环境样品前处理13146.docx

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1、硅胶的活化：DCM（CCH2CL2清洗硅胶胶）(进口口的不需要要清洗，国国产的要清清洗)：将硅胶装于于玻璃柱中中3倍于硅胶胶体积的甲甲醇清洗（大大约800010000mL的的甲醇）同体积的DDCM清洗洗（大约5500MLL的DCMM）将硅胶置于于铝箔纸上上，通风厨厨过夜让溶溶剂挥发干干净（或者者N2吹干干）马福炉中5550烘烤至少少12hrrs,然后后降温到1180停留至少少1hr取出在干燥燥器中降温温后，转制制烧瓶中加加塞密闭，于于干燥器中中备用。Note: 在玻璃璃柱中清洗洗时防止硅硅胶有断层层出现酸性硅胶的的配制30酸性性硅胶的配配制于烧瓶中称称取1000g活化硅硅胶于硅胶上逐逐滴滴入浓

2、浓H2SO4共40g(硫硫酸密度为为1.844g/mLL)计算公式为为 x/(x+1000)=330， x=422.86gg, 42.86/11.84=23.33mLNote 边加边摇摇，以防结结块，或置置于摇床上上至硅胶为为均匀流动动状态置于干燥器器中保存若配制时用用50g硅胶胶，那么HH2SO4取11.65mLL(大约为为21.44g)22%酸性性硅胶：88mL浓HH2SO4加50g活化化硅胶44%酸性性硅胶：443mL浓浓H2SO4加100gg活化硅胶胶44%酸性性硅胶：221.5mmL浓H22SO4加50g活化硅胶胶431.84/(100+431.844)=444%Note: 楼上的的

3、方法不能能用于楼下下，因为所所用的硅胶胶不同，色色谱行为就就不同，即即使柱形一一样。因为为楼上用的的硅胶与楼楼下的不同同，所以不不能方法混混用。楼上上硅胶是国国产，楼下下的是进口口的。碱性硅胶的的配制（11.2%）100g活活化硅胶滴入30gg 1 NN的NaOOH(1NN NaOOH: 11.2gNNaOH溶溶于30mmL水)注意：不要要使硅胶沾沾到烧瓶的的内磨口上上，否则盖盖子关上后后容易粘住住打不开楼上用的是是33%的的碱性硅胶胶 （水NaOHH）/(水水NaOOH+硅胶胶)333%1g NaaOH 加加到25mmL水里，即即配制成了了1moll/L的溶溶液，然后后加入到550g活化化硅

4、胶中。氧化铝：酸性氧化铝铝的活化酸性氧化铝铝装于烧瓶瓶中（体积积不超过一一半）用铝箔纸疏疏松的盖住住瓶口在干燥烘箱箱中130过夜（至至少12hhrs）干燥器中加加塞密闭干燥器中备备用碱性氧化铝铝：（最好好在两周内内使用，后后者最好在在5天内用用完，否则则易失活，可可能需要重重新活化）碱性氧化铝铝盛于蒸发发皿中马福炉中6600烘至少224hrss降温到1330停留至少少3hrss干燥器中降降温后转至至烧瓶中，于于干燥器中中备用弗罗里土：Florrisill(硅酸镁镁)150mmm5mmIID小柱底底部用玻璃璃棉轻轻塞塞住取1g 弗弗罗里土装装于柱子中中，并且轻轻轻拍动柱柱子让填料料均匀沉降降上层

5、再装约约1cm的无无水Na22SO450mL DCM清清洗小柱卸去四氟阀阀，放于通通风橱中过过夜，让溶溶剂挥发干干整个柱子置置于干燥烘烘箱中，1140至少244hrs如不使用则则在1400下存放Note：使用时将将柱取出降降至室温，990分钟内内使用，否否则重新活活化。AgNO33 硅胶（110%）的的配制5.6g AgNO3溶于211mL超纯纯水中逐滴加入到到50g活化化硅胶中（或或者11.2g AAgNO3+35mmL水+1100g硅硅胶）用铝箔纸将将装AgNO3硅胶的烧烧瓶全部包包裹住，烧烧瓶口用铝铝箔纸疏松松地盖住，置置于干燥烘烘箱中烘箱中300烘5hrrs(至少少5hrss)升温到6

6、00停留3hhrs中间慢点升升温升温到1880至少122hrs干燥器中降降温后加塞塞密闭（保保存在棕色色干燥器中中备用）Note:如果在制制作过程中中发现AggNO3硅胶颜色色加深或者者局部变为为灰黑色，应应该弃去此此次配制。变变色原因：升温过快快。Note:装AgNNO3的小烧杯杯要尽快用用超纯水洗洗净，否则则AgNOO3会粘到烧烧杯上，不不容易洗干干净。Na2SOO4： 6660下马福炉炉中烘至少少6 hrrs（优级级纯）注意：提取取筒洗过后后要在马福福炉里4220烘一段时时间纯化注意事事项：1 所有纯纯化柱均采采用干法装装制；2 装好填填料后轻拍拍柱子至填填料表层平平整；3 一旦加加上洗

7、脱液液后，则不不要再拍动动柱子；4 一定量量的hexxane预预淋洗进行行稳定，并并且除去部部分污染杂杂质；5 预淋洗洗时流速控控制在2滴滴/S;6 填料若若出现断层层则不能再再使用；7上柱样品品后，用11mL正己己烷清洗烧烧瓶；8 要等上上一组分液液面约1mmm时再上上样；9 若是做做流出曲线线，对体积积要求就会会严格一些些，接流出出物的量筒筒用铝箔包包上，防止止溶剂挥发发。酸洗or酸酸性硅胶柱柱：1.55cm内径径（15mmmID）结构式 SiOO玻璃毛填充充5g 444%酸性硅硅胶5g 222%酸性硅硅胶（这个个是为了防防止44%硅胶发生生炭化）2g活化硅硅胶2 cm无无水Na22SO4

8、50mL-700mL的HHexanne淋洗样品上样70mL-1000mLHHexanne洗脱旋转蒸发至至2-3mL2 cm无无水Na22SO42g活化硅硅胶5g 222%酸性硅硅胶5g 444%酸性硅硅胶淋洗用的HHexanne量由所所加的硅胶胶量决定，若若酸性硅胶胶（22%+44%）一共才才10克，就就不用1000mLHHexanne洗脱，770mL足足够，太多多反而将杂杂质洗脱下下来了。预预淋洗用溶溶剂量也不不一定要550mL70mLL,由硅胶胶量决定。酸洗前一定定要记住：一定要将将溶剂置换换为Hexxane再再酸洗。硫酸硅胶柱柱净化容量量不足，杂杂质易与ddioxiin 及PPCBs竞竞

9、争氧化铝铝及floorisiil的活性性基位（AActivve siites），使使dioxxin 及及PCBss在流洗过过程中损失失，降低了了回收率。故故acidd sillica要要不能被穿穿透为止（由由管柱的颜颜色外观可可以判定是是否被穿透透）Note：酸洗前，若若样品溶剂剂为DCMM，要将DDCM置换换成Hexxane，CCH2CLL2不能与与H2SOO4混合，过过酸性柱前前将甲苯溶溶剂也要置置换为Heexanee,甲苯剩剩下的越少少越好。酸洗：（注注意酸洗最最多次数不不要超过33次，否则则影响回收收率）在溶液中加加入15gg酸性硅胶胶和搅拌磁磁子，在磁磁力搅拌器器上搅拌330minn

10、s取上清液过过无水Naa2SO44小柱剩下的硫酸酸硅胶用110200 ML的的Hexaane清洗洗两次（于于磁力搅拌拌器上搅拌拌各10分分钟）每次清洗后后过无水NNa2SO4小柱，一并并收集合并后收集集浓缩酸性硅胶柱柱可以吸附附许多离子子或者非离离子性官能能基化合物物，包括生生物碱，糖糖脂，配糖糖物（醣），染染料，碱金金属离子，脂脂质，甘油油，类固醇醇，可塑剂剂，多环芳芳香族化合合物及酚类类衍生物等等。酸碱硅胶柱柱纯化（复复合硅胶柱柱）30ccm15mmmID底部有2000目玻璃璃砂芯和四四氟磨口阀阀1g活化硅硅胶1g活化硅硅胶4g碱性硅硅胶 4gg碱性硅胶胶1g活化硅硅胶 1g活化硅硅胶8g

11、酸性硅硅胶 8gg酸性硅胶胶2g活化硅硅胶 1g活化硅硅胶1cm无水水Na2SSO4 2gAgNNO3硅胶胶100mLLHexaane预淋淋洗2cm无水水Na2SSO475mLHHexanne洗脱100mLLHexaane预淋淋洗上样后用1150mLL (DCCM/Heexanee=5/995)洗脱脱2 cm无无水Na22SO42cm无水水Na2SSO41g活化硅硅胶2 g AAgNO33硅胶8g 444%酸性硅硅胶1g活化硅硅胶8g酸性硅硅胶1g活化硅硅胶3g碱性硅硅胶1g活化硅硅胶1g活化硅硅胶4g碱性硅硅胶1.5g2 g AAgNO33硅胶1g活化硅硅胶1g活化硅硅胶楼下的方法法 ：先用

12、用100mLLHexaane预淋洗，上上样后用150mLL洗脱。DCM/HHexanne5/95楼上的方法法 ：先用用70mLL-990mLHHexanne预淋洗洗，上样后后，用1000mLHHexanne洗脱。注意：AggNO3硅硅胶不要加加得太多，它对PCBs有吸附作用，AgNO3硅胶尽量称得准确些，它对流出曲线影响较大些（AgNO3有一定的极性）分析PBDDE时，要要用铝箔纸纸将层析柱柱包上，防防光（PBBDE与AAgNO33都要防光光）分析PBDDE时是一一样的柱子子，一样的的填料，洗洗脱是先1100mLLHexaane预淋淋洗，上样样后先用770mLHHexanne洗，弃弃去，再用用

13、70mLL 1：11（DCMM/Hexxane）洗洗，这时洗洗下的就是是含有PBBDE的成成分。1cm无水水Na2SSO46 g 酸酸性or 碱性氧化化铝氧化铝纯化化柱： 30ccm15mmmID玻璃璃柱6 g 酸酸性or 碱性氧化化铝1cm无水水Na2SSO4100mLL Hexxane 预淋洗酸性氧化铝铝 碱性性氧化铝DCM : Hexxane (1:11,V:VV)DCMM:Hexxane(1:1, V:VV)40mL洗洗脱 300mL440mL洗洗脱旋蒸时留11mL左右右，因为弗弗罗里土纯纯化柱太细细，要减小小上样的高高度，洗脱脱时注意控控制流速，不不能太快，塞塞子不要垂垂直，倾斜斜既

14、可弗罗里土纯纯化柱： 柱型 1150mmm5mmIID玻璃棉1g弗罗里里土1cm无水水Na2SSO450mLDDCM清洗洗溶剂挥发（要要卸下塞子子）140下下至少烘224hrss冷却后900min内内使用（装装上塞子）50mLHHexanne预淋洗洗35mL收收集PCBBs（300mL-335mL洗洗脱）DCCM:Heexanee(5:995,V:V)DCM（二二氯甲烷）40mL-45mL收集dioxins生物组织脂脂肪含量测测定和去除除：提取脂肪前前烧瓶称重重提取液转移移至此烧瓶瓶旋转浓缩缩近干后移移至N2流流下将多余余溶剂吹走走，直至天天平称重无无变化（百百分位天平平）称量提取后后烧瓶重两

15、次重量差差即为脂肪肪含量脂肪含量【（提取取后烧瓶重重提取前前烧瓶重）/提取样】（1组织水分百分含量）称脂后加550mLHHexanne溶解提提取物15g酸性性硅胶，搅搅拌磁子搅拌30mmins过无水Naa2SO44小柱5mLHeexanee清洗两次次合并收集后后浓缩楼上氧化铝铝0.8 cmIDD,细柱，半半湿法装柱柱若是1.00cmIDD,则All2O3用用10g柱中加300mLHeexanee8g All2O31cm NNa2SO4预淋洗（330mL-40mLLHexaane洗脱脱）上样DCM/HHexanne5：955 1000mL洗脱脱PCBssDCM/HHexanne1:1 550mL

16、洗洗脱diooxinss凝胶渗透色色谱 GPPC填料： BBio-BBeadss SXX3GPC 柱柱型 300cm25mmmID(柱柱子下面有有砂芯)填料 300g于烧杯杯中加入DCMM:Hexxane（11：1，VV：V）全全部盖住铝箔纸盖住住烧杯置于于通风橱过过夜，至少少12hrrs,填料料充分溶胀胀搅动填料，并并用吸管逐逐步将填料料转移到柱柱中，中间间打开四氟氟阀放去多多余的溶剂剂全部转移后后，上部留留有10ccm溶剂上端加塞，底底部关阀整个柱子倒倒置后打开开阀门振荡柱体，使使填料逐渐渐整体均匀匀倒置关闭阀门，将将柱子缓慢慢扶正，并并且打开上上面的磨口口塞，可以以看到填料料均匀沉降降直

17、至完全全应该无断层层，无气泡泡，无沉降降分界层500mLL DCMM：Hexxane（11:1 ,V:V）淋洗，（注意要将溶剂混合均匀）滴速 23滴/SS不用时关阀阀加塞密闭闭，上层留留有5CMM以上的溶溶剂，GPPC使用溶溶剂均为DDCM：HHexanne（1：1，V:V）若长长时间没用用，纯化前前用1000mL溶剂剂预淋洗GPC洗脱脱DCM：HHexanne(1:1,V:V)100mLL 预淋洗洗（量筒接接）量筒11上样后，先先用50 mL DDCM：HHexanne(1:1,V:V)去掉掉大分子（量量筒接）量量筒2另外量筒接接70mLL(DCMM/Hexxane=1/1)为PCBB 量筒

18、33另外量筒接接50mLL,量筒44量筒4与量量筒2 50mLL合并保存存，以防重重复实验时时回收再分分析注意：1若GPCC柱中物料料层有气泡泡，则上面面用塞子堵堵上，稍微微晃一下柱柱子可以去去除。若溶溶剂干了会会造成断层层。2GPC柱柱用前由于于重心作用用，上层发发胀，所以以需要释放放一段洗脱脱溶剂，将将发胀部分分压下去，再再上样。N2吹纯化后样品品旋转蒸发发转移入KDD管后N22吹剩下0.22-0.33mL左右右进样小瓶瓶瓶芯中加115uL的的壬烷Kd管中样样品转移至至瓶芯N2吹（温温度不要太太高3060，太高有有损失）洗KD管用用DCM or HHexanne至少洗洗2次，合合并到进样样

19、小瓶瓶芯芯中N2吹至瓶瓶芯拐弯处上1mmm2mm处加入回收标标保证进样样小瓶中最最后溶液约约为20L左右涡轮注意 进进样小瓶与与瓶芯大小小要搭配加标前标准准溶液需要要提前从冰冰箱中拿出出来平衡大大约10几几分钟配制标准溶溶液： 举举例PBB标样样转移到棕棕色小瓶AA小瓶A用DDCM清洗洗3次（涡涡轮）贴标签纸（标标签纸不要要贴太大，用用透明胶贴贴一下）称空瓶重量量W0将装标样的的安培小瓶瓶B按划线掰掰开DCM清洗洗一下滴管管，晾干，用用滴管将标标样安培瓶里的的标准溶液液吸出转移移入小瓶AA称量装标后后的小瓶与与标的重量量W1那么W1-W0即为取的的标的重量量C18柱结结构式： SiiC188H37目的：清除除极性物质质，ex: 蛋白，脂脂质铜粉去S前前铜粉的准准备铜粉置于烧烧瓶中6MHCLL倒入清洗洗，不锈钢钢药勺搅拌拌倒掉HCLL，超纯水水清洗数次次，洗净HHCL为止止倒入丙酮清清洗数次，将将水洗净将铜粉晾干干备用（晾晾干的方法法可以用NN2吹干）分析PBDDE时所用用的方法1.5 gg AgNNO3装到到柱子里（30cm15mmmID玻璃璃柱）50mL or 330 mLL Hexxane预预淋洗100mLL Hexx洗PCBB+diooxin50mL 10%DCMM+90% Hexxane洗PPBDE18