输血前免疫血液学检查标准geou.docx
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1、输血前免免疫血液液学检查查广西自治治区人民民医院输输血科焦伟一、输血血前检查查的目的的和要求求输血前检检查的目目的是选选择与患患者血型型配合的的各种血血液成分分,使之能能在患者者体内有有效地存存活,无不良良反应,从而达达到安全全、有效效输血的的目的。二、输血血前检查查的内容容输血前检检查的内内容包括括如下几几个方面面:1.患者者的病史史和标本本等的检检查、核核对及处处理。2.受血血者、献献血者AABO和Rh血型型鉴定。3.不规规则抗体的的筛选和和鉴定。4.交叉叉配合试试验。5.血小小板输注注前的抗抗体检查查和配合合试验。6.交叉叉配血结结果的报报告和发发血。(一)受受血者的的病史和和标本等等检
2、查、核核对及处处理1. 病史资料料和信息息受血者的的有关资资料,包括受受血:者姓名名、年龄龄、性别别、床号号、种族族、临床床诊断、输输血史、药药物史、妊妊娠史,特别是是以往输输血反应应的记录录等等,有助于于解决有有可能出出现的血血清学问问题。2.标本本的要求求要求不超超过3天的期期限,反复输输血的受受血者更更应注意意抽取新新的标本本作配血血试验,避免因因回忆反反应而产产生的抗抗体漏检检。如果果患者使使用肝素素治疗,则应用用鱼精蛋蛋白,使标本本凝结。如如果患者者使用右右旋糖酐酐等治疗疗,应注意意将红细细胞作洗洗涤。(二)受受血者和和供血者者ABOO和Rh定型型1.ABBO定型型最适的的反应温温度
3、为44,但在室室温反应应良好,所以常常规的ABBO定型型试验仅仅在室温温进行。(1)定定型方法法:正、反反定型的的试管离离心方法法目前仍仍被认为为是最可可信赖的的ABOO定型方方法。1)定型型试剂:有些ABBO血型型诊断试试剂是以以人的血血清汇聚聚而制成成的,但必须具具备以下下条件:第一,高效价价(1:1288)的IgMM抗A或抗B。第二二,具较好好的亲和和性并不不含冷凝凝集素。第第三,必需具具有检测测A2,A2BB血型的的能力。第第四,血清必必须通过过HIV,HCV,HBVV等检查查或经病病毒灭活活。另外外一些ABO定型试试剂是由由来自培培养细胞胞株的单单克隆抗抗体所制制成。2)ABBO亚型
4、型的鉴定定:ABOO亚型的的鉴定通通常使用用下列试试剂:抗A、抗B、抗A1、抗抗H、抗AIIA1红红细胞、A2红细胞、B型红细胞和O型红细胞。有些工作者在定型试验中,常规地选择应用抗AB抗血清,以避免错误地把弱反应性A或B型红细胞分类为O型。一般抗AB试剂对Ax型红细胞可增加凝集反应的强度。(2)AABO定定型试验验中的常常见问题题:造成这这种正反反定型不不一致的的原因主主要有:1)技术术和管理理错误:这是ABBO定型型中产生生异常结结果的主主要原因因,包括:标本或试试剂搞错错;器材不不洁;试剂污污染或失失效;离心过过度或不不足;阳性反反应产生生溶血现现象未能能识别;漏加试试剂;结果记记录或判
5、判断错误误;细胞与与血清间间比例不不适当。2)血清清异常:血清蛋蛋白引起起缗钱状形形成,影响反反定型结结果。3)红细细胞致敏敏:受免疫疫球蛋白白致敏的的红细胞胞,在含高高蛋白介介质的试试剂中,可发生生凝集。4)异常常基因型型:ABOO亚型的的检查中中,A、B抗原可可能为弱弱抗原,难以检检出。5)近期期输血:试验前前曾输入入过其它它ABOO血型不不一致的的血液,使血液液标本成成为混合合血型的的红细胞胞悬液,定型时时显示“混合外外观凝集集”现象。6)嵌合合体血型型:这种血血型者体体内有两两类血型型红细胞胞群体,定型时时可以出出现“混合外观观凝集”现象。7)疾病病因素导导致抗原原减弱:某些白白血病患
6、患者和难难治性贫贫血患者者中,ABOO血型系系统的抗抗原性可可受到抑抑制,检出困难难。8)红细细胞多凝凝集现象象:红细胞胞因遗传传或获得得性的表表面异常常,发生多多凝集现现象。9)获得得性B:由于革革兰阴性性杆菌的的作用,红细胞胞可获得得“类B”的活性性。10)血血型特异异性物质质过高:一些卵卵巢囊肿肿病例,血型物物质的浓浓度很高高,可中和和抗A和抗B定型试试剂,要得到到正确的的正定型型结果,必须洗洗涤红细细胞多次次。11)近近期内进进行大量量的血浆浆置换治治疗:由于使使用大量量的非同同型的血血浆作置置换治疗疗,标本血清清中含有有所输供供体提供供的抗AA或抗B抗体,造成反反定型错错误。12)异
7、异常的血血浆蛋白白:受检者者血浆中中异常的的白蛋白白、球蛋蛋白比例例和高浓浓度的纤纤维蛋白白原等导导致缗钱状形形成,造成假假凝集现现象。13)不不规则抗抗体的存存在:受检者者血浆中中,含有ABBO血型型抗体以以外的不不规则抗抗体,与试剂剂红细胞胞上其他他血型抗抗原系统统的抗原原起反应应。14)低低丙种球球蛋白血血症:低丙种种球蛋白白血症(丙种球球蛋白量量减低)病例,可能会会因免疫疫球蛋白白水平下下降而使使血清定定型时不不凝集或或弱凝集集反应。15)药药物等因因素:药物、右右旋糖醉醉及静脉脉注射某某些造影影剂可引引起红细细胞凝集集或类似似凝集。16)年年龄因素素:免疫系系统尚未未健全的的婴儿、由
8、由母亲被被动获得得抗体的的婴儿,或抗体体水平下下降的老老人,试验时时可出现现异常的的结果。17)防防腐剂因因素:患者体体内可能能含有对对防腐剂剂中的成成分或对对混悬介介质的抗抗体,导致ABBO定型型差错。2. Rh(DD)定型型和定型型试验中中应注意意的问题题Rh定型型主要鉴鉴定D抗原(IgGG抗D和IgMM抗D)。(1)导导致Rhh血型鉴鉴定可能能出现假假阳性的的原因:1)受检检细胞已已被免疫疫球蛋白白致敏,或标本本血清中中含有引引起红细细胞凝集集的因子子。2)受检检细胞与与抗血清清孵育的的时间过过长,含高蛋蛋白的定定型试剂剂会引起起缗钱状状形成。3)标本本抗凝不不当,受检过过程中出出现凝血
9、血或小的的纤维蛋蛋白凝块块,误判为为阳性。4)定型型血清中中含有事事先未被被检测的的其它特特异性抗抗体,造成假假阳性定定型结果果。5)多凝凝集细胞胞造成定定型的假假阳性。6)鉴定定用器材材或抗血血清被污污染,造成假假阳性。(2)可可能出现现假阴性性的原因因1)受检检细胞悬悬液浓度度太高,与抗血血清比例例失调。2)漏加加或错加加定型血血清。3)定型型血清的的使用方方法错误误,没有按按说明书书进行。4)离心心后重悬悬细胞扣扣时,摇动用用力过度度,摇散微微弱的凝凝集。5)抗血血清保存存不当,导致失失效。(3)弱弱D型(Du型)血型及及其鉴定定:Du型抗抗原是RRhO(D)的弱抗抗原,这种抗抗原通常常
10、与大部部分盐水水抗D试剂不不产生直直接凝集集反应,而与部部分的IIgG抗抗D血型用用间接抗抗球蛋白白试验反反应阳性性。因此此当我们们初次得得到Rhh阴性结结果时,必须进进行作RRh阴性性确认试试验,即用三种种不同批批号的IIgG抗抗D定型,如果全全部阴性性方可认认为该被被检者为为Rh阴性性,否则,只要有有一批为为阳性,则可认认为是DDu型。3. 弱D型(Du型)的临床床意义尽管Duu比正常常D阳性细细胞抗原原弱,但输给给Rh阴性性的受血血者后,自然有有免疫产产生抗DD的可能能。同时时若接受受Rh阳性性的细胞胞后,Du型人也也有可能能产生抗抗D抗体。因因此,作为供供血者,Du型归类类为Rhh阳性
11、,作为受受血者DDu型者归归类为RRh阴性性者。(三)不不规则抗抗体筛选选和鉴定定1.目的的和原则则对受血者者的血清清和血浆浆,应作常常规的抗抗体筛选选试验,以发现现有临床床意义的的不规则则抗体,所谓不不规则抗抗体是指指抗A和抗B以外的的血型抗抗体。抗体筛选选试验可可在交叉叉配合试试验之前前进行或或一起进进行,这样有有利于对对患者抗抗体的早早期确认认及鉴定定临床上上具有意意义的抗抗体,避免一一些可能能的情况况而造成成病情的的延误。抗体筛选选试验的的原则是是让受检检的血清清与已知知血型的的试剂红红细胞即即筛选红红细胞起起反应,以发现现在377中有反反应的抗抗体。2.抗体体筛选和和鉴定技技术抗体筛
12、选选试验用用的试剂剂筛选红红细胞,通常是是2或3个人份份的O型红细细胞成为为一套试试剂,每套试试剂筛选选红细胞胞中至少少有以下下常见的的抗原:D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Le、Fya、Fyb、Jka、Jkb,条件不不足的实实验室不不一定具具备Luua、V、Cw、Kpa、Jsa类的抗抗原。抗体筛选选试验不不一定能能检出所所有临床床意义的的抗体,一些抗抗低频率率抗原的的抗体或或有剂量量效应的的抗体,可能被被漏检。这这时需安安排抗原原性更完完全和特特异性更更强的筛筛选细胞胞做试验验,或用敏敏感度更更高的技技术做检检查。一旦抗体体被检出出,应作抗抗体鉴定定试验,以确
13、定定其特异异性。抗抗体鉴定定实验包包含以下下主要内内容:(1)自自身细胞胞检查:观察患者(受者)的血清清与患者者(受者)自身细细胞的反反应情况况,确定血血清内是是否有自自身抗体体或自身身抗体和和同种抗抗体二者者同时存存在。(2)使使用试剂剂细胞中中的谱细细胞,应用各种种抗体检检查技术术,检测患患者的血血清,确定其其抗体的的特异性性。试剂谱细细胞一般般是由88-166个人的的已知血血型的OO型红细细胞配套套组成,具有各各种不同同的抗原原成分,根据谱谱细胞的的反应格格局一般般可以鉴鉴定常见见的抗体体。选择择不同的的谱细胞胞,可以鉴鉴定不同同特异性性的抗体体(3)当当患者体体内的同同种抗体体有二种种
14、或二种种以上时时,可采用用吸收放放散试验验。作抗体鉴鉴定时,必须灵灵活应用用盐水试试验法、白白蛋白介介质法、酶酶技术、抗抗球蛋白白试验、低离子强度介质法(Liss)、聚凝胺(Polybrene)法及凝胶法等各种技术,再结合吸收、放散等血清学手段,对抗体的特异性作分析。(4)要要对谱细细胞的反反应结果果有正确确的解释释,必须首首先对一一些特异异性抗体体的血清清学特性性进行了了解,再分析析反应结结果。确确定抗体体特异性性时可以以综合运运用以下下的资料料:1)观察察受检血血清与每每个试剂剂谱细胞胞的反应应结果。2)观察察受检血血清与其其自身细细胞的反反应结果果。3)观察察受检血血清与酶酶处理细细胞的
15、反反应结果果。4)观察察反应的的格局,检查各各个反应应相的结结果,包括不不同的温温度、悬悬浮介质质或酶作作用的情情况,一些抗抗体的特特异性与与反应介介质直接接相关。5)有否否溶血现现象。6)在阳阳性反应应的细胞胞中,反应强强度有否否不同,是否出出现剂量量效应。7)对自自身红细细胞上的的抗原详详细检查查,从所缺缺少的抗抗原情况况,提示是是否存在在相应的的抗体。(四)具具有自身身抗体的的患者血血清学检检查患者血清清中存在在的不规规则抗体体可分为为两类:一类是是同种抗抗体,另另一类是是自身抗抗体。自自身抗体体又可分分为冷自自身抗体体和温自自身抗体体两类。1、患者者血清中中存在自自身抗体体的几种种情况
16、及及其对血血清学试试验的影影响11 冷自身身抗体冷自身抗抗体是较较常见的的一种自自身抗体体,通常常是IggM型的的抗体,能能在盐水水介质中中和自身身红细胞胞反应。理理论上讲讲凡是337与自身身红细胞胞不反应应,而只只有在低低于377环境下下才能和和自身红红细胞反反应的抗抗体均可可称为冷冷自身抗抗体。实实际上,冷冷自身抗抗体大多多数只能能在很低低的温度度下(例如4)与自身身细胞反反应。因因此,尽尽管大多多数人的的血清中中都存在在冷自身身抗体,但但在体内内温度下下,不会会和自身身细胞发发生反应应,也不不会造成成任何不不良影响响。在罕见的的病理情情况下,患患者的血血清中存存在极高高效价的的冷自身身抗
17、体,而而且,在在相对较较高的温温度下(例如室室温)也能和和自身细细胞反应应,这种种情况会会对患者者血样的的定型和和相关血血清学检检查造成成很大影影响,有有时也对对输血造造成一定定的影响响。1.2 温自身身抗体温自身抗抗体是指指在377条件下下能和自自身红细细胞反应应的抗体体。当患患者血清清中含有有温自身身抗体时时,患者者一般均均有些贫贫血或溶溶血症状状。温自自身抗体体可分为为两类:大多数数情况下下为lgG类温温自身抗抗体,极极少数情情况下也也会存在在IgMM性质的的温自身身抗体。患者血清清里存在在温自身身抗体,实实际上将将难以获获得在血血清学上上相配合合的输血血。但这这种情况况特别要要当心,因
18、因为自身身抗体可可能掩盖盖同种抗抗体的存存在,而而同种抗抗体造成成的输血血反应很很可能是是致命的的。因此此,倘若时时间容许许,在输输血前应应排除自自身抗体体的影响响,确定定是否存存在同种种抗体。2、自身身抗体的的处理和和相关血血清学检检查2.1 冷自身身抗体的的血清学学检查当怀疑患患者血清清中存在在冷自身身抗体时时,可进进行下列列必要的的检查:(1)如如果患者者血清中中的抗体体在室温温(222左右)条件下下和任何何红细胞胞都不发发生反应应,则可可以认为为该抗体体无临床意意义,不不需要做做进一步步的检测测。(2)如如果患者者血清在在室温下下和自身身红细胞胞反应,首首先应确确认抗体体的冷反反应性抗
19、抗体特性性可将被被自身血血清凝集集的红细细胞分别别置于337水浴和和4冰箱中中,当凝凝集在337完全散散开而在在4明显增增强时,可可以认为为该抗体体是冷反反应性抗抗体。(3)排排除同种种抗体,因因为自身身抗体可可以掩盖盖具有临临床意义义的同种种抗体,因因此有必必要确认认血清中中是否存存在与自自身细胞胞不反应应的同种种抗体。确确认的方方法是用用自身红红细胞在在4进行吸吸收试验验。(4)在在患者近近期曾输输过血或或没有足足够的红红细胞等等情况下下,冷自自身抗体体吸收试试验难以以进行,此此时可以以在严格格的377条件下下,以抗抗球蛋白白试验方方法进行行同种抗抗体筛选选和鉴定定试验。2.2 温自自身抗
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