纸色谱法.ppt

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1、纸色谱法分离氨基酸纸色谱法分离氨基酸化学与材料科学学院化学与材料科学学院实验教学中心实验教学中心 1 1、掌握纸色谱法分离物质的原理和操作、掌握纸色谱法分离物质的原理和操作技术；技术；2 2、学习如何根据不同组分的分离结果来、学习如何根据不同组分的分离结果来鉴别未知试样的组分。鉴别未知试样的组分。实验目的实验目的实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 定义：定义：纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不纸色谱分离法又称纸层析法，是根据不同物质在两相中的同物质在两相中的分配比分配比不同而进行分离不同而进行分离的一种微量分离方法。的一种微量分离方法。

2、实验原理实验原理载体载体层析纸（滤纸）；层析纸（滤纸）；固定相固定相滤纸上的吸湿水分；滤纸上的吸湿水分；流动相流动相有机溶剂（展开剂）。有机溶剂（展开剂）。实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理分离示意图分离示意图AB上上行行法法实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理原点原点展开后展开后斑点斑点溶剂溶剂前沿前沿a1a2bAB实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理 RF:通常用比移值通常用

3、比移值RF衡量各组分的分离程度衡量各组分的分离程度：RF:01。RF值相差越大，分离效果越好。值相差越大，分离效果越好。实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题RF：物质物质定性分析定性分析的依据。的依据。在进行分析工作时，可使用各组分在进行分析工作时，可使用各组分相应的相应的标准样品标准样品同时作同时作对照实验对照实验。影响因素影响因素：主要是展开剂、滤纸质：主要是展开剂、滤纸质量、温度等实验条件。量、温度等实验条件。实验原理实验原理实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理

4、本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：本实验分离和鉴定的氨基酸混合液：异亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和谷氨酸赖氨酸和谷氨酸。氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂氨基酸是无色的，在层析后需在纸上喷洒显色剂茚三酮，斑点呈现茚三酮，斑点呈现蓝紫色蓝紫色。显色机理：显色机理：（1）实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理（2）实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验原理实验原理（3）实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 主要仪器

5、：主要仪器：（1 1）玻璃层析筒）玻璃层析筒 150mm300mm(h)。（2）层析纸条）层析纸条 100mm240mm。（3）毛细管）毛细管 直径直径1mm左右。左右。（4 4）喷雾器）喷雾器 仪器试剂仪器试剂实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题主要试剂：主要试剂：（1）展开剂展开剂 正丁醇正丁醇:甲酸甲酸:水水60:12:8。（2）氨基酸标准溶液）氨基酸标准溶液 2 gL-1水溶液。水溶液。（3）茚三酮）茚三酮 1 gL-1乙醇溶液。乙醇溶液。（4）氨基酸混合试液）氨基酸混合试液 将（将（2）配制的三）配制的三种氨基酸等量混合。种氨基

6、酸等量混合。仪器试剂仪器试剂实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂点点样样展展开开分分离离显显色色计计算算比比移移值值实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤点点 样样2.5cm2.5cm1 2 3 4 异异亮亮氨氨酸酸赖赖氨氨酸酸谷谷氨氨酸酸混混合合液液各点各点2mm实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤展开分离展开分离展开剂展开剂滤纸下端浸滤纸下端浸入展开剂约入展开剂约0.5cm，计，

7、计时。时。一段时间后，一段时间后，前沿上升前沿上升15cm15cm左右左右记下展开记下展开停止时间停止时间实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤展开分离展开分离取出层析取出层析纸，画出纸，画出溶剂前沿溶剂前沿晾干或烘晾干或烘干展开剂干展开剂实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤显色显色在层析纸在层析纸上均匀喷上均匀喷洒显色剂洒显色剂l00 l00 烘箱中，烘箱中，烘烘3 35min5min实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意

8、事项注意事项思考题思考题实验步骤实验步骤计算计算RF用铅笔用铅笔描出各描出各斑点的斑点的轮廓轮廓ba1a2a3实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 （1）计算计算RF和和RF。（2）定性分析。）定性分析。数据处理数据处理实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题1.手应捏纸条手应捏纸条顶端顶端；2.毛细管不能混用；毛细管不能混用；3.纸条应纸条应垂直垂直悬挂在层析筒中，悬挂在层析筒中，不能卷不能卷曲曲；4.应应均匀均匀喷洒显色剂，显色剂喷洒量应喷洒显色剂，显色剂喷洒量应适当，适当，不能流淌不能流淌。注意事项注意事项实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题 1.1.实验时，能否用手指直接拿取滤纸实验时，能否用手指直接拿取滤纸条中部，对实验结果有何影响？条中部，对实验结果有何影响？2.2.为什么在纸色谱法中要采用标准品为什么在纸色谱法中要采用标准品对照鉴别？对照鉴别？思考题思考题实验目的实验目的实验原理实验原理仪器试剂仪器试剂实验步骤实验步骤注意事项注意事项思考题思考题