《基因工程的基本操作程序》课件ppt.ppt
《《基因工程的基本操作程序》课件ppt.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《《基因工程的基本操作程序》课件ppt.ppt(49页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益1.2 1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤基因工程基本操作的四个步骤1 1、目的基因的获取、目的基因的获取2 2、基因表达载体的构建、基因表达载体的构建3 3、将目的基因导入受体细胞、将目的基因导入受体细胞4 4、目的基因的检测与鉴定、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取一、目的基因的获取(一一)、目的基因主要是、目的基因主要是_编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因请举出三个以上的例子请举出三个以上的例子(二)、获取目的基因的常用
2、方法有哪些(二)、获取目的基因的常用方法有哪些?1 1、从基因文库中获取、从基因文库中获取2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增技术扩增3 3、人工合成、人工合成请阅读请阅读P9P9第一和二两段第一和二两段为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益限制酶限制酶基因组基因组DNADNA基因重组基因重组转化细菌转化细菌体外包装体外包装1)1)基因组文库基因组文库(Genomic library)(Genomic library)是指将某种生物体的是指将某种生物体的全部基因组全部基因组DNADNA用限制性内切酶或机械力量用限制
3、性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的切割成一定长度范围的DNADNA片段,片段,再与合适的载体在体外重组后,再与合适的载体在体外重组后,导入受体菌的群体中储存,这个导入受体菌的群体中储存,这个群体就称为该生物基因组文库。群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。保存某种生物的全部基因。一、目的基因的获取一、目的基因的获取(一)从基因文库中直接获取(一)从基因文库中直接获取1.1.基因文库基因文库为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益一、目的基因的获取
4、一、目的基因的获取(一)从基因文库中直接获取(一)从基因文库中直接获取1.1.基因文库基因文库cDNA(cDNA(互补互补DNA)DNA):是由生物的某一特定器官或是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的特定发育时期细胞内的mRNAmRNA经体外反转录后形成的互补经体外反转录后形成的互补DNADNA片段,与载体连接后储片段,与载体连接后储存在一个受体菌群中,这个存在一个受体菌群中,这个受体菌群就叫做这种生物的受体菌群就叫做这种生物的cDNAcDNA文库文库 2)cDNA2)cDNA文库文库(cDNA library(cDNA library)基因重组基因重组反转录酶反转录酶mRNAmRNA
5、cDNAcDNA为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益一、目的基因的获取一、目的基因的获取(一)从基因文库中直接获取(一)从基因文库中直接获取按照外源按照外源DNADNA片段的来源:片段的来源:u从特定组织提取的染色体从特定组织提取的染色体基因组基因组DNADNA -基因组基因组DNADNA文库(总)文库(总)umRNAmRNA反转录成的反转录成的cDNAcDNA拷贝拷贝-cDNAcDNA文库(部分)文库(部分)基因文库的目的基因文库的目的为了在不知目的基因序列的情况下,便于获得所需的目的基因。为了在不知目的基因序列
6、的情况下,便于获得所需的目的基因。基因文库的分类基因文库的分类为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益2.2.基因文库的构建方法基因文库的构建方法:直接分离法直接分离法供体细胞中的供体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状导入导入外源外源DNADNA扩增扩增目的基因目的基因分离分离(鸟枪法鸟枪法)一、目的基因的获取一、目的基因的获取(一)从基因文库中直接获取(一)从基因文库中直接获取多用于原核生物多用于原核生物为了规范事业单位聘用关系,建立和完善
7、适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益逆转录法逆转录法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA目的基因目的基因化学合成法化学合成法肽链氨基酸序列肽链氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因合成合成逆转录逆转录2.2.基因文库的构建方法基因文库的构建方法一、目的基因的获取一、目的基因的获取(一)从基因文库中直接获取(一)从基因文库中直接获取人工合成法(人工合成法(真核生物真核生物)推测推测推测推测单链单链DNADNA合成合成基因组文库的构建基因组文库的构建(2 2).基因文库的构建方法基因文库的构建方法通过对
8、受通过对受体菌的培体菌的培养而储存养而储存基因基因 cDNA文库的构文库的构建建-反转录法:反转录法:以目的基因转以目的基因转录成的信使录成的信使RNARNA为模为模板,反转录成互补板,反转录成互补的单链的单链DNADNA,然后在,然后在酶的作用下合成双酶的作用下合成双链链DNADNA,从而获得所,从而获得所需的基因。需的基因。目的基因的目的基因的mRNAmRNA单链单链DNADNA反转录酶反转录酶DNADNA聚合酶聚合酶双链双链DNADNA(目的基因目的基因)基因组文库和部分基因组文库基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库文库)比较比较怎样从基因文库中得怎样从基因文库中得到我们所需的目的基
9、到我们所需的目的基因呢因呢?依据:目的基因的有关信息。依据:目的基因的有关信息。如:根据基因的核苷酸序列如:根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色体上的位置基因在染色体上的位置 基因的转录产物基因的转录产物mRNAmRNA 基因翻译产物蛋白质等特性基因翻译产物蛋白质等特性从基因文库中得到目的基因的方法从基因文库中得到目的基因的方法2 2、利用、利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 概念概念:PCRPCR全称为全称为_,是一项,是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术的核酸合成技术 条件:条件:_、_ _、_ _、_._.等等原理:原理:_方式:以方式:以_方式
10、扩增,即方式扩增,即_(n n为扩增循为扩增循 环的次数)环的次数)结果:结果:多聚酶链式反应多聚酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2n n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增要有一段已知目的基因的核苷酸序列(前提条件)要有一段已知目的基因的核苷酸序列(前提条件)过程:过程:a a、DNADNA变性变性(90-9590-95):双链):双链DNADNA模板模板 在热作用下,在热作用下,_断裂,形成断裂,形成_b b、退火、退火(复性复性55
11、-6055-60):系统温度降低,引):系统温度降低,引 物与物与DNADNA模板结合,形成局部模板结合,形成局部_。c c、延伸、延伸(70-7570-75):在):在TaqTaq酶的作用下,酶的作用下,合成与模板互补的合成与模板互补的_。氢键氢键单链单链DNADNA双链双链DNADNA链链为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益3、人工合成法:、人工合成法:基因较小,核苷酸序列已知,可以基因较小,核苷酸序列已知,可以利用利用DNA合成仪人工合成合成仪人工合成为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体
12、制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益1 1、原核细胞的基因结构、原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子启动子:启动子:位于基因的首端的一段特殊的位于基因的首端的一段特殊的DNADNA片断,片断,它是它是RNARNA聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱聚合酶识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出动基因转录出mRNAmRNA,最终获得蛋白质,最终获得蛋白质终止子:终止子:位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNADNA片断
13、,片断,能终止能终止mRNAmRNA的转录的转录为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益1 1、原核细胞的基因结构、原核细胞的基因结构非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子RNARNA聚合酶聚合酶:能够识别启动子上结合位点的一种能够识别启动子上结合位点的一种蛋白质蛋白质.为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益 RNA RNA聚
14、合酶能够识别调控序列中的结合位点,聚合酶能够识别调控序列中的结合位点,并与其结合。并与其结合。转录开始后,转录开始后,RNARNA聚合酶沿聚合酶沿DNADNA分子移动,并分子移动,并以以DNADNA分子的一条链为模板合成分子的一条链为模板合成RNARNA。转录完毕后,转录完毕后,RNARNA链释放出来,紧接着链释放出来,紧接着RNARNA聚聚合酶也从合酶也从DNADNA模板链上脱落下来。模板链上脱落下来。为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益不能转录为信使不能转录为信使RNARNA,不能,不能 编码蛋白质。编码蛋白质
15、。:能转录相应的信使:能转录相应的信使RNARNA,能,能 编码蛋白质编码蛋白质 编码区编码区非编码区非编码区原核原核细胞细胞的的 基因基因结构结构有调控遗传信息表达的核有调控遗传信息表达的核 苷酸序列苷酸序列.包括启动子和终止子包括启动子和终止子非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 启动子启动子终止子终止子为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益2 2、真核细胞的基因结构、真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 基因工程的基本操作程序 基因工程 基本 操作 程序 课件 ppt
限制150内