医疗器械无菌试验检查标准hhxy.docx

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1、医疗器械械无菌试试验检查查要点指指南无菌检验验是无菌菌医疗器器械产品品生产控控制过程程中的一一项重要要内容。其其检验方方法、检检验结果果判定及及检验人人员业务务能力等等因素直直接影响响产品的的质量和和安全。作作为无菌菌医疗器器械生产产企业，其无菌检验工作应由本企业独立完成。本指南旨旨在帮助助医疗器器械生产产监管人人员增强强对无菌菌检验相相关知识识的认识识，指导导和规范范医疗器器械生产产监管人人员对医医疗器械械生产企企业无菌菌检验过过程控制制水平的的监督检检查工作作，同时时，为医医疗器械械生产企企业（以以下简称称生产企企业）在在无菌检检验的过过程管理理要求提提供参考考和依据据。当国家相相关法规规

2、、标准准、检查查要求发发生变化化时，应应重新修修订本指指南。一、适用用范围本指南适适用于药药品监督督管理局局组织、实实施的医医疗器械械生产企企业许可可证核核发、变变更、换换证等现现场检查查、医疗疗器械质质量管理理体系考考核、医医疗器械械生产质质量管理理规范检检查、医医疗器械械生产日日常监督督等各项项涉无菌菌检验的的检查。二、检查查内容检查人员员应在充充分了解解生产企企业无菌菌检验活活动的情情况下，对对其无菌菌检验过过程的控控制水平平进行客客观的检检查和评评价。一般情况况下，检检查人员员可按照照以下顺顺序开展展检查工工作，并并适时做做好相关关记录：1、了解解产品特特性及生生产企业业选择的的无菌检

3、检验方法法。常见见的产品品无菌检检查法包包括直接接接种法法和薄膜膜过滤法法。当建建立产品品的无菌菌检查方方法时，生生产企业业应进行行方法的的验证，以以证明所所采用的的方法能能够给出出正确的的结果。若若该产品品的组分分或原检检验条件件发生改改变时，检检查方法法应重新新验证。验验证时，应应按供试试品无菌菌检查的的规定及及有关要要求进行行操作。对对药典规规定的每每一试验验菌应逐逐一进行行验证。验验证试验验也可与与供试品品的无菌菌检查同同时进行行。2、了解解检验人人员的专专业背景景、培训训情况及及工作经经历。可可通过查查看学历历证书、培培训证书书或当面面询问检检验人员员的方式式，检查查无菌检检验人员员

4、是否具具备微生生物专业业知识，并并经过无无菌技术术的培训训。3、现场场察看无无菌实验验室。无无菌检查查应在环环境洁净净度100000级级下的局局部洁净净度 1000级的的单向流流空气区区域内（如如在万级级洁净间间内配置置超净工工作台等等）中进进行，其其全过程程必须严严格遵守守无菌操操作，防防止微生生物污染染。单向向流空气气区、工工作台面面及环境境应定期期监测。4、现场场察看无无菌试验验所需的的设备和和器具。其其中，主要设备备包括：恒温培培养箱（真真菌、细细菌）、恒恒温水浴浴箱、压压力蒸汽汽灭菌器器、电热热干燥箱箱、电子子天平、光光学显微微镜、集集菌仪、过过滤装置置（无油油真空泵泵、滤杯杯、滤头

5、头、滤瓶瓶、微孔孔滤膜、夹夹子）等等；（从从试验安安全性考考虑，建建议阳性性对照试试验使用用生物安安全柜）主要器具具有：试试管及试试管架、酒酒精灯、75乙醇醇棉、灭灭菌刻度度吸管(1mml)、灭菌菌平皿（9cm）、锥锥形瓶、三三角烧瓶瓶、灭菌菌剪刀、镊镊子等。生产企业业应采用用可靠方方法对与与供试液液接触的的所有器器具灭菌菌，通常常置压力力蒸汽灭灭菌器内内12130分钟，或或置电热热干燥箱箱内1602小时。器器具灭菌菌后必须须做好标标识，标标明灭菌菌的时间间和使用用有效期期。器皿皿在灭菌菌后，最最多1周即用用完。检检查时还还应注意意清点培培养皿的的个数，与与试验记记录中反反映的培培养基个个数是

6、否否一致。5、对照照生产企企业有关关无菌试试验的管管理制度度、操作作规程等等相关技技术文件件，要求求检验人人员当场场操作或或口述无无菌检验验的过程程。（1）培培养基制制备生产企业业可按药药典中的的处方制制备培养养基，亦亦可使用用按该处处方生产产的符合合规定的的脱水培培养基。配配制后应应采用验验证合格格的灭菌菌程序灭灭菌。制制备好的的培养基基应保存存在225、避光光的环境境，若保保存于非非密闭容容器中，一一般在3周内使使用；若若保存于于密闭容容器中，一一般可在在1年内使使用。无菌检查查用的硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良良马丁培培养基等等应符合合培养基基的无菌菌性检查查及灵敏敏度检查查的要求求

7、。检查查可在供供试品的的无菌检检查前或或与供试试品的无无菌检查查同时进进行。（2）供供试品的的无菌检检查无菌检查查法包括括薄膜过过滤法和和直接接接种法。只只要供试试品性状状允许，应应采用薄薄膜过滤滤法。供供试品无无菌检查查所采用用的检查查方法和和检验条条件应与与验证的的方法相相同。无无菌试验验过程中中，若需需使用表表面活性性剂、灭灭活剂、中中和剂等等试剂，应应证明其其有效性性，且对对微生物物无毒性性。无菌操作作时，对对供试品品容器表表面应用用适宜的的消毒液液进行彻彻底消毒毒，如果果供试品品容器内内有一定定的真空空度，可可用适宜宜的无菌菌器材（如如带有除除菌过滤滤器的针针头）向向容器内内导入无无

8、菌空气气，再按按无菌操操作起开开容器取取出内容容物。（3）培培养及观观察含培养基基的容器器按规定定的温度度培养14天。培培养期间间应逐日日观察并并记录是是否有菌菌生长。如如在加入入供试品品后、或或在培养养过程中中，培养养基出现现浑浊，培培养14天后，不不能从外外观上判判断有无无微生物物生长，可可取该培培养液适适量转种种至同种种新鲜培培养基中中，细菌菌培养2天、真真菌培养养3天，观观察接种种的同种种新鲜培培养基是是否再出出现浑浊浊；或取取培养液液涂片，染染色，镜镜检，判判断是否否有菌。在观察试试验结果果的过程程中，还还应考虑虑假阴性性的影响响。其中中影响假假阴性发发生的因因素有：培养条条件不能能

9、支持微微生物的的生长（促促生长试试验）；在无菌菌试验中中，产品品中释放放出了杀杀菌或微微生物电电解的物物质（消消除抑菌菌物质）；从灭菌菌处理到到培养有有一定的的时间间间隔（确确定灭菌菌后产品品的储存存条件及及储存时时间）。（4）结结果判断断生产企业业应按照照如下标标准进行行判断：若供试试品管均均澄清，或或虽显浑浑浊但经经确证无无菌生长长，判供供试品符符合规定定；若供试试品管中中任何一一管显浑浑浊并确确证有菌菌生长，判判供试品品不符合合规定，除除非能充充分证明明试验结结果无效效，即生生长的微微生物非非供试品品所含。阳阳性对照照管应生生长良好好，阴性性对照管管不得有有菌生长长，否则则试验无无效。当

10、符合下下列至少少一个条条件时，方方可判试试验结果果无效：无菌检检查试验验所用的的设备及及环境的的微生物物监控结结果不符符合无菌菌检查法法的要求求；回顾无无菌试验验过程，发发现有可可能引起起微生物物污染的的因素；供试品品管中生生长的微微生物经经鉴定后后，确证证是因无无菌试验验中所使使用的物物品和（或或）无菌菌操作技技术不当当引起的的。试验若经经确认无无效，应应重试。重重试时，重重新取同同量供试试品，依依法重试试，若无无菌生长长，判供供试品符符合规定定；若有有菌生长长，判供供试品不不符合规规定。6、查阅阅试验记记录。完完整的试试验记录录应明确确包含下下列几类类信息：（1）样样品记录录，至少少应包括

11、括：取样样日期、样样品名称称、样品品规格、样样品批号号、取样样地点、取取样方式式、取样样人、原原始试验验记录序序号。（2）灭灭菌物品品制作记记录培养基基：培养养基名称称、培养养基批号号、培养养基用量量（g）、蒸蒸馏水用用量（ml）、培培养基分分装数量量、灭菌菌日期、灭灭菌的实实际温度度和压力力、灭菌菌时间、制制作人、培培养基存存放地点点和有效效期等。器具：器具名名称、器器具数量量、灭菌菌日期、灭菌的实际温度和压力、灭菌时间、制作人、器具存放地点、有效期等。（3）原原始试验验记录，至至少应包包括：记记录名称称、记录录序号、样样品名称称、样品品唯一性性标识（例例如：样样品号）、样样品规格格、样品品

12、批号、灭灭菌批号号、样品品数量、取取样日期期、检验验日期、检检验依据据、主要要试验设设备及器器具、试试验方法法、试验验环境条条件、试试验结果果（每日日观察的的结果）、试试验结论论、检测测人、复复核人等等。（4）废废弃物处处理记录录，至少少应包括括：废弃弃物形态态（固体体、液体体）、废废弃物数数量、灭灭菌时间间和压力力、经办办人、处处理日期期等。三、其它它应注意意的问题题1、生产产企业应应确保样样品具有有代表性性：试验验样品应应从常规规产品中中能够代代表加工工过程和和条件的的批中选选择。选选择样品品是随机机的。试试验样品品的选择择和处理理技术应应明确，以以免对样样品上所所含的微微生物的的数量和和

13、种类造造成污染染和改变变。试验验样品可可以选择择制造过过程中的的不合格格产品，它它们应该该代表这这个生产产批的加加工程序序和条件件。用于于试验的的不合格格产品应应不会影影响无菌菌测试的的有效性性。2、生产产企业对对于供试试品的选选取、转转移过程程要采取取防止污污染措施施，确保保试验结结果的可可靠性。选选取制作作供试品品的试验验样品时时，样品品包装须须完好无无损，尤尤其是只只有一层层包装的的样品。进进入无菌菌检验室室的样品品若有两两层（或或两层以以上）包包装的，需需将外包包装在传传递窗（或或缓冲间间）拆除除后，传传入实验验室。3、无菌菌检验中中接触供供试品的的试验用用具温度度不能过过高以防防可能

14、存存在的菌菌被烫死死。对不不同种类类和不同同批次的的产品，在在拆包装装及夹取取样品时时，应更更换试验验用具（如如：剪刀刀、镊子子）。4、进入入无菌操操作室的的所有培培养基、供供试品等等的外表表都应采采用适用用的方法法进行消消毒处理（如如：紫外外灯照射射不少于于30分钟钟），以以避免将将外包装装污染的的微生物物带入无无菌检验验室。出出具试验验结果后后，所有有培养物物须经121高压灭灭菌30分钟的的处理。5、由于于无菌检检验时间间跨度较较长，因因此过程程的记录录应能够够完整体体现试验验的全过过程，对对于在试试验过程程中出现现的各种种情况，均均应在记记录中客客观反映映。参考资料料一：常见的名名词解释

15、释1、灭菌菌：杀灭灭或除去去特定环环境或物物品中一一切微生生物的过过程。目目前国际际上规定定，灭菌菌过程必必须使灭灭菌物品品污染的的微生物物存活率率减少到到10-66及以下下。2、微生生物：在在显微镜镜下才能能看到的的微小实实体，包包括细菌菌、真菌菌、原生生动物和和病毒。3、无菌菌技术：是指在在微生物物试验工工作中，控控制或防防止各类类微生物物的污染染及其干干扰的一一系列操操作方法法和有关关措施，其其中包括括无菌环环境设施施、无菌菌试验器器材以及及无菌操操作。4、无菌菌操作：是指在在无菌环环境条件件下，在在对无菌菌制品或或无菌器器械进行行检验的的过程中中，能防防止微生生物污染染与干扰扰的一种种

16、常规操操作方法法。5、培养养条件：用于促促进微生生物发育育、生长长和繁殖殖的生长长培养基基和培养养方式的的组合。6、需氧氧菌：在在代谢中中，有氧氧条件下下才能生生存的微微生物。7、厌氧氧菌：在在代谢中中，没有有氧的条条件下才才能生存存的微生生物。8、抑细细菌/抑霉菌菌试验：用选定定的微生生物来演演示某些些物质的的存在能能够抑制制这些微微生物的的繁殖。9、促生生长试验验：用于于证明生生长培养养基能够够支持微微生物生生长的技技术操作作。10、假假阴性：实际阳阳性的无无菌试验验结果被被变成了了阴性。11、假假阳性：实际阴阴性的无无菌试验验结果被被变成了了阳性。12、生生物指示示物：对对特定灭灭菌工艺

17、艺有确定定的抗力力，可供供使用的的微生物物检验器器材。13、化化学指示示物：根根据暴露露于某种种灭菌工工艺所产产生的化化学或物物理变化化，在一一个或多多个预定定工艺参参数上显显示变化化的指示示器材。14、无无菌保证证水平（SAL）:灭菌后后产品上上存在单单个活微微生物的的概率。参考资料料二：无菌室空空气中菌菌落数的的检查无菌室在在消毒处处理完毕毕后，应应检查空空气中的的菌落数数。方法法如下：取直径径约90mmm培养皿皿，无菌菌操作注注入融化化的营养养琼脂培培养基约约20mmL，在3035培养48小时证证明无菌菌后，取取3只培养养皿在无无菌室操操作台或或超净工工作台平平均位置置打开上上盖，暴暴露

18、30分钟后后盖好，置3035培养48小时后取出检查，3只双碟上生长的菌落数平均不得超过1个。无菌试验过程中应检查空气中的菌落数，方法同上。在试验开始进行时打开平皿盖，至试验结束盖好照上法培养，应符合上述要求。参考资料料三：供试品数数量的选选择检验数量量是指一一次试验验所用供供试品最最小包装装容器的的数量。除除另有规规定外，出出厂产品品按药典典附录B中表1规定；上市产产品监督督检验按按表2、表3规定。表表1、表2、表3中最少少检验数数量不包包括阳性性对照试试验的供供试品用用量。一一般情况况下，供供试品无无菌检查查若采用用薄膜过过滤法，应应增加1/2的最小小检验数数量作阳阳性对照照用；若若采用直直

19、接接种种法，应应增加供供试品1支（或或瓶）作作阳性对对照用。执执行GB/T1442333.2的供试试品数量量应满足足同一批批号311个单位位供试品品。检验量是是指一次次试验所所用的供供试品总总量（g或ml）。除除另有规规定外，每每份培养养基接种种的供试试品量按按表2、表3规定。若若每支（瓶瓶）供试试品的装装量按规规定足够够接种两两份培养养基，则则应分别别接种硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基和改良良马丁培培养基。采采用薄膜膜过滤法法时，检检验量应应不少于于直接接接种法的的总接种种量，只只要供试试品特性性允许，应应将所有有容器内内的全部部内容物物过滤。表1批出出厂产品品最少量量检验数数量供试品批产量N

20、N(个)每种培养养基最少少检验数数量注射剂大体积注注射剂(1000ml)1000100N5000500010%或或4个(取较多多者)10个2%或220个(取较少少者)2%或110个(取较少少者)眼用及其其他非注注射产品品200020005%或22个(取较多多者)10个桶装固体体原料44N5050每个容器器20%或或4个容器(取较多多者)2%或110个容器(取较多多者)医疗器具具101100100N5000 5000 10%或或4件（取取较多者者）10件2%或220件（取取较少者者）注:若每每个容器器中的装装量不足足接种两两种培养养基,那么表表中的检检验数量量应加倍倍表2 上上市抽验验样品(液体

21、制制剂)的最少少检验量量供试品量量V(ml)每支样品品接入每每管培养养基的最最少样品品量最少检验验数量(瓶或支支)11V55V2020VV5050VV100050VV1000(静脉给给药)100V5000V5000全量半量2ml5ml10mll半量半量500mml20101010101066每种培培养基各各接种10支供试试品.表3 上上市抽验验样品(固体制制剂)的最少少检验量量供试品装装量M(瓶或支支)每支样品品接入每每管培养养基的最最少样品品量最少检验验数量(瓶或支支)M500mg50mggM3000mg300mmgM5gM5gg一次性使使用含药药产品全量半量150mmg500mmg整个产品

22、品2010101010每种培培养基各各接种10支供试试品桶装固固体原料料的最少少检验数数量为4个包装装参考资料料四：培养基的的制备培养应注注意培养养条件：硫乙醇醇酸盐流流体培养养基 303514天；改改良马丁丁培养基 232814天。选选择培养养条件需需考虑的的因素：产品的的性质、制制造方法法、潜在在的微生生物污染染来源、可可能遇到到的微生生物种类类。硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基必必须在煮煮沸后，再再进行分分装、灭灭菌。1、硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基酪胨(胰胰酶水解解) 115.00g、酵母母浸出粉粉 5.0g、葡萄萄糖 5.0g、氯化化钠 2.5g、L-胱氨酸 0.5g、新配配制的0.11%刃

23、天青青溶液 1.0 mml、硫乙乙醇酸钠钠 0.5g(或硫乙乙醇酸 0.3mll)、琼脂 0.75gg、水 10000 ml除葡萄糖糖和刃天天青溶液液外，取取上述成成分混合合，微温温溶解，调调节 pHH为弱碱碱性，煮煮沸，滤滤清，加加入葡萄萄糖和刃刃天青溶溶液，摇摇匀，调调节 pHH值使灭灭菌后为为 7.10.2。分装装至适宜宜的容器器中，其其装量与与容器高高度的比比例应符符合培养养结束后后培养基基氧化层层（粉红红色）不不超过培培养基深深度的 1/2。灭菌菌。在供供试品接接种前，培培养基氧氧化层的的高度不不得超过过培养基基深度的的 1/5，否否则，须须经 1000水浴加加热至粉粉红色消消失（不

24、不超过 200分钟），迅迅速冷却却，只限限加热一一次，并并防止被被污染。硫乙醇酸酸盐流体体培养基基置 3035培养。2、改良良马丁培培养基胨 5.0g、磷酸酸氢二钾钾 1.0g、酵母母浸出粉粉 2.0g、硫酸酸镁 0.5g、葡萄糖 200.0gg、水 10000 ml除葡萄糖糖外，取取上述成成分混合合，微温温溶解，调调节pH值约为6.8，煮沸沸，加入入葡萄糖糖溶解后后，摇匀匀，滤清清，调节节pH值使灭灭菌后为为6.440.2，分装装，灭菌菌。改良马丁丁培养基基置 2328培养。3、选择择性培养养基按上述硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基或改良良马丁培培养基的的处方及及制法，在在培养基基灭菌或或使用前

25、前加入适适宜的中中和剂、灭灭活剂或或表面活活性剂，其其用量同同验证试试验。4、营养养肉汤培培养基胨 100.0gg、氯化化钠 5.0g、牛肉浸浸出粉 3.0g、水 10000 ml取上述成成分混合合，微温温溶解，调调节 pHH为弱碱性性，煮沸沸，滤清清，调节节pH值使灭灭菌后为为 7.20.2，分装装，灭菌菌。5、营养养琼脂培培养基按上述营营养肉汤汤培养基基的处方方及制法法，加入入14.0g琼脂，调调节pH值使使灭菌后后为7.220.2，分装装，灭菌菌。6、改良良马丁琼琼脂培养养基按改良马马丁培养养基的处处方及制制法，加加入14.0g琼琼脂，调调节pH值使灭灭菌后为为6.440.2，分装装，灭

26、菌菌。参考考资料五五：培养基的的适用性性检查1、无菌菌性检查查：每批批培养基基随机取取不少于于5支（瓶瓶），培培养14天，应应无菌生生长。2、灵敏敏度检查查菌种：培培养基灵灵敏度检检查所用用的菌株株传代次次数不得得超过5代（从从菌种保保存中心心获得的的冷冻干干燥菌种种为第0代），试试验用菌菌种应采采用适宜宜的菌种种保存技技术进行行保存，以以保证试试验菌株株的生物物学特性性。金黄色葡葡萄球菌菌(Sttaphhyloococccuss auureuus)CMCCC(BB) 226 0003铜绿假单单胞菌(Psseuddomoonass aeerugginoosa)CMCCC(BB) 110 110

27、4枯草芽孢孢杆菌（Baccilllus subbtillis）CMCCC（B）63 5011生孢梭菌菌(Cllosttriddiumm spporoogennes)CMCCC(BB) 664 9941白色念珠珠菌(CCanddidaa allbiccanss)CMCCC(FF) 998 0001黑曲霉(Aspperggilllus nigger)CMCCC(FF) 998 00033、菌液液制备接种金黄黄色葡萄萄球菌、铜铜绿假单单胞菌、枯枯草芽孢孢杆菌的的新鲜培培养物至至营养肉肉汤培养养基中或或营养琼琼脂培养养基上，接接种生孢孢梭菌的的新鲜培培养物至至硫乙醇醇酸盐流流体培养养基中，3035培养

28、18小时24小时；接种白白色念珠珠菌的新新鲜培养养物至改改良马丁丁培养基基中或改改良马丁丁琼脂培培养基上上，2328培养2448小时，上上述培养养物用0.9%无菌氯氯化钠溶溶液制成成每1mll含菌数数小于1000cfuu（菌落落形成单单位）的的菌悬液液。接种黑曲曲霉的新新鲜培养养物至改改良马丁丁琼脂斜斜面培养养基上，2328培养57天，加加入35ml含0.005（v/v）聚山山梨酯80的0.99%无菌氯氯化钠溶溶液，将将孢子洗洗脱。然然后，用用适宜的的方法吸吸出孢子子悬液至至无菌试试管内，用用含0.005（v/v）聚山山梨酯80的0.99%无菌氯氯化钠溶溶液制成成每1mll含孢子子数小于于10

29、00cfuu的孢子子悬液。菌悬液在在室温下下放置应应在2小时内内使用，若若保存在在28可在24小时内内使用。黑黑曲霉孢孢子悬液液可保存存在28，在验验证过的的贮存期期内使用用。4、培养养基接种种取每管装装量为12mml的硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基9支，分分别接种种小于1000cfuu的金黄黄色葡萄萄球菌、铜铜绿假单单胞菌、枯枯草芽孢孢杆菌、生生孢梭菌菌各2支，另1支不接接种作为为空白对对照，培培养3天；取取每管装装量为9ml的改良良马丁培培养基5支,分别接接种小于于1000cfuu的白色色念珠菌菌、黑曲曲霉各2支，另1支不接接种作为为空白对对照，培培养5天。逐逐日观察察结果。5、结果果判定空白

30、对照照管应无无菌生长长，若加加菌的培培养基管管均生长长良好，判判该培养养基的灵灵敏度检检查符合合规定。参考资料料六：方法验证证试验1、菌种种及菌液液制备除大肠埃埃希菌（Esccherrichhia colli）CMMCC(B) 4 441022外，金金黄色葡葡萄球菌菌、枯草草芽孢杆杆菌、生生孢梭菌菌、白色色念珠菌菌、黑曲曲霉同培培养基灵灵敏度检检查。大大肠埃希希菌的菌菌液制备备同金黄黄色葡萄萄球菌。2、薄膜膜过滤法法取每种培培养基规规定接种种的供试试品总量量按薄膜膜过滤法法过滤，冲冲洗，在在最后一一次的冲冲洗液中中加入小小于1000cfuu的试验验菌，过过滤。取取出滤膜膜接种至至硫乙醇醇酸盐流

31、流体培养养基或改改良马丁丁培养基基中，或或将培养养基加至至滤筒内内。另取取一装有有同体积积培养基基的容器器，加入入等量试试验菌，作作为对照照。置规规定温度度培养35天，各各试验菌菌同法操操作。3、直接接接种法法取符合直直接接种种法培养养基用量量要求的的硫乙醇醇酸盐流流体培养养基8管，分分别接入入小于1000cfuu的金黄色色葡萄球球菌、大大肠埃希希菌、枯枯草芽孢孢杆菌、生生孢梭菌菌各2管，取取符合直直接接种种法培养养基用量量要求的的改良马马丁培养养基4管，分分别接入入小于1000cfuu的白色色念珠菌菌、黑曲曲霉各2管。其其中1管接入入每支培培养基规规定量的的供试品品量，另另1管作为为对照，按

32、按置规定定的温度度培养35天。4、结果果判断与对照管管比较，如如含供试试品各容容器中的的试验菌菌均生长长良好，则则说明供供试品的的该检验验量在该该检验条条件下无无抑菌作作用或其其抑菌作作用可以以忽略不不计，照照此检查查方法和和检查条条件进行行供试品品的无菌菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。参考资料料七：供试品处处理及接接种培养养基直接接种种法：每每个供试试品按规规定量分分别接种种至各含含硫乙醇醇酸盐

33、流流体培养养基和改改良马丁丁培养基基的容器器中。除除另有规规定外，每每个容器器中培养养基的用用量应符符合接种种的供试试品体积积不得大大于培养养基体积积的10%，同时时，硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基每每管装量量不少于15mml，改良良马丁培培养基每每管装量量不少于10mml。薄膜过滤滤法：将将供试液液混匀，过过滤。如如供试品品具有抑抑菌作用用或含防防腐剂，须用适量的冲洗液冲洗滤膜，冲洗次数不得少于三次。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其剪成3等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培

34、养基的容器中，其中一份做阳性对照用。薄膜过滤滤法应优优先采用用封闭式式薄膜过过滤器，也也可使用用一般薄薄膜过滤滤器。无无菌检查查用的滤滤膜孔径径应不大大于0.445m。直径约约为50mmm。根据据供试品品及其溶溶剂的特特性选择择滤膜材材质。抗抗生素供供试品应应选择低低吸附的的滤器及及滤膜。滤滤器及滤滤膜使用用前应采采用适宜宜的方法法灭菌。使使用时，应应保证滤滤膜在过过滤前后后的完整整性。参考资料料八：对照试验验1、阳性性对照：一般情情况下，供供试品无无菌检查查若采用用薄膜过过滤法，应应增加1/2的最小小检验数数量作阳阳性对照照用；若若采用直直接接种种法，应应增加供供试品无无菌检查查时每个个培养

35、基基容器接接种的样样品量作作阳性对对照用。阳性对照照应根据据供试品品特性选选择阳性性对照菌菌：无抑抑菌作用用及抗革革兰阳性性菌为主主的供试试品，以以金黄色色葡萄球球菌为对对照菌；抗革兰兰阴性菌菌为主的的供试品品以大肠肠埃希菌菌为对照照菌；抗抗厌氧菌菌的供试试品，以以生孢梭梭菌为对对照菌；抗真菌菌的供试试品，以以白色念念珠菌为为对照菌菌。阳性性对照试试验的菌菌液制备备同方法法验证试试验，加加菌量小小于1000cfuu，供试试品用量量同供试试品无菌菌检查每每份培养养基接种种的样品品量。阳阳性对照照管培养养4872小时应应生长良良好。2、阴性性对照：供试品品无菌检检查时，应应取相应应溶剂和和稀释液液

36、、冲洗洗液同法法操作，作作为阴性性对照。阴阴性对照照不得有有菌生长长。3、稀释释液、冲冲洗液及及其制备备方法稀释液、冲冲洗液配配制后应应采用验验证合格格的灭菌菌程序灭灭菌。（1）00.1%蛋白胨胨水溶液液取蛋白白胨1.0g，加水10000mll，微温温溶解，滤滤清，调调节pH值至7.110.2，分装装，灭菌菌。（2）ppH7.0氯化化钠-蛋白胨胨缓冲液液取磷酸酸二氢钾钾3.556g，磷酸氢氢二钠7.223g，氯化化钠4.330g，蛋白白胨1.00g，加水10000mll，微温温溶解，滤滤清，分分装，灭灭菌。（3）根根据供试试品的特特性，可可选用其其他经验验证过的的适宜的的溶液作作为稀释释液、冲冲洗液。如需要，可可在上述述稀释液液或冲洗洗液的灭灭菌前或或灭菌后后加入表表面活性性剂或中中和剂等等。参考资料料九：参考标准准中中华人民民共和国国药典GBB/T1142333.22医用用输液、输输血、注注射器具具检验方方法第2部分生生物学试试验方法法GBB194489实验验室生物安安全通用用要求GBB503346生物物安全实实验室建建筑技术术规范GBB/T1162992162294医药药工业洁洁净室（区区）悬浮浮粒子、浮浮游菌和和沉降菌菌的测试试方法ISSO1117377-2医疗疗器械的的灭菌微生物物方法第2部分：灭菌过过程定义义、验证证和保持持中的无无菌检测测