高二生物选修三2.2动物细胞工程知识点.doc

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1、高二生物选修三2.2动物细胞工程知识点动物细胞工程 动物细胞工程常用技术：动物细胞培养 细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体的制备 其中动物细胞的培养，是动物细胞工程的基础， 也即动物细胞培养是细胞核移植，动物细胞培养，单克隆抗体的制备的基础。动物细胞培养 1.概念：就是从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2.原理：细胞增殖 3.动物细胞培养过程 动物组织块 剪碎组织 用胰蛋白酶处理 分散成单个细胞 制成细胞悬液 原代培养 原代培养 4.细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，（单层）要求：培养瓶（皿）内表面光滑无毒易于贴附。接触

2、抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。原代培养：动物组织消化后的初次培养称为原代培养。特点：10代以内，能保持正常的二倍体核型。目前使用或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。传代培养：原代培养接触抑制时用胰蛋白酶处理后的分瓶培养称之为传代培养。细胞株：10-50代，遗传物质没有发生改变 细胞系：50代后，遗传物质发生改变 5.细胞培养条件 （1）无菌，无毒 无菌：添加抗生素 无毒:定期更换培养，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。（2）营养

3、糖，促生长因子，无机盐，氨基酸，血清，血浆，微量元素 加入血清，血浆的目的：血清，血浆可以补充培养基中缺乏的物质。（3）温度，pH 温度：36.5+0.5 pH：7.2-74 （4）气体环境 95空气加5CO2 O2是细胞代谢所必须的 CO2主要作用是维持培养液pH 6.动物细胞培养与植物组织培养的培养基相比其特点是：动物细胞培养：液体培养基，含有血清和血浆 植物细胞培养：固体培养基，含有植物激素 动物细胞核移植技术与克隆动物 1.概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成新的个体。核移植的方法得到的动物称为克隆动物

4、 原理：动物细胞核具有全能性 2.核移植分类 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性不容易 3.体细胞核移植过程 （1）供体细胞：10代以内细胞：原因：10代以内细胞一般能保持正常的二倍体核型 （2）受体细胞：减数第二次分裂中期去核卵母细胞 卵母细胞作为受体细胞的原因：体积大，易操作 含有激发细胞核全能性的物质 去核的原因：使后代的性状主要由供体细胞核决定 去核的方法：显微操作 （3）激活细胞的方法：电脉冲，钙离子载体，乙醇，蛋白酶合成抑制剂 （4）获得克隆动物与供核动物性状不完全相同的原因：可能发生基因突变 性状是由基因和环境共同作用的结果

5、克隆动物大部分DNA来自供体细胞的细胞核，但其核外线粒体中DNA来自受体细胞 动物细胞融合 1.动物细胞融合：是两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程，也称细胞杂交。杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。动物细胞融合的原理：细胞膜的流动性 2.动物细胞融合诱导方法 （1）物理法：离心，振动，电激 （2）化学法：聚乙二醇(PEG) （3）生物法：灭活的病毒(动物细胞融合特有的方法) 3.注意 （1）细胞融合的过程包括细胞膜的融合、细胞质融合和细胞核融合。（2）在细胞膜融合中体现出细胞膜具有流动性。（3）其中细胞膜的融合是细胞融合的先导，没有细胞膜的融合就不会

6、有细胞质和细胞得到融合。(4)动物细胞融合的实质及结束的标志都是细胞核的融合。4.优点与应用 (1)优点;突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。应用 (1)细胞融合技术是研究细胞遗传，细胞免疫，肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。单克隆抗体 1.传统抗体的获得：(1)方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体；从动物血清中分离所需抗体。(2)缺陷：产量低、纯度低、特异性差。2.比较制备单克隆抗体中的几种细胞：B淋巴细胞：能产生单一抗体，但不能无限增殖 骨髓瘤细胞：能无限增殖，但不能产生抗体 杂交瘤细胞：既能产生专

7、一抗体，又能无限增殖 3.制备单克隆抗体需要的技术手段：动物细胞融合和动物细胞培养 原理：细胞膜的流动性和细胞增殖 4.单克隆抗体的制备 （1）免疫处理：提供B淋巴细胞的动物必须先经过免疫处理，否则不会产生特异性抗体。（2）诱导融合的方法：物理法：离心，振动，离心 化学法：聚乙二醇(PEG) 生物法：灭活的病毒(动物细胞融合特有的方法) 5.仅考虑两两融合的情况，形成的杂交细胞有三种 B淋巴细胞和B淋巴细胞融合的细胞 骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合的细胞 杂交瘤细胞 6.杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生某种特异性抗体 7.两次筛选的目的：第一次筛选的目的：筛选出杂交瘤细胞 第二次筛选的目的：筛选出产生特定抗体杂交瘤细胞 8.获取单克隆抗体的场所 (1)若在培养基中进行杂交瘤细胞培养，则培养液中提取 (2)若在小鼠和其他动物的腹腔中进行培养，则从腹水中提取。腹腔培养：易于控制培养条件，成本低，但规模小，产量低 体外培养：规模大，产量高，但不易于控制培养条件，成本相对较高 9.杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体 单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏性高，可大量制备 10.单克隆抗体的应用：(1)作为诊断试剂 (2)用于治疗疾病和运载药物 第 4 页 共 4 页