现代分子生物学课件-第四章ppt.ppt
《现代分子生物学课件-第四章ppt.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《现代分子生物学课件-第四章ppt.ppt(168页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、第四章 生物信息的传递(下)从mRNA到蛋白质 l遗传密码ltRNAl核糖体l蛋白质合成的生物学机制l蛋白质转运机制第一节第一节 遗传密码遗传密码要点:遗传密码的特性和特征密码的简并性、普遍性与特殊性可读框(ORF)4.1遗传密码三联子所谓翻译是指将mRNA链上的核苷酸从一个特定的起始位点开始,按每3个核苷酸代表一个氨基酸的原则,依次合成一条多肽链的过程。这3个核苷酸就是一个密码子。翻译时从起始密码子AUG开始,沿着mRNA53方向连续阅读密码子,直至终止密码子为止,生成一条具有特定序列的多肽链蛋白质。图4-1Crick关于tRNA分子破译mRNA遗传密码三联子的原始构想4.1.1三联子密码及
2、其破译因为mRNA中只有4种核苷酸,而蛋白质中有20种氨基酸,以一种核苷酸代表一种氨基酸是不可能的。若以两种核苷酸作为一个氨基酸的密码(二联子),它们能代表的氨基酸也只有42=16种。若以3个核苷酸代表一个氨基酸,有43=64种密码子,满足了编码20种氨基酸的需要。若在模板mRNA中插入或删除一个碱基,会改变该密码子以后的全部氨基酸序列。若同时对模板进行插入和删除试验,保证后续密码子序列不变,翻译得到的蛋白质序列就保持不变(除了发生突变的那个密码子所代表的氨基酸之外)。如果同时删去3个核苷酸,翻译产生少了一个氨基酸的蛋白质,但序列不发生变化。图图图图4-24-2用核苷酸的插入或删除实验证明用核
3、苷酸的插入或删除实验证明用核苷酸的插入或删除实验证明用核苷酸的插入或删除实验证明mRNAmRNA模板上模板上模板上模板上每三个核苷酸组成一个密码子每三个核苷酸组成一个密码子每三个核苷酸组成一个密码子每三个核苷酸组成一个密码子1.以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板指导多肽的合成。2.Nirenberg把多聚(U)作为模板加入到无细胞体系时发现,新合成的多肽链是多聚苯丙氨酸,确定UUU代表苯丙氨酸(Phe)。以多聚(C)及多聚(A)做模板得到的分别是多聚脯氨酸和多聚赖氨酸。以多聚UG为模板合成的是多聚Cys和Val,因为多聚(UG)中含Cys和Val的密码:5UGUGUGUGUGUGUG
4、UGUG3无论读码从U开始还是从G开始,都只能有UGU(Cys)及GUG(Val)两种密码子。Nirenberg及Ochoa等又用各种特定序列如只含A、C的共聚核苷酸作模板,任意排列时可出现8种三联子,即CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA,获得由Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys等6种氨基酸组成的多肽。以多聚(UUC)为模板,可能有3种起读方式:5UUCUUCUUCUUCUUC3或5UCUUCUUCUUCUUCU3或5CUUCUUCUUCUUCUU3产生UUC(Phe)、UCU(Ser)或CUU(Leu),得到多聚苯丙氨酸、多聚丝氨酸或多聚亮氨酸。因此,
5、UUC、UCU、CUU分别是苯丙氨、丝氨酸及亮氨酸的密码子。当然,也可能只合成2种均聚多肽,如:5GUAGUAGUAGUAGUA3或5UAGUAGUAGUAGUAG3或5AGUAGUAGUAGUAGU3由第二种读码方式产生的密码子UAG是终止密码,不编码任何氨基酸,因此,只产生2种密码子GUA(Val)或AGU(Ser),合成多聚缬氨酸或多聚丝氨酸。2.核糖体结合技术以人工合成的三核苷酸如UUU、UCU、UGU等为模板,在含核糖体、AA-tRNA的适当离子强度的反应液中保温后通过硝酸纤维素滤膜。游离的AA-tRNA因相对分子质量小能自由过膜,与模板对应的AA-tRNA能与核糖体结合,体积超过膜
6、上的微孔而被滞留。若用20种AA-tRNA做20组同样的实验,每组都含20种AA-tRNA和各种三核苷酸,但只有一种氨基酸用14C标记,看哪一种AA-tRNA被留在滤膜上,进一步分析这一组的模板是哪个三核苷酸,从模板三核苷酸与氨基酸的关系可测知该氨基酸的密码子。表表表表4-14-1三核苷酸密码子能使特定的三核苷酸密码子能使特定的三核苷酸密码子能使特定的三核苷酸密码子能使特定的氨基酰氨基酰氨基酰氨基酰-tRNA-tRNA结合到核糖体上结合到核糖体上结合到核糖体上结合到核糖体上*数数字字代代表表特特定定氨氨基基酰酰tRNA与与带带有有模模板板三三核核苷苷酸酸的核糖体相结合的效率。的核糖体相结合的效
7、率。密码子密码子与核糖体相结合的与核糖体相结合的14C标记的氨基酰标记的氨基酰-tRNAPhe-tRNAPheLys-tRNALysPro-tRNAProUUU4.6*00AAA07.70CCC003.14.1.2遗传密码的性质1.密码的简并性4种核苷酸可组成64个密码子,现在已经知道其中61个是编码氨基酸的密码子,另外3个即UAA、UGA和UAG并不代表任何氨基酸,它们是终止密码子,不能与tRNA的反密码子配对,但能被终止因子或释放因子识别,终止肽链的合成。表表4-2 通用遗传密码及相应的氨基酸通用遗传密码及相应的氨基酸第一位(5端)核苷酸第二位(中间)核苷酸UCAG第三位(3端)核苷酸U苯
8、丙氨酸(Phe,F)丝氨酸(Ser,S)酪氨酸(Tyr,Y)半胱氨酸(Cys,C)U苯丙氨酸(Phe,F)丝氨酸(Ser,S)酪氨酸(Tyr,Y)光胱氨酸(Cys,C)C亮氨酸(Leu,L)丝氨酸(Ser,S)终止(Stop)终止(Stop)A亮氨酸(Leu,L)丝氨酸(Ser,S)终止(Stop)色氨酸(Trp,W)GC亮氨酸(Leu,L)脯氨酸(Pro,P)组氨酸(His,H)精氨酸(Arg,R)U亮氨酸(Leu,L)脯氨酸(Pro,P)组氨酸(His,H)精氨酸(Arg,R)C亮氨酸(Leu,L)脯氨酸(Pro,P)谷氨酰胺(Gln,Q)精氨酸(Arg,R)A亮氨酸(Leu,L)脯氨酸(
9、Pro,P)谷氨酰胺(Gln,Q)精氨酸(Arg,R)GA异亮氨酸(Ile,I)苏氨酸(Thr,T)天冬酰胺(Asn,N)丝氨酸(Ser,S)U异亮氨酸(Ile,I)苏氨酸(Thr,T)天冬酰胺(Asn,N)丝氨酸(Ser,S)C异亮氨酸(Ile,I)苏氨酸(Thr,T)赖氨酸(Lys,K)精氨酸(Arg,R)A甲硫氨酸(Met,M)苏氨酸(Thr,T)赖氨酸(Lys,K)精氨酸(Arg,R)GG缬氨酸(Val,V)丙氨酸(Ala,A)天冬氨酸(Asn,N)甘氨酸(Gly,G)U缬氨酸(Val,V)丙氨酸(Ala,A)天冬氨酸(Asn,N)甘氨酸(Gly,G)C缬氨酸(Val,V)丙氨酸(Al
10、a,A)谷氨酸(Glu,E)甘氨酸(Gly,G)A缬氨酸(Val,V)丙氨酸(Ala,A)谷氨酸(Glu,E)甘氨酸(Gly,G)G 除色氨酸(UGG)只有一个密码子外,其他氨基酸都有一个以上的密码子。9种氨基酸有2个密码子,1种氨基酸有3个密码子,5种氨基酸有4个密码子,3种氨基酸有6个密码子(表4-3)。由一种以上密码子编码同一个氨基酸的现象称为简并(degeneracy),对应于同一氨基酸的密码子称为同义密码子(synonymouscodon)。AUG和GUG既是甲硫氨酸及缬氨酸的密码子又是起始密码子。3.密码子与反密码子的相互作用tRNA的反密码子在核糖体内是通过碱基的反向配对与mRN
11、A上的密码子相互作用的。1966年,Crick提出摆动假说(wobblehypothesis),解释了反密码子中某些稀有成分(如I)的配对,以及许多氨基酸有2个以上密码子的问题。图图图图4-4mRNA4-4mRNA上的密码子与上的密码子与上的密码子与上的密码子与tRNAtRNA上的反密码子配对示意图。上的反密码子配对示意图。上的反密码子配对示意图。上的反密码子配对示意图。a.a.密码子与密码子与密码子与密码子与tRNAtRNA反密码子臂上相应序列配对;反密码子臂上相应序列配对;反密码子臂上相应序列配对;反密码子臂上相应序列配对;b.b.当反密码子第一位是当反密码子第一位是当反密码子第一位是当反
12、密码子第一位是I I时,密码子第三位可以是时,密码子第三位可以是时,密码子第三位可以是时,密码子第三位可以是A A、U U或或或或C C。在密码子与反密码子的配对中,前两对严格遵守碱基配对原则,第三对碱基有一定的自由度,可以“摆动”,因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子。一个tRNA究竟能识别多少个密码子是由反密码子的第一位碱基的性质决定的,反密码子第一位为A或C时只能识别1种密码子,为G或U时可以识别2种密码子,为I时可识别3种密码子。多个密码子同时编码一个氨基酸,凡是第一、二位碱基不同的密码子都对应于各自独立的tRNA。原核生物中大约有30-45种tRNA,真核细胞中可能存在50种t
13、RNA。第二节第二节 tRNA ltRNA的种类、l结构和功能、lAA-tRNA合成酶4.2tRNAtRNA不但为每个三联密码子翻译成氨基酸提供了接合体,还为准确无误地将所需氨基酸运送到核糖体上提供了运送载体,所以,它又被称为第二遗传密码。不同tRNA在结构上存在大量的共性,由小片段碱基互补配对形成三叶草形分子结构,有4条根据结构或已知功能命名的手臂。最常见tRNA分子有76个碱基,相对分子质量约为2.5104,不同的tRNA分子可有7495个核苷酸不等。D臂中存在多至3个可变核苷酸位点,17:1及20:1、20:2。最常见的D臂缺失这3个核苷酸,而最小的D臂中第17位核苷酸也缺失了。受体臂(
14、acceptorarm)由链两端序列配对形成的杆状结构和3端未配对的34个碱基所组成,其3端的最后3个碱基序列永远是CCA,最后一个碱基的3或2自由羟基(OH)可以被氨酰化。TC臂是根据3个核苷酸命名的,其中表示拟尿嘧啶;反密码子臂是根据位于套索中央的三联反密码子命名的;D臂是根据它含有二氢尿嘧啶(dihydrouracil)命名的。tRNA的稀有碱基含量非常丰富,约有70余种。每个tRNA分子至少含有2个稀有碱基,最多有19个,多数分布在非配对区,特别是在反密码子3端邻近部位出现的频率最高。4.2.1tRNA的L-形三级结构研究酵母tRNAPhe、tRNAfMet和大肠杆菌tRNAfMet、
15、tRNAArg等的三级结构,发现都呈L形折叠式(图4-6)。在L形三级结构中,受体臂和TC臂的杆状区域构成了第一个双螺旋,D臂和反密码子臂的杆状区域形成了第二个双螺旋。TC臂和D臂的套索状结构位于“L”的转折点,受体臂顶端的碱基位于“L”的一个端点,反密码子臂的套索状结构生成了“L”的另一个端点(图4-7)。tRNA上所运载的氨基酸必须靠近位于核糖体大亚基上的多肽合成位点,而tRNA上的反密码子必须与小亚基上的mRNA相配对,所以分子中两个不同的功能基团是最大限度分离的。4.2.2tRNA的功能转录过程是信息从一种核酸分子(DNA)转移到另一种结构上极为相似的核酸分子(RNA)的过程,信息转移
16、靠的是碱基配对。翻译阶段遗传信息从mRNA分子转移到结构极不相同的蛋白质分子,信息是以能被翻译成单个氨基酸的三联密码子形式存在的,在这里起作用的是tRNA的解码机制。用14C标记的半胱氨酸与tRNACys结合后生成14C-半胱氨酸-tRNACys,经Ni催化可生成14C-Ala-tRNACys,再把14C-Ala-tRNACys加入到蛋白质合成系统中,发现14C-Ala-tRNACys插入了血红蛋白分子中通常由半胱氨酸占据的位置上,表明起识别作用的是tRNA。4.2.3tRNA的种类1.起始tRNA和延伸tRNA能特异性识别mRNA模板上起始密码子的tRNA叫起始tRNA,其他tRNA统称为延
17、伸tRNA。真核生物起始tRNA携带甲硫氨酸(Met),原核生物起始tRNA携带甲酰甲硫氨酸(fMet),Met-tRNAfMet必须首先甲酰化生成fMet-tRNAfMet才能参与蛋白质的生物合成。2.同工tRNA将代表相同氨基酸的不同tRNA称为同工tRNA。在一个同工tRNA组内,所有tRNA均专一于相同的氨基酰-tRNA合成酶。同工tRNA既要有不同的反密码子以识别该氨基酸的各种同义密码,又要有某种结构上的共同性,能被AA-tRNA合成酶识别。3.校正tRNA结构基因中某个核苷酸的改变可能产生终止密码子(UAG、UGA、UAA),使蛋白质合成提前终止,合成无功能的或无意义的多肽,这种突
18、变称为无义突变,而校正tRNA通过改变反密码子区校正无义突变(表4-7)。表表4-7大肠杆菌无义突变的校正大肠杆菌无义突变的校正tRNA位点tRNA野生型校正基因识别密码反密码识别密码反密码supDSerUCGCGAUAGCUAsupEGlnCAGCUGUAGCUAsupCTyrUACGUAUAGCUAsupGLysAAAUUUUAAUUAsupUTrpUGGCCAUGAUCA错义突变是由于结构基因中某个核苷酸的变化使一种氨基酸的密码变成另一种氨基酸的密码。错义突变的校正tRNA通过反密码子区的改变把正确的氨基酸加到肽链上,合成正常的蛋白质。4.2.4AA-tRNA合成酶AA-tRNA合成酶是
19、一类催化氨基酸与tRNA结合的特异性酶,其反应式如下:AA+tRNA+ATPAA-tRNA+AMP+PPi它实际上包括两步反应:第一步是氨基酸活化生成酶-氨基酰腺苷酸复合物。AA+ATP+酶(E)E-AA-AMP+PPi第二步是氨酰基转移到tRNA3末端腺苷残基的2或3-羟基上。E-AA-AMP+tRNAAA-tRNA+E+AMP异亮氨酸-tRNA合成酶对异亮氨酸的亲和力比对缬氨酸大225倍,体内缬氨酸的浓度比异亮氨酸高5倍,缬氨酸被错误渗入到异亮氨酸位点上去的机率应是1/40,但实际误差率只有约1/10000。研究发现,被错误活化的缬氨酸不会被结合到tRNAIle上,而是被酶本身水解,即活化
20、阶段产生的误差在后一阶段被再次校正了(表4-8)。表表4-8活化活化tRNAIle合成酶的合成酶的准确性受双重控制准确性受双重控制错误率错误率缬氨酸活化阶段1/225缬氨酸-tRNAIle的释放1/270总误差率1/2251/2705=1/12,000第三节第三节核糖体核糖体 l核糖体的结构与功能lrRNAl与蛋白质合成有关的因子4.3核糖体核糖体核糖体是由几十种蛋白质和多种核糖体RNA(ribosomalRNA,rRNA)所组成的亚细胞颗粒。一个细菌细胞内约有20000个核糖体,而真核细胞内可达106个。这些颗粒既可以游离状态存在于细胞内,也可与内质网结合,形成微粒体。核糖体蛋白约占原核细胞
21、总蛋白量的9-10%,占细胞内总RNA量的70-80%。在真核细胞内,核糖体所占的比重虽然有所下降,但仍然占总RNA的绝大部分,是细胞总蛋白的一个重要组成部分。表表4-9核糖体及其他组分在大肠杆菌细胞内的分布核糖体及其他组分在大肠杆菌细胞内的分布组分占细胞总量细胞内数量细胞壁10%1细胞膜10%2DNA2%1mRNA2%3.5103tRNA3%1.6105rRNA21%8105核糖体蛋白9%2104可溶性蛋白40%106小分子3%7.5106真核生物中,所有正在进行蛋白质合成的核糖体都不是在细胞质内自由漂浮,而是直接或间接与细胞骨架结构有关联或者与内质网膜结构相连的(图4-8)。细菌核糖体大都
22、通过与mRNA相互作用,被固定在核基因组上。图4-8结合在内质网上的核糖体。左,电镜下看到的胰腺细胞粗糙内质网;右,局部放大后的草图。表表4-10大肠杆菌核糖体基本成分大肠杆菌核糖体基本成分核糖体小亚基大亚基沉降系数70S30S50S总体相对分子质量2.521069.301051.59106主要rRNA(碱基数)16S(1541)23S(2004)主要rRNA(碱基数)5S(120)RNA相对分子质量1.661065.601051.10106RNA所占比例66%60%70%蛋白质数量2136蛋白质相对分子质量8.571053.701054.87105蛋白质所占比例34%40%30%4.3.1核
23、糖体的结构核糖体的结构 核糖体是一个致密的核糖核蛋白颗粒,可解离为两个亚基,每个亚基都含有一个相对分子质量较大的rRNA和许多不同的蛋白质分子。原核生物核糖体由约2/3的RNA及1/3的蛋白质组成。真核生物核糖体中RNA占3/5,蛋白质占2/5。原核生物、真核生物细胞质及细胞器中的核糖体存在着很大差异(表4-11)。表表表表4-114-11几种不同生物核糖体及几种不同生物核糖体及几种不同生物核糖体及几种不同生物核糖体及rRNArRNA的组成的组成的组成的组成核糖体来源大亚基小亚基沉降系数RNA沉降系数RNA80S脊椎动物60S28S40S18S5S5.8S80S无脊椎动物、植物60S25S40
24、S1618S5S5.8S70S原核生物50S23S30S16S55S脊椎动物线粒体40S1617S30S1013S大肠杆菌核糖体小亚基由21种蛋白质组成,分别用S1S21表示,大亚基由36种蛋白质组成,分别用L1L36表示。真核生物细胞核糖体蛋白质中,大亚基含有49种蛋白质,小亚基有33种蛋白质,它们的相对分子质量在81034.0104之间。图4-9是在高倍电镜下得到的原核生物70S核糖体大、小亚基相结合的模型,核糖体分子中可容纳两个tRNA和约40bp长的mRNA。大肠杆菌核糖体小亚基由21种蛋白质组成,分别用S1S21表示,大亚基由36种蛋白质组成,分别用L1L36表示。真核生物细胞核糖体
25、蛋白质中,大亚基含有49种蛋白质,小亚基有33种蛋白质,它们的相对分子质量在81034.0104之间。图4-9是在高倍电镜下得到的原核生物70S核糖体大、小亚基相结合的模型,核糖体分子中可容纳两个tRNA和约40bp长的mRNA。4.3.2rRNA15SrRNA细菌5SrRNA含有120个核苷酸(革兰氏阴性菌)或116个核苷酸(革兰氏阳性菌)。5SrRNA有两个高度保守的区域,其中一个区域含有保守序列CGAAC,这是与tRNA分子TC环上的GTCG序列相互作用的部位,是5SrRNA与tRNA相互识别的序列。216SrRNA长约14751544个核苷酸之间,含有少量修饰碱基,位于30S小亚基内。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 现代 分子生物学 课件 第四 ppt
限制150内