2[1].1.1《植物细胞工程的基本技术》原创.ppt

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1、专题专题2 2 细胞工程细胞工程 19961996年年7 7月月5 5日日,世界上第一只体细胞克隆动物世界上第一只体细胞克隆动物-克隆克隆羊羊多利多利诞生于英国诞生于英国,标志着一种新的生物技术标志着一种新的生物技术-动物体细胞动物体细胞克隆技术面世克隆技术面世,也揭开细胞工程更深层次发展的序幕也揭开细胞工程更深层次发展的序幕!细胞工程是指应用细胞生物学和分子生细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过物学的原理和方法，通过 或或细胞器水细胞器水平平上的操作，按照人们的意愿来上的操作，按照人们的意愿来改变改变细胞内细胞内的的遗传物质遗传物质或或获得细胞产品获得细胞产品的一门综合科

2、学的一门综合科学技术。技术。什么叫细胞工程？什么叫细胞工程？按操作按操作对象分对象分植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程研究的水平研究的水平研究的水平研究的水平研究的研究的研究的研究的目的目的目的目的应用的原应用的原应用的原应用的原理和方法理和方法理和方法理和方法细胞水平细胞水平细胞水平细胞水平科技探索之路1902年，哈伯兰特提出了 的理论。1937年，怀特用烟草茎段形成层作材料，在试管中培养出了烟草植株。1958年，斯图尔德利用胡萝卜的组织培养再次证明了 l1965年，沃索在一定培养基上由烟草的单细胞得到再 生植株。l1970年，斯图尔德 用悬浮的单个细胞也培养出了可育的新植株，

3、进一步证明了 。l20世纪70年代以植物细胞克隆为代表的细胞工程诞生。细胞全能性植物细胞的全能性细胞的全能性1970年，哈里森用一滴淋巴液成功培养了蝌蚪的神经元，证明了动物组织此外培养的可行性，并首创了 20世纪60年代初，童第周开展鱼类的 工作，他还通过把黑斑蛙红细胞的核转移到同种生物的去核卵中，得到发育正常的蝌蚪。1975年，米尔斯和科勒用产生抗体的单个细胞与肿瘤细胞杂交，创立了 。1996年7月，世界第一只克隆羊多莉在英国诞生。2001年11月3日，我国首例体细胞克隆牛康康在山东莱阳农学院动物胚胎工程中心试验场降生。科技探索之路动物体外组织培养法细胞核移植单克隆抗体技术一、细胞的全能性：

4、一、细胞的全能性：1 1、概念：、概念：生物体的细胞具有使后代细胞形生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能，细胞的这种特性叫成完整个体的潜能，细胞的这种特性叫细胞的全能性。细胞的全能性。2 2、基础（具有全能性的原因）：、基础（具有全能性的原因）：生物体细胞都是由生物体细胞都是由受精卵受精卵经经 分裂形的，分裂形的，都含有该物种所特有的都含有该物种所特有的全套遗传物质全套遗传物质，都有发，都有发育成为完整个体所需的育成为完整个体所需的 。2.1.12.1.1植物细胞工程的基本技术植物细胞工程的基本技术有丝全部基因全部基因全部基因全部基因3 3、全能性的程度：、全能性的程度：4 4 4 4

5、、生物体内细胞并没有表现出全能性，而是分化成、生物体内细胞并没有表现出全能性，而是分化成、生物体内细胞并没有表现出全能性，而是分化成、生物体内细胞并没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织器官的原因为不同的组织器官的原因为不同的组织器官的原因为不同的组织器官的原因 基因基因在特定的时间和空间条件下在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果选择性表达的结果（1 1）受精卵的全能性受精卵的全能性最高最高 受精卵受精卵生殖细胞生殖细胞体细胞体细胞（2）植物细胞动物细胞植物细胞动物细胞（3）（4）分化程度低的细胞分化程度高的细胞）分化程度低的细胞分化程度高的细胞一、细胞的全能性（重点一、细胞的全能性（重

6、点 理解）：理解）：5 5、条件：、条件：（1）离体状态）离体状态，（2）完全营养物质）完全营养物质、激素激素 （3）其他外界条件）其他外界条件一、细胞的全能性：一、细胞的全能性：怎样才能由一块组织通过培养得怎样才能由一块组织通过培养得到一株完整植株到一株完整植株,应该如何操作应该如何操作?二、植物组织培养技术二、植物组织培养技术(重点重点 理解理解 )：植物组织培养实验 胡萝卜的组织培养技术原理：植物根、茎、叶一般都具有全能性，在一定的营养和激素等条件下，可以 形成。将愈伤组织转接到含有不同激素成分的培养基上，就可以诱导其 生成胚状体或丛芽，进而发育成完整的小植株。证明：分化的植物细胞，人具

7、有形成完整植株所需要的 愈伤组织再分化全部基因脱分化(1)(1)在组织培养实验中，为什么要强调所用器在组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作？械的灭菌和实验人员的无菌操作？防止杂菌污染，因为杂菌生长快，会和培养物防止杂菌污染，因为杂菌生长快，会和培养物防止杂菌污染，因为杂菌生长快，会和培养物防止杂菌污染，因为杂菌生长快，会和培养物争夺营养。杂菌生长过程中会产生有害的物质，争夺营养。杂菌生长过程中会产生有害的物质，争夺营养。杂菌生长过程中会产生有害的物质，争夺营养。杂菌生长过程中会产生有害的物质，导致培养物迅速死亡。导致培养物迅速死亡。导致培养物迅速死亡。导致培养物迅速死

8、亡。(2)(2)(2)(2)在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层形成层形成层形成层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。胡萝卜的其他部分（胡萝卜的其他部分（胡萝卜的其他部分（胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花如茎、叶、花如茎、叶、花如茎、叶、花），是否也能培养），是否也能培养），是否也能培养），是否也能培养成小植株？成小植株？成小植株？成小植

9、株？胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。uu1 1 1 1、概念：、概念：、概念：、概念：在在在在无菌无菌无菌无菌和人工控制条件下，将和人工控制条件下，将和人工控制条件下，将和人工控制条件下，将离体离体离体离体的的的的植物器官、组织、细胞植物器官、组织、细胞植物器官、组织、细胞植物器官、组织、细胞，培养，培

10、养，培养，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件条件条件条件，诱导其产生愈伤组织、，诱导其产生愈伤组织、，诱导其产生愈伤组织、，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。丛芽，最终形成完整的植株。丛芽，最终形成完整的植株。丛芽，最终形成完整的植株。uu2 2 2 2、理论基础：、理论基础：、理论基础：、理论基础：植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性(即原理即原理即原理即原理)u3 3 3 3、过程：、过程：、过程：、过程：外植体外植体外植体外植体 愈

11、伤组织愈伤组织愈伤组织愈伤组织 根、芽根、芽根、芽根、芽 植物体植物体植物体植物体二、植物组织培养技术（重点二、植物组织培养技术（重点 理解）：理解）：再分化脱分化也叫：外植体如：茎尖、根尖 适宜的温度、PH值、养料、激素、充足氧气条件 4 4、愈伤组织：、愈伤组织：由离体由离体 的植物组织或细胞，的植物组织或细胞，在培养一段时间以后，在培养一段时间以后，通过通过细胞分裂细胞分裂，形成，形成的一群薄壁细胞。的一群薄壁细胞。二、植物组织培养技术：二、植物组织培养技术：有丝分裂特点：具分裂、分化能力特点：具分裂、分化能力 既具全能性（主要）既具全能性（主要）无定形状态无定形状态 高度液泡化高度液泡

12、化 排列疏松、无规则排列疏松、无规则无叶绿体无叶绿体,不进行光合作用不进行光合作用u5 5、脱分化脱分化：由：由高度分化高度分化的植物器官、组织的植物器官、组织或细胞产生或细胞产生愈伤组织愈伤组织的过程，又称去分化。的过程，又称去分化。条件：条件：条件：条件：适宜温度、适宜温度、避光避光、pH和无菌环境。和无菌环境。无机物、有机物和植物激素（无机物、有机物和植物激素（生长素，细胞分裂素等生长素，细胞分裂素等）uu6、再分化再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程脱分化产生的愈伤组织在培养过程脱分化产生的愈伤组织在培养过程脱分化产生的愈伤组织在培养过程中中中中重新分化根或芽重新分化根或芽重新分化根

13、或芽重新分化根或芽等器官的过程。（等器官的过程。（等器官的过程。（等器官的过程。（需光需光需光需光）二、植物组织培养技术：二、植物组织培养技术：具分裂、分化能力结果结果结果结果无细胞分裂、分化能力三、植物体细胞杂交技术：重点三、植物体细胞杂交技术：重点 理解理解不能。不能。不能。不能。因为不同种生物之间存在着因为不同种生物之间存在着因为不同种生物之间存在着因为不同种生物之间存在着生殖生殖生殖生殖隔离隔离隔离隔离，所以用传统的有性杂交方，所以用传统的有性杂交方，所以用传统的有性杂交方，所以用传统的有性杂交方法是不可能做到这一点的。法是不可能做到这一点的。法是不可能做到这一点的。法是不可能做到这一

14、点的。于是，这些科学家试图用这两种植物的于是，这些科学家试图用这两种植物的体体细胞细胞进行杂交，来实现这一美妙的设想。进行杂交，来实现这一美妙的设想。这幅番茄这幅番茄马铃薯图利用马铃薯图利用传统有性杂交方法能实现传统有性杂交方法能实现吗？为什么？吗？为什么？1 1你认为两个来自不同植物的体细胞完成融你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合，遇到的第一个障碍是什么？合，遇到的第一个障碍是什么？2 2有没有一种温和的去壁方法呢？有没有一种温和的去壁方法呢？请思考：请思考：去细胞壁酶解法三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：原原生生质质体体番番茄茄细细胞胞原原生生质

15、质体体融融合合再再生生出出细细胞胞壁壁杂杂种种细细胞胞脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织杂杂种种植植株株再再分分化化三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：1 1 1 1、过程：、过程：、过程：、过程：马铃薯细胞标志：成功融合人工诱导去去壁壁植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物细胞的融合植物细胞的融合植物细胞的融合植物细胞的融合（1 1）、去壁的常用方法：）、去壁的常用方法：酶解法（纤维素酶、果胶酶等）酶解法（纤维素酶、果胶酶等）酶解法（纤维素酶、果胶酶等）酶解法（纤维素酶、果胶酶等）（2）、原生质体融合方法原生质体融合方法：物理法：离心、振动、电刺

16、激等物理法：离心、振动、电刺激等物理法：离心、振动、电刺激等物理法：离心、振动、电刺激等 化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEGPEGPEGPEG）三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：1 1、过程：、过程：利用电激发将野生马铃薯与栽培马铃薯进行细胞融合利用电激发将野生马铃薯与栽培马铃薯进行细胞融合三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：2 2、概念：、概念：将不同种的将不同种的植物体细胞植物体细胞，在一定条件下融合，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成成杂种细胞，并把杂种细

17、胞培育成新的植物体新的植物体的技术。的技术。4 4、优势：、优势：（与有性杂交方法比较与有性杂交方法比较与有性杂交方法比较与有性杂交方法比较）（1 1 1 1）克服植物远缘杂交不亲和性（最大）克服植物远缘杂交不亲和性（最大）克服植物远缘杂交不亲和性（最大）克服植物远缘杂交不亲和性（最大），（2 2 2 2）打破物种间的生殖隔离）打破物种间的生殖隔离）打破物种间的生殖隔离）打破物种间的生殖隔离（3)3)3)3)扩展了遗传重组的范围。扩展了遗传重组的范围。扩展了遗传重组的范围。扩展了遗传重组的范围。主要：原生质体融合目的3 3、原理：、原理：细胞膜的流动性和细胞膜的流动性和细胞全能性细胞全能性三、

18、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：如 马、驴之间白菜白菜白菜白菜甘蓝甘蓝甘蓝甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝“白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝白菜甘蓝”同普通白菜相比，具有生长期同普通白菜相比，具有生长期同普通白菜相比，具有生长期同普通白菜相比，具有生长期短、耐热性强和易于贮藏等优点。短、耐热性强和易于贮藏等优点。短、耐热性强和易于贮藏等优点。短、耐热性强和易于贮藏等优点。三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：为什么为什么“番茄番茄马铃薯马铃薯”超级杂种植株超级杂种植株没有没有如如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马科学家

19、所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？铃薯？主要原因是：主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，间是相互调控、相互影响的，马铃薯马铃薯番茄杂交植番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，番茄植株中的遗传物质一样有序表达，所以所以杂交植杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯。株不能地上长番茄、地下结马铃薯。三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重

20、点 理解）：理解）：5、未解决问题：、未解决问题：比较比较植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术所属所属范畴范畴原理原理步骤步骤意义意义联系联系无性繁殖无性繁殖细胞全能性细胞全能性脱分化脱分化再分化再分化保持优良性状保持优良性状繁殖速度快、大规模生产繁殖速度快、大规模生产提高经济效益提高经济效益杂交技术应用了组织培养杂交技术应用了组织培养克服不同种生物远缘杂交克服不同种生物远缘杂交不亲和的障碍不亲和的障碍去除细胞壁去除细胞壁融合形成杂种细胞融合形成杂种细胞组织培养组织培养膜流动性膜流动性细胞全能性细胞全能性染色体变异、基因重组染色体变异、基因重组u过程过程外植体外植体愈伤

21、组织愈伤组织根、芽根、芽植物体植物体脱分化脱分化再分化（需光）再分化（需光）（未分化）（未分化）（分化）（分化）幼芽或幼根？幼芽或幼根？条件？条件？特点？特点？适宜温度、避光、适宜温度、避光、pH和无菌环境。和无菌环境。无机物、有机物和无机物、有机物和植物激素（植物激素（生长素，生长素，细胞分裂素等细胞分裂素等）无定形状态无定形状态薄壁细胞薄壁细胞高度液泡化高度液泡化分裂旺盛分裂旺盛排列疏松、无规则排列疏松、无规则无叶绿体无叶绿体,不进行光不进行光合作用合作用分化程度低分化程度低脱分化较易脱分化较易重点1 1、过程：、过程：杂杂种种植植株株融合的原生质体AB再生出细胞壁脱分化愈愈愈愈伤伤伤伤组组组组织织织织再分化植物细胞的融合植物细胞的融合植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞植物细胞植物细胞A A A A原生质体原生质体B B原生质体原生质体原生质体原生质体A A A A杂种细胞AB去去去去 壁壁壁壁去去去去 壁壁壁壁人工诱导方法？促进融合的方法？融合融合融合融合完成完成完成完成的的的的标志标志标志标志植物细胞植物细胞植物细胞植物细胞B B B B三、植物体细胞杂交技术（重点三、植物体细胞杂交技术（重点 理解）：理解）：