氯霉素眼药水的高效液相色谱分析-php.ppt
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1、氯霉素眼药水的高效液相色谱分析氯霉素眼药水的高效液相色谱分析彭花萍彭花萍仪器分析实验仪器分析实验目的要求:目的要求:1、了解高效液相色谱的基本原理、了解高效液相色谱的基本原理2、了解高效液相色谱仪的结构及正确使用、了解高效液相色谱仪的结构及正确使用3、学习外标法测定组分的含量、学习外标法测定组分的含量色谱起源色谱起源石油醚石油醚碳酸碳酸钙颗钙颗粒粒色素色素混合物混合物色色谱谱分离分离组组分分色谱的发明人色谱的发明人色谱的发明人色谱的发明人俄国科学家:俄国科学家:俄国科学家:俄国科学家:M.S.TswettM.S.Tswett提出经典液相色谱提出经典液相色谱提出经典液相色谱提出经典液相色谱植物的
2、石油醚提取液在碳酸钙吸附剂填充的玻璃管中分离出叶绿素及其他色素流动相:流动相:携带样品流过携带样品流过整个系统的流体整个系统的流体固定相:固定相:静止不动的一静止不动的一相,色谱柱相,色谱柱色谱法分离的基本原理:色谱法分离的基本原理:各组分性质结构差异各组分性质结构差异与固定相相互作用差异与固定相相互作用差异随流动相移动的速度不等随流动相移动的速度不等反复多次分配平衡反复多次分配平衡(吸附吸附解吸解吸)保留时间不同保留时间不同达到分离效果达到分离效果A+B+CABCCBACBACCB色谱洗脱过程与色谱图色谱洗脱过程与色谱图 t,minABC信信号号色谱法:利用组分在两相间分配系数不同而进行分色
3、谱法:利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术离的技术色色谱定义谱定义v色谱是一种色谱是一种分离分离技术技术.v色谱的主要目的是对混合物中的目标物色谱的主要目的是对混合物中的目标物分离分离和和定量定量 色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为保留时间号强度,横坐标为保留时间。保留体积保留体积V VR R调整保留体积调整保留体积V VR R死体积死体积V V0 0峰面积峰面积相对保留值相对保留值保留指数保留指数V=t.FcV=t.Fc;FcFc为流动相流速为流动相流
4、速保留值保留值区域宽度区域宽度WW1/21/2=2.335=2.335 W=4W=4W1/2W液相色谱液相色谱按流动相与固定相的分子聚集状态分类按流动相与固定相的分子聚集状态分类 流动相流动相固定相固定相气体气体(gas,G)液体液体(liguid,L)超临界流体超临界流体(supercrttical fluid,SF)固体固体(solid,S)GSCLSCSFSC液体液体(liguid,L)GLCLLCSFLC化学键合相化学键合相(bonded phase,BP)GBPCLBPCSFBPC气相色谱气相色谱液相色谱液相色谱超临界色谱超临界色谱液相色谱液相色谱:以:以液体液体作为流动相的色谱分离
5、方法作为流动相的色谱分离方法适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析分析流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用流动相具有运载样品分子和选择性分离的双重作用HPLC是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:高精度、耐高压的输液泵高精度、耐高压的输液泵高性能的色谱柱高性能的色谱柱高灵敏度的检测器高灵敏度的检测器HPLC特点特点 分离性能好分离性能好 灵敏度高(灵敏度高(10-910-12 g)选择性高(同分异构,旋光异构)选择性高(同分异构,旋光异构)分析速度
6、快分析速度快 进样量小(进样量小(1-100 m mL)1010HPLC应用领域应用领域药物分析(抗生素、维生素)药物分析(抗生素、维生素)临床分析(药物代谢)临床分析(药物代谢)化学品(邻苯二甲酸、醛、酮、药物中间体)化学品(邻苯二甲酸、醛、酮、药物中间体)环境(多环芳烃、农残、微嚢藻毒素)环境(多环芳烃、农残、微嚢藻毒素)食品(孔雀石绿、苏丹红)食品(孔雀石绿、苏丹红)生命科学(蛋白质、多肽)生命科学(蛋白质、多肽)液相液相色谱的基本流程图色谱的基本流程图流动相流动相 高压泵高压泵色谱柱色谱柱检测器检测器高压输高压输液系统液系统分离系统分离系统检测系统检测系统记录系统记录系统AEGBCDF
7、进样阀进样阀进样进样系统系统预备柱预备柱 1212HPLC分析过程 分析前,分析前,选择适当的色谱柱和流动相选择适当的色谱柱和流动相,开泵开泵,冲洗柱子冲洗柱子,待柱子达到平衡而且待柱子达到平衡而且基线平直基线平直后,用微量注射器把样品注入后,用微量注射器把样品注入进进样样口,流动相把试样带入色谱柱进行口,流动相把试样带入色谱柱进行分离分离,分离后的组分依次,分离后的组分依次流入检测器的流通池流入检测器的流通池,最后和洗脱液一起,最后和洗脱液一起排入流出物收集器排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时,检测器把组分浓度转变成电信号,当有样品组分流过流通池时,检测器把组分浓度转变成电信号,经过
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