病毒毒。此法法灵敏度度高，获获得检测测结果迅迅速，是是目前检检测病毒毒的一种种最好方方法。此外，PCCR微量量板杂交交法55、蛋蛋白质电电泳法、嫁嫁接检测测法、 电子显显微镜检检定法、病病毒症状状学诊断断法等也也可以用用来检测测植物病病毒。4 马铃薯薯组织培培养脱毒毒快繁技技术

21、鉴于当前农农业经济济作物生生产上苗苗木（主主要是无无性繁殖殖作物）存存在着严严重病毒毒累积、品品种退化化、产量量和品质质大幅度度的下降降等问题题，探索索一种脱脱毒效果果好、繁繁殖系数数高、简简易且经经济的繁繁育良种种及健苗苗技术，是是当前农农业经济济作物种种苗木生生产中急急需研究究和探讨讨的课题题。下面面通过以以马铃薯薯为例，进进行热处处理加茎茎尖培养养结合病病毒检测测法获得得脱毒苗苗的方法法，简述述植物组组织培养养脱毒快快繁技术术的应用用。4.1 研研究简史史马铃薯在种种植过程程中易感感染病毒毒，当条条件适合合时，就就会在植植株体内内增殖，转转运和积积累于所所结薯块块中，并并且世代代传递，逐

22、逐年加重重4。病毒毒的增殖殖与植物物正常代代谢极为为密切，目目前尚没没有发现现既能杀杀死病毒毒又不损损伤植物物的药剂剂，病毒毒危害一一度成为为马铃薯薯的不治治之症。1953年Nirris将孔雀石绿（Malachite green）加入培养基中抑制病毒繁殖，并通过茎尖组织培养，获得青山（Green mountain）品种无PVX（马铃薯X病毒）的马铃薯植株。此后，通过茎尖组织培养获得无病毒植株的技术迅速发展，为解决马铃薯病毒危害提供了有效途径，为生产提供优良种薯。目前，国际上用茎尖培养产生的马铃薯品种已达150个左右1。科学研究结结果证明明，侵染染马铃薯薯的病毒毒有200多种。这这些病毒毒一旦侵

23、侵入马铃铃薯植株株和块茎茎，就会会引起马马铃薯退退化，出出现各种种各样的的病态，造造成不同同程度的的减产。研研究的结结果还证证明，病病毒在植植物组织织中分布布是不均均匀的，并并且受一一定环境境条件影影响，在在靠近马马铃薯茎茎的顶端端病毒浓浓度很低低或不含含病毒。根根据这一一特点，通通过茎尖尖培养可可以获得得马铃薯薯无病毒毒苗33。另另外，马马铃薯病病毒，有有的对温温度比较较敏感，有有的不敏敏感，但但对植株株或发芽芽的块茎茎进行高高温处理理后再作作茎尖培培养，一一般脱毒毒率都比比较高。因因此，在在茎尖培培养前，对对植株和和发芽块块茎进行行3035，288天的高高温预处处理，能能收到良良好的效效果

24、。4.2 马马铃薯茎茎尖培养养脱毒方方法利用茎尖组组织培养养结合病病毒检测测，对马马铃薯进进行脱毒毒，进而而生产脱脱毒种薯薯用于生生产，可可有效地地防止种种薯退化化，大幅幅度提高高马铃薯薯产量3。其其主要脱脱毒方法法如下：4.2.11 取材材和消毒毒将欲脱毒地地品种块块茎催芽芽，芽长长455cm时时，剪芽芽并剥去去外叶，自自来水下下冲洗440miin，于于无菌室室内用漂漂白粉溶溶液消毒毒后，无无菌水冲冲洗23次。4.2.33 剥离离茎尖和和接种在无菌室内内，于440倍地地解剖镜镜下，剥剥取带11个叶原原基地茎茎尖，接接种于MMS茎尖尖培养基基地试管管中。试试管中的的MS茎尖尖培养基基包括大大量

25、元素素、微量量元素、有有机成分分和生长长素、细细胞分裂裂素、蔗蔗糖和琼琼脂，ppH值为为5.88，经过过高压蒸蒸汽灭菌菌后使用用，每试试管接种种1个茎尖尖。4.2.44培养基基和培养养条件茎尖培养的的关键是是奖脱毒毒后的茎茎尖透导导生成带带有完整整根、茎茎、的植植株，因因此选择择适合的的培养基基十分重重要。对对于马铃铃薯的茎茎尖培养养来说，需需要较多多的NOO3和NH44+营养，MMS和Milllerr基本培培养基都都是较好好的培养养基，而而且附加加少量（01.mol/l0.5mol/l）的生长素或细胞分裂素或二者都加，培养的效果更好。接种的茎尖培养于25、15003000LX光照条件下培养室

26、内，3个月则长成34片叶的小植株在无菌条件下，进行切段扩繁一次，取部分苗进行病毒检测6。4.2.55 病毒毒检测 病毒检测是是茎尖脱脱毒不可可缺少的的步骤。常常用鉴别别寄主即即指示植植物或血血清学方方法进行行检测，及及时淘汰汰血清学学阳性反反应或在在指示植植物上有有症状的的茎尖苗苗，无任任何反应应的茎尖尖苗即脱脱毒苗用用作大田田快速繁繁殖。4.2.66 结果果通过利用茎茎尖组织织培养结结合病毒毒检测法法获得马马铃薯脱脱毒苗，经经病毒检检测，除除去了马马铃薯中中的病毒毒病，脱脱毒率可可达1000%。5植物组织织培养脱脱毒快繁繁技术应应用前景景的简述述植物组织培培养技术术在作物物上主要要用于育育种

27、和良良种繁殖殖，其次次用于无无性繁殖殖作物的的脱毒和和快繁以以及种质质的保存存等，可可见植物物组织培培养脱毒毒快繁技技术对于于农作物物苗木的的生产具具有极其其重要的的地位1。一一些农作作物或是是花卉植植物等因因长期的的栽培和种植，植植物体内内被侵染染携带病病毒、种种性退化化现在能能利用组组织培养养及快繁繁脱毒方方法开发发出的植植物脱毒毒新品种种有马铃铃薯、甘甘薯、生生姜、大大蒜、草草莓、罗罗汉果、棕榈、剑麻、香蕉、甘蔗以及花卉植物等几百种再生植株。目前这种技术已得到了广泛应用，前景及范围非常广阔。脱毒株苗的的快繁技技术是，经经过茎尖尖培养和和检测取取得的脱脱毒苗，首首先按不不同品种种保存在在管

28、瓶中中。在需需要时对对脱毒苗苗进行切切段繁殖殖，繁殖殖试管苗苗一般都都用MSS培养基基，在1100mml的三三角瓶接接种46节段段。每节节含一个个叶片。在在无菌条条件下进进行培养养。培养养的节段段经过335天天即可生生根，幼幼芽也从从叶腋发发出，110天左左右可形形成23片叶叶的幼苗苗。200天左右右即长成成566片叶的的小植株株。一个个三角瓶瓶有46株脱脱毒苗。这这些小植植株又可可按上述述方法进进行切段段繁殖，从从而扩大大无病毒毒苗株的的数量7。6结论由微生物所所引起的的植物组组织培养养污染一一直是当当前制约约植物组组培发展展的主要要障碍，特特别在接接种和培培养过程程中，污染率率常常高高达8

29、00% 以上上。如何解解决这个个问题已已经引起起很多人人的重视视.国内内许多研研究人员员开展了了这方面面的一些些研究，但还欠欠缺更深深入的研研究探讨讨。这是是有待去去探讨开开发的一一个课题题。本文结合了了笔者在在桂林莱莱茵生物物科技股股份有限限公司的的实习实实践，综综合了自自己通过过做实验验和工作作实践中中获得的的知识与与想法，对对国内外外植物组组织培养养的研究究概况作作了简要要介绍，详详细地综综述了植植物组织织培养脱脱毒快繁繁技术和和方法以以及病毒毒检测方方法，并并对脱毒毒快繁的的应用前前景作了了较详尽尽的分析析。这对对植物组组织培养养脱毒快快繁技术术的探讨讨研究过过程和最最新发展展动态有有

30、了更多多的了解解，对其其深入研研究也是是提供了了很大的的帮助。本文重点研研究探讨讨了介绍绍了利用用热处理理加茎尖尖组织培培养法获获得马铃铃薯脱毒毒苗，得得到的脱脱毒苗脱脱病毒效果果很好，脱脱毒率达达1000%。这这有效地地解决了了当前农农业经济济作物苗苗木生产产传统化化、品种种退化、优优质品种种逐渐消消亡、病病毒病严严重等问问题。对对于拉动动农村经经济的发发展也起起到了很很大的作作用。对对于脱毒毒病毒这这一方面面，建议议把各脱脱毒方法法综合运运用，能能起到很很好的作作用。像像本文中中利用热热处理加加茎尖组组织培养养法试验验获得马马铃薯脱脱毒苗，其其脱毒的的效果就就很好。致谢本人在廖旭旭辉老师师

31、的精心心指导下下，在杨杨洪元老老师、苏苏龙老师师、韦文文添老师师的诚挚挚关怀下下，同学学们的热热心帮助助下，结结合在桂林莱莱茵生物物科技股股份有限限公司的的实习情情况下撰撰写了此此论文。在在此特别别感谢以以上的老老师们的的指导关关怀，感感谢桂林林莱茵生生物科技技股份有有限公司司给予我我实践的的机会，感谢同学们的热心帮助。参考文献1 曹孜义义 刘国国民实用用植物组组织培养养技术教教程修修订本甘肃科科学技术术出版社社，20001.12 韩碧文文植物组组织培养养研究的的进展中国植植物生理理学史料料汇编，中国植植物生理理学会19993：（61165）3 蒲育林林 高占占彪马铃薯薯微型种种薯生产产及应用用前景甘肃农农业科技技，19994.4：394 朱德蔚蔚植物组织织培养与与脱毒快快繁技术术M 北京京：中国科科学技术术出版社社，200015 王明霞霞应用PCCR微量量板杂交交法检测测植物病病毒和类类病毒J 植物物保护，1996, 22 (1): 34356 扬艾茹茹 暴成成光对马铃铃薯脱毒毒种薯生生产的浅浅见马铃薯薯杂志，1988.1：427 李浚明明植物物组织培培养教程程北京农农业大学学出版社社，19991：（61165）8 曹为玉玉等 葡萄茎茎尖脱毒毒培养和和快速繁繁殖华北农农学报19993, 8