实验室生物安全标准操作规程gbkq.docx
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1、文件号：YMY-PGCC县县畜牧兽兽医工作作站实验室生生物安全全标准操作规程程（第一版版）批 准：审 核：受控状态态：受 控20099年9月月10日日发布20009年年11月月01日日实施修 订 表版 号程序号修订次序序修 订 内 容容批 准日 期目 录录BSL-1实验室室个人防防护装备备的总体体要求实验室人人员进出出实验室室实验室检检测样品品采集实验室检检测样品品包装和和运送实验室检检测样品品接收动物细菌菌病检测测操作规规程动物病毒毒病检测测操作规规程动物寄生生虫病检检测操作作规程电气设备备操作规规程实验室消消毒剂配配制标准准操作规规程无菌间使使用标准准操作规规程菌（毒）种种保种、传传代操作
2、作规程实验室废废弃物处处理标准准操作规规程实验室消消毒标准准操作程程序实验室消消毒效果果评价操操作程序序实验室意意外事故故处理实验室个个人防护护装备的的总体要要求1 目目的个人防护护装备是是减少操操作人员员暴露于于气溶胶胶、喷溅溅物以及及意外接接种等危危险的一一个屏障障。为了了实验人人员的安安全，以以保证实实验室人人员的安安全及实实验室环环境不被被污染。2 适适用范围围适用于生生物安全全实验室室选用个个人防护护装备（防防护口罩罩、防护护手套、防防护服与与防护鞋鞋）的质质量控制制。3 职职责实验室主主任组织织有关人人员采购购符合要要求的个个人防护护装备，并并且严格格控制其其质量。4 程程序实验室
3、所所用的个个人防护护装备应应符合国国家标准准GB1194889-220088实验验室生物物安全通通用要求求。在在生物因因子危害害评估的的基础上上，按不不同级别别的防护护要求选选择适当当的个人人防护装装备。4.1防防护口罩罩根据病病原微生生物实验验室生物物安全管管理条例例、GGB1994899-20008实实验室生生物安全全通用要要求、医用防护口罩技术要求，生物安全实验室选用P2级的防护口罩，必须满足GB 19083-2003以下条件：（1）长长方形口口罩展开开后中心心部分尺尺寸：长长度不小小于177cm、宽宽度不小小于177cm；密合型型拱形口口罩尺寸寸：横径径不小于于14ccm，纵径不小小于
4、144cm。（2）口口罩表面面不得有有破洞、污污渍；口罩带带应调节节方便，应有足足够强度度固定口口罩位置置。每根根口罩带带与口罩罩体连接接点的断断裂强力应不小小于100N。（3）口口罩滤料料的颗粒粒过滤效效率应不不小于995；经环环氧乙烷烷灭菌的的口罩，其其环氧乙乙烷残留留量应不不超过110g/gg；不能能从防护护口罩中中检出致致病菌；口罩对对皮肤无刺激。 4.22防护手手套实验室防防护手套套选择用用国内生生产的一一次性乳乳胶手套套和耐酸酸碱手套套。技术术要求见见国标GGB75543-19996。4.3防防护鞋及及鞋套防护鞋应应该选择择耐磨、防防滑和舒舒适的合合成材料料制成的的鞋类。鞋套应为为
5、塑料材材质制成成，可防防水、要要求一次次性使用用。4.4防防护服BSL-2实验验室试验验操作人人员的防防护服装装主要选选择一次次性的连连体防护护服，通通常选用用国内厂厂商合格格的防护护服。上上下连体体式，宜宜连鞋帽帽，无口口袋、无无横褶、腰腰带、接接缝封缝缝、光洁洁。发尘尘量小、不不易发生生纤维剥剥落、断断丝；不不易产生生静电和和粘附粒粒子；耐耐有机溶溶剂，透透明度低低、柔软软、舒适适、不妨妨碍动作作。BSL-1实验验室人员员进出实实验室 11 目目的制定BSSL-11实验室室人员进进出的标标准操作作程序，保保障实验验室生物物安全。2 适适用范围围适用于BBSL-1实验验室人员员进出程程序。3
6、 职职责实验室工工作人员员执行本本程序的的规定。实实验室安安全负责责人(生生物安全全)监督督执行。4 程程序4.1进进入程序序4.1.1 实实验室工工作人员员进入BBSL-1实验验室门厅厅，脱掉掉自已所所穿鞋，放放入外侧侧鞋柜内内，转向向内侧，从从内侧鞋鞋柜取出出工作鞋鞋换上。4.1.2实验验室工作作人员进进入更衣衣间，先先用消毒毒肥皂洗洗手，洗洗完手后后，穿上上医用白白大褂或或连体工工作服，戴戴上一次次性口罩罩、头套套和一次次性乳胶胶手套。4.2 退出程程序4.2.1试验验结束后后，实验验室工作作人员在在实验室室脱掉一一次性口口罩和一一次性乳乳胶手套套和一次次性防护护服，装装入高压压灭菌袋袋
7、中。4.2.2实验验室工作作人员在在更衣间间脱下医医用白大大褂，打打开更衣衣间的紫紫外灯进进行紫外外消毒。实实验室工工作人员员先用00.5%新洁尔尔灭对手手进行消消毒，再再用消毒毒肥皂洗洗手。4.2.3 实实验室工工作人员员退到实实验室门门厅，脱脱掉工作作鞋，放放入内侧侧鞋柜，转转向外侧侧，从外外侧鞋柜柜中取出出自己所所穿鞋。离离开实验验室。实验室检检测样品品采集 1 目的为保障检检测实验验的顺利利进行，防防止病毒毒扩散，规规范采样样程序。2 适适用范围围适用于实实验室样样品的采采集。3 职职责3.1 采集检检测样品品的工作作人员在在采集过过程中应应当防止止病原扩扩散，并并对样本本的来源源、采
8、集集过程和和处理方方法等作作详细记记录。3.2 检验人人员必须须严格按按照本操操作规程程操作，不不可擅自自做出超超出本规规程的操操作，所所有实验验人员对对所从事事的工作作负相应应的责任任。4 程程序4.1 工作要要求采集和处处理检测测样品应应当具备备下列条条件：4.1.1 具具有采集集、处理理样品所所需要的的生物安安全防护护设备；4.1.2 具具有掌握握相关专专业知识识和操作作技能的的工作人人员；4.1.3 具具有有效效的防止止病原扩扩散的措措施；4.1.4 具具有保证证检测样样品质量量的技术术方法和和手段。4.2实实验材料料准备灭菌菌的解剖剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管
9、、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存夜）、50甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。4.3 活畜样品品的采集集 4.33.1 血清样样品的采采集4.3.1.11 采血血方法对采血部部位的皮皮肤先剃剃（拔）毛毛，碘酊酊消毒， 75%的酒精精消毒，待待干燥后后采血。采采血方法法推行生生猪前腔腔静脉、牛牛羊站立立式颈静静脉、禽禽类翅静静脉采血血，采血血过程严严格无菌菌。4.
10、3.1.22 采血血数量单一病种种抗体监监测的每每头（只只）采集集233mL全全血，多多病种抗抗体检测测的每头头（只）采采集510mmL全血血。4.3.1.33 全血血保存采集好的的全血转转入盛血血试管，斜斜面存放放，室温温凝固后后直接放放在盛有有冰块的的保温箱箱，送实实验室。从从全血采采出到血血清分出出的时间间不超过过10hh。4.3.1.44 血清清分离 凝固全全血在室室温24h后，有有血清析析出时，用用无菌针针剥离血血凝块，然然后放入入4冰箱48h后，待待大量血血清析出出时，吸吸出血清清。必要要时经离离心机330000rpmm 、30mmin离离心，吸吸出血清清。分离离的血清清，一般般不
11、加防防腐剂。血血清若在在12周内即即可检验验，可放放在4冰箱内内保存；如果保保存时间间较长，应应放在-20-800冰箱内内保存。运运送血清清时可将将血清放放在盛有有冰块的的保温箱箱中运送送。4.3.2 全全血样品品的采集集 全血采集集后应直直接注入盛有抗凝凝剂的试试管中，立立即摇动动，充分分混合。也也可将全全血液注入盛有玻璃璃珠的灭灭菌瓶中中，立即即连续振振荡脱纤纤维蛋白白。4.4 活禽样样品的采采集咽喉拭子子的采集集：将棉棉签插入入喉头口口及上颚颚裂处来来回刮335次取咽咽喉分泌泌液，泄泄殖腔拭拭子的采采集：将将棉签插入入取泄殖殖腔转223圈圈并沾取取少量粪粪便，再再将咽喉喉拭子、泄泄殖腔拭
12、拭子一并并放入盛盛有0.811.0mmL加有有抗生素素PBSS的EP管中中，加盖盖，编号号。 4.55 病死死（屠宰宰）畜禽禽样品的的采集4.5.1 解解剖前检检查急性死亡亡的牛、羊羊、猪、马马等动物物，解剖剖之前应应作临床床检查，疑似炭疽疽病的应应采血、镜检，排除炭疽病时，方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。4.5.2 肝肝、脾、肾肾、淋巴巴结、肺和牛、马马心脏样样品的采采集在肝、脾脾、肾、淋淋巴结、肺和牛、马马心脏有有病变的的部位各各采取223cmm3的小小方块，分分别置于于灭菌的的试管或或平皿中中。其他他畜禽采采集整个个心脏，置置于自封封袋中。细细菌分离离
13、样品的的采集可可用烧红红的刀片片烫烙脏脏器表面面，在烧烧烙部位位刺一孔孔，用灭灭菌后的的铂金耳伸伸入孔内内，取少少量组织织或液体体，作涂涂片镜检检或划线线接种于于适宜的的培养基基上。4.5.3 脑脑、脊髓髓样品的的采集取脑、脊脊髓23cmm3浸入入50%甘油盐盐水中或或将整个个头部（猪猪、牛、马马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水的容器中。4.5.4肠、肠肠内容物物及粪便便样品的的采集肠样品的的采集：选择病病变最严严重的部部分，将将其中的的内容物物弃去，用用灭菌的的生理盐盐水轻轻轻冲洗后后，置于于试管中中。肠内内容物样样品的采采集：烧烧烙肠壁壁表面，用用吸管扎扎穿肠壁壁，从肠肠腔内吸吸取肠
14、内内容物，放放入盛有有30%甘油盐盐水中或或者直接接将带有有粪便的的肠管两两端结扎扎，从两两端剪断断。粪便便样品的的采集：用棉签插到到直肠黏黏膜表面面采集粪粪便，然然后将拭拭子放入入盛有330%甘甘油盐水水中。4.5.5液体体病料样样品的采采集采集胆汁汁、脓、粘粘液、关节液液、水泡泡液等样样品时，用用药物或或烫烙法法消毒采采样部位位，用灭灭菌吸管管（毛细吸吸管、注注射器）经消毒部位位插入，吸吸取内部部液体，然然后将病病料注入入灭菌试试管中，加盖。也可用接种环经消毒部位插入，提取病料直接接种在培养基上。 4.55.6 胎儿样品品的采集集取流产后后的整个个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。4.5
15、.7 皮皮肤样品品的采集集 用清水清清洗病变变皮肤后后，取病病变皮肤肤355g放入入灭菌小小瓶中，加加适量550甘甘油磷酸酸盐缓冲冲液(ppH7.4)，加加盖密封封。4.5.8 死死（屠宰宰）禽样样品的采采集死（屠宰宰）禽样样品的采采集除按按上述方方法采集集，也可可将整个个死禽装装入不透透水塑料料薄膜袋袋或自封封袋中或或其他容容器内。4.6 组织样样品采集集完后的的无害化化处理活畜禽、病病死畜禽禽组织样样品采集集完后，应做好样品品外包装装和环境境消毒以以及病死畜禽禽及其产产品的无害化化处理。5. 样品编编号、采采样单、送送检单填填写每头动物物的不同同部位的的组织样样品应单单独包装装。包装装好后
16、，在在样品袋袋或平皿皿外贴上上标签，标标签注明明样品名名、样品品编号、采采样日期期等。采采集好不不同部位位的样品品后，同同一动物物的样品品集中包包装。样样品编号号由122位字母母和数字字组成。其其中前两两位大写写字母为为区县（自自治县）代代码（见见附件），第第3、44位和55、6位位数字分分别代表表采样年年度和月月份，第第7、88位字母母代表动动物种类类（Sww表示猪猪，Boo表示牛牛，Caa表示羊羊，Ckk表示鸡鸡，Dkk表示鸭鸭，Goo表示鹅鹅），第第9位字字母F表表示复核核血清样样品，第第9位字字母J表表示病原原学监督督监测样样品，第第9位字字母W表表示委托托样品，后后3位数数字表示示样
17、品的的序号（应应连续编编号）。同时填写写动物血血清和组组织（拭拭子）采采样单、流流行病学学调查表表、动物物检测样样品送检检单和动动物疫病病预防控控制中心心接诊单单。动物物血清和和组织（拭拭子）采采样单一一式三份份，一份份由被采采样单位位保存、一一份由送送检单位位保存、一一份由检检测单位位保存。动动物检测测样品送送检单一一式两份份，一份份由送检检单位保保存，一一份由检检测单位位保存。动动物疫病病预防控控制中心心接诊单单一式两两份，一一份由送送检单位位保存，一一份由检检测单位位保存。实验室检检测样品品包装和和运送 1目目的维护检测测样品的的质量，防防止病原原的泄漏漏和扩散散，保障障样品检检测的顺顺
18、利开展展。2适用用范围适用于检检测样品品的包装装和运送送。3职责责3.1 操作者者必须严严格按照照本程序序操作，不不可擅自自做出超超出本程程序的操操作，所所有实验验人员对对所从事事的工作作负相应应的责任任。3.2 实验室室主任负负有对病病毒样品品包装、运运输的监监督和管管理职责责，并监监督检查查相关工工作人员员的安全全工作程序序和行为为。4程序序拟运输的的病毒样样品，要要求严密密包装，外外表加以以消毒，编编号、登登记后，贴贴上“生物危危险”标识，并并严防标标识脱落落。样品品必须经经三层包包装。4.1 样品的的包装4.1.1 内内包装4.1.1.11 必须须是不透透水、防防泄漏的的主容器器，保证
19、证完全密密封。4.1.1.22 必须须是结实实、不透透水和防防泄漏的的辅助包包装。4.1.1.33 必须须在主容容器和辅辅助包装装之间填填充吸附附材料。吸吸附材料料必须充充足，能能够吸收收所有的的内装物物。多个个主容器器装入一一个辅助助包装时时，必须须将它们们分别包包装。4.1.1.44 主容容器的表表面贴上上标签，注注明样品品类别、编编号、名名称、数数量等信信息。4.1.1.55 相关关文件，例例如毒种种或样本本数量表表格、危危险性声声明、信信件、毒毒种或样样本鉴定定资料、发发送者和和接收者者的信息息等应当当放入一一个防水水袋中，并并贴在辅辅助包装装的外面面。4.1.2 外外包装4.1.2.
20、11 外包包装的强强度应当当充分满满足对于于其容器器、重量量及预期期使用方方式的要要求。4.1.2.22 外包包装应当当印上生生物危险险标识并并标注“生物危危害二级级，非专专业人员员严禁拆拆 开！”的警告告语。4.1.3 包包装要求求4.1.3.11 液体体或者固固体样品品在辅助包包装周围围必须放放置冰、干干冰或者者其他冷冷冻剂，或或者按照照规定将将冷冻剂剂放在由由一个或或者多个个完整包包装件组组成的合合成包装装件中，内内部要有有支撑物物，干冰冰或者干干冰消耗耗掉以后后，仍可可以把辅辅助包装装固定在在原位置置上。如如果使用用冰，包包装必须须不透水水；如果果使用干干冰，外外包装必必须能排排出二氧
21、氧化碳气气体；如如果使用用冷冻剂剂，主容容器和辅辅助包装装必须保保持良好好的性能能，在冷冷冻剂消消耗完以以后，仍仍能承受受运输中中的温度度和压力力。4.1.3.22 冻干干样品主容器必必须是火火焰封口口的玻璃璃安瓿或或者是用用金属封封口的胶胶塞玻璃璃瓶。在在辅助包包装周围围还必须须放置冰冰、干冰冰或者其其他冷冻冻剂。4.2样样品运送送4.2.1样品品运输要要求中心心主任（生生物安全全负责人人）负责责审批传传染性样样本运输输计划，菌菌（毒）种种保管人人员负责责菌（毒毒）种样样本的保保存和发发放，运运送人员员严格按按照病病原微生生物实验验室生物物安全管管理条例例的规规定运输输样本。4.2.2 所所
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