特定蛋白的检测方法与质量控制ppt课件.pptx

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1、特定蛋白的检测方法特定蛋白的检测方法与质量控制与质量控制 重庆市涪陵中心医院重庆市涪陵中心医院 涂涂伟伟2022/12/312022/12/31几个有关蛋白数字：几个有关蛋白数字：200050020050概述概述特定蛋白特定蛋白：白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、C反应蛋白、AAT、AAG、铜蓝蛋白、视黄醇结合蛋白、纤维蛋白、巨球蛋白、免疫球蛋白、补体、脂蛋白因为这些蛋白都具有”某一特定抗原性”,多采用免疫方法对血液、尿液、脑脊液等标本进行检测,故专称这些蛋白统称为”特定蛋白特定蛋白”。分类u免疫球蛋白及补体系列u风湿及类风湿系列u尿微量蛋白系列u急性炎症蛋白u营养状态u神经系统疾病检测u血液病疾病

2、检测u心脑血管疾病u肾功能监测尿微量白蛋白(MA)尿转铁蛋白(TRU)尿免疫球蛋白(IgU)1-微球蛋白(1-M)2-微球蛋白(2-M)痕迹蛋白(Cystatin C)心血管疾病风险评估载脂蛋白A-1(apoA-1)载脂蛋白B(apoB)脂蛋白(a)(Lp(a)超敏CRP神经系统疾病白蛋白(ALB)2-巨球蛋白(AMG)免疫球蛋白A(IgA,脑脊液)免疫球蛋白G(IgG,脑脊液)免疫球蛋白M(IgM,脑脊液)免疫功能监测免疫球蛋白A(IGA)免疫球蛋白E(IGE)免疫球蛋白G(IGG)免疫球蛋白M(IGM)IgG14亚型补体C3(C3)补体C4(C4)轻链(KAP)轻链(LAM)Free 轻链

3、Free 轻链类风湿类关节炎类风湿因子(RF)抗链球菌溶血素O(ASO)C-反应蛋白(CRP)检测项目人体示意图不同检测方法检测范围常量检测微量检测痕量检测检测方法胶乳法免疫比浊法检测方法发展历程出现年代出现年代技术名称技术名称特点特点1897年经典免疫沉淀技术灵敏度低繁琐费时自动化程度低1959年放射免疫分析技术灵敏度高成本较低不易自动化有放射性污染1970年酶免疫分析技术特异性强影响因素多不易自动化无放射性污染1970年发光免疫分析技术灵敏度最高线形范围广过程复杂,耗时长成本较高易于自动化无放射性污染1959年年1967年年1977年年免疫比浊法免疫比浊法 1 终点透射法终点透射法 2 终

4、点散射法终点散射法 3 速率散射法速率散射法*灵敏度高灵敏度高稳定快速稳定快速线形范围宽线形范围宽成本较低成本较低易于自动化易于自动化无放射形污染无放射形污染 定性 定量 专业化 半定量 透射免疫比浊透射免疫比浊法法原理原理抗原与抗体在一定缓冲液中形成抗原与抗体在一定缓冲液中形成ICIC，当光线透过反应溶液时，由，当光线透过反应溶液时，由于溶液内于溶液内ICIC粒子对光线的反射和粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，吸收，引起透射光减少，ICIC越多越多透射光越少，可用吸光度表示。透射光越少，可用吸光度表示。透射比浊法测定遵循的原理Lambert-Beer定律（朗伯-比尔定律）检测器检测器光

5、源光源 透镜透镜 滤光片滤光片平光线平光线透射光透射光透射免疫比浊法透射免疫比浊法IC足够大(35-100nm)IC足够多控制温度和时间使用增敏剂保证抗体效价标准曲线定量反应要求透射免疫比浊法灵敏度较低灵敏度较低。要求抗原抗体复合物分子应足够大、足够多，分子太小则入射光直接通过。直线光路，灵敏度有缺陷。透射比浊是依据透射光减弱的原理来定量的，因此只能测定抗原抗体反应的第二阶段，检测仍需抗原抗体温育反应时间，检测时间较长。缺陷缺陷散射免疫比浊法散射免疫比浊法 抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关。原理原理单色器散射散射比浊计比浊计散射光散射光

6、Rayleigh定律（瑞利散射定律）粒子尺度远小于入射光波长时（小于波长的十分之一），其各方向上的散射光强度是不一样的，该强度与入射光的波长四次方成反比，这种现象称为瑞利散射。散射比浊法测定遵循的原理散射免疫比浊法散射免疫比浊法终点散射比浊分析速率散射比浊分析终点终点(定时定时)散射法散射法速率散射法速率散射法测试时间抗原抗体反应达到平衡抗原抗体反应开始到反应速率最大测试内容测定复合物总量变化测定复合物形成速率测定过程在反应开始后测定两次(7.5秒和6分钟或倍数)散射信号，将差值作为计算抗原标准在反应开始后90秒内,每5秒钟进行200次读数,通过18个循环共3600次读数，检测到反应的最大速率

7、峰，从而计算抗原浓度速率法检测:反应最大速率-反应速率蜂出现136002速度慢速度慢(几分钟几分钟)关注两点关注两点,易受易受 干扰干扰,结果重复性差结果重复性差两次读数两次读数,对仪器硬件要求一般对仪器硬件要求一般速度快速度快(几十秒几十秒)关注过程关注过程,动态分析抗干扰动态分析抗干扰,结果重复性好结果重复性好3600次读数次读数,对仪器硬件要求较高对仪器硬件要求较高应用特点抗原抗体结合速率抗原抗体结合量终点散射法与速率散射法透射比浊法透射比浊法散射比浊法散射比浊法测定内容测定内容透射光强度散射光强度测定原理测定原理Lambert-Beer定律Rayleigh定律应用特点应用特点常用于生化

8、系统,主要由于精度不够:复合物的分子应够大，太小则阻挡不了光线的通过复合物的数量应够多，太少则对溶液浊度变化影响太小常用于特定蛋白的测定灵敏度高重复性好测定范围宽透射比浊法与散射比浊法特定蛋白检测的实验室影响因素特定蛋白检测的实验室影响因素及质量控制及质量控制基本等同常规的实验检测项目分析前质量控制类似了解实验室可以开展的检验项目熟悉检验项目的方法学特性，如不准确度等通知病人进行适当的准备避免药物干扰因素适当的采集时间适当的采集量及时送检对不合格标本及时进行处理，尤其是脂血标本的影响适当的采集顺序对抗凝标本进行及时和适当的摇匀及时离心避免剧烈震荡造成溶血分析前的质量控制分析前的质量控制分析中的质量控分析中的质量控制制检验结果的溯源性溯源性：仪器生产厂家沿用国际认可的标准品CRM-470IFCCCAP1989年AbbottBeckmanBehring厂商欧洲共同体参考局（BCR）认可1992年各重要厂商将其作为第一标准，提高不同参加的可比性，避免标值化不一带来的差异。钩状效应（HOOK现象）会导致假阴性假阴性抗原过量检测技术抗原过量检测技术保证特定蛋白分析系统的稳定性稳定性仪器、试剂、校准品、质控品分析后的质量控制分析后的质量控制临床反馈意见收集，相互沟通，持续改进临床应用的评估，与相关疾病的相关性检测结果的影响因素