5检查方法与消毒灭菌.ppt

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1、 一、一、细菌形态检查法细菌形态检查法一）不染色标本检查法一）不染色标本检查法活菌轮廓活菌轮廓动动 力力 单染色法单染色法 复染色法复染色法 鉴别染色法鉴别染色法 革兰染色革兰染色 抗酸染色抗酸染色 荚膜染色荚膜染色 鞭毛染色鞭毛染色 芽胞染色芽胞染色特殊染色法特殊染色法二）染色标本检查法二）染色标本检查法原原 理：理：细胞壁结构学说细胞壁结构学说等电点学说等电点学说化学结构学说化学结构学说 革兰染色法（革兰染色法（Gram StainGram Stain）由丹麦医生由丹麦医生Hans Christian GramHans Christian Gram于于18841884年年创立。创立。涂涂

2、片片干干 燥燥固固 定定染染 色色水洗、吸干水洗、吸干镜镜 检检一、制备涂片标本一、制备涂片标本步步 骤骤二、染二、染 色色结晶紫初染结晶紫初染碘液媒染碘液媒染乙醇脱色乙醇脱色复红复染复红复染涂片固定涂片固定紫色紫色紫色紫色革兰阳性（革兰阳性（革兰阳性（革兰阳性（G+G+G+G+）菌）菌）菌）菌红色红色红色红色革兰阴性（革兰阴性（革兰阴性（革兰阴性（G-G-G-G-）菌）菌）菌）菌（1 1 1 1）鉴别细菌）鉴别细菌）鉴别细菌）鉴别细菌（2 2 2 2）选择药物）选择药物）选择药物）选择药物（3 3 3 3）与致病性有关）与致病性有关）与致病性有关）与致病性有关意意 义义结结 果果 细菌学诊断

3、细菌学诊断标本的采集和运送标本的采集和运送避免杂菌污染避免杂菌污染运送注意保存运送注意保存不同期不同标本不同期不同标本抗菌素使用前抗菌素使用前采集病变明显部位采集病变明显部位标本必须新鲜标本必须新鲜病原菌的检查程序病原菌的检查程序药物敏感试验药物敏感试验直接涂片镜检直接涂片镜检分离培养分离培养生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定动物试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术观察菌落形态观察菌落形态染色镜检染色镜检原理原理双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高急性期血清中抗体效价升高4

4、 4倍者方有意义倍者方有意义结结果果判判断断血清学的诊断血清学的诊断-已知抗原检测未知抗体已知抗原检测未知抗体-效价高低效价高低-动态观察动态观察种种 类类凝集试验凝集试验 -肥肥达达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等试验、外斐试验、显微镜凝集试验等中和试验中和试验 -梅毒梅毒VDRLVDRL、RPRRPR试验等试验等沉淀试验沉淀试验 -抗抗“O”O”试验等试验等补体结合试验补体结合试验 -Q Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等杀死物体上病原微生物的方法杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 消毒消毒disinfect

5、iondisinfection灭菌灭菌sterilizationsterilization无菌无菌asepsisasepsis防腐防腐antisepsisantisepsis防止或防止或防止或防止或抑制体外细菌生长繁殖抑制体外细菌生长繁殖抑制体外细菌生长繁殖抑制体外细菌生长繁殖不含活菌不含活菌不含活菌不含活菌杀死物体上的所有微生物杀死物体上的所有微生物杀死物体上的所有微生物杀死物体上的所有微生物无菌操作无菌操作抹布上的细菌抹布上的细菌 菜板上的细菌菜板上的细菌 热力灭菌法热力灭菌法 一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法烧灼烧灼-直接用火焰灭菌方法直接用

6、火焰灭菌方法干烤干烤-加热加热160-180 2160-180 2小时小时干热干热(dry heat)(dry heat)灭菌法灭菌法杀菌机理：杀菌机理：高温使菌体蛋白凝固变性高温使菌体蛋白凝固变性红外线红外线-热效应只在照射表面产生热效应只在照射表面产生微波微波-热效应具有一定的穿透性热效应具有一定的穿透性湿热湿热(moist heat)(moist heat)灭菌法灭菌法加压蒸汽灭菌法加压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法最有效的灭菌方法121121煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮10051005分钟分钟(繁殖体繁殖体)-2)-2小时小时(芽胞芽胞)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法间歇

7、蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽水蒸汽100 15-30100 15-30分钟分钟(繁殖体繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（较低的温度（61306130分钟）杀灭致病菌分钟）杀灭致病菌20-3020-30分钟分钟湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热比干热灭菌效果好同一温度下，湿热比干热灭菌效果好原原因因1 1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2 2、湿热的穿透力比干热大、湿热的穿透力比干热大3 3、湿热的蒸汽有潜热、湿热的蒸汽有潜热辐射杀菌法辐射杀菌法 紫外线紫外线杀菌机理：杀菌机理：波长波长200-30

8、0nm200-300nm的紫外线具有杀菌作用的紫外线具有杀菌作用干扰干扰DNADNA的复制与转录的复制与转录紫外线穿透力较弱紫外线穿透力较弱特点：特点：应用范围：应用范围：空气及空气及不耐热物品的表面消毒不耐热物品的表面消毒光复活作用及光复活酶光复活作用及光复活酶杀菌机理：杀菌机理：应用范围：应用范围：电离辐射电离辐射包括高速电子、包括高速电子、X X射线和射线和 射线射线产生游离基产生游离基,破坏破坏DNADNA。一次性医用塑料制品的消毒一次性医用塑料制品的消毒食品的消毒不破坏其营养成分食品的消毒不破坏其营养成分 超声波杀菌法超声波杀菌法 超声波超声波杀菌机理：杀菌机理：频率高于频率高于20

9、kHz/s20kHz/s而不被人耳感觉到的声波而不被人耳感觉到的声波过水时的空化作用（空穴效应）过水时的空化作用（空穴效应）特点：特点：应用范围：应用范围：粉碎细胞，提取细胞组分粉碎细胞，提取细胞组分革兰阴性菌较为敏感革兰阴性菌较为敏感滤过除菌法滤过除菌法用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌滤菌器滤菌器 含有微细小孔含有微细小孔0.220.22微米微米,只允许液体或气体只允许液体或气体通过通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 适用范围适用范围血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 滤菌滤菌过程过程低温与

10、干燥低温与干燥在低温状态下真空抽去水分在低温状态下真空抽去水分用途：用途：保存菌种保存菌种冷冻真空干燥法：冷冻真空干燥法：二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法杀菌机理杀菌机理使菌体蛋白凝固变性使菌体蛋白凝固变性使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含 物逸出物逸出按杀菌能力分类按杀菌能力分类可杀死包括芽胞在内的所有微生物可杀死包括芽胞在内的所有微生物 1、高效消毒剂高效消毒剂适用于不耐热力，但要进入体内的物品适用于不耐热力，但要进入体内的物品包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂包括含氯消毒剂、过氧化物消毒

11、剂 醛类消毒剂、环氧乙烷等醛类消毒剂、环氧乙烷等2、中效消毒剂中效消毒剂适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等不能杀死包括芽胞，可杀死繁殖体（包不能杀死包括芽胞，可杀死繁殖体（包 括结核分枝杆菌）、真菌、多数病毒括结核分枝杆菌）、真菌、多数病毒可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒3、低效消毒剂低效消毒剂适用于皮肤、粘膜、物体表面和地面等适用于皮肤、粘膜、物体表面和地面等包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高

12、锰酸包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高锰酸 钾等钾等龙胆紫龙胆紫干扰氧化、抑制繁殖干扰氧化、抑制繁殖染料染料染料染料新洁而灭新洁而灭蛋白变性，细胞膜损伤蛋白变性，细胞膜损伤表面活性剂表面活性剂过氧乙酸、碘酒过氧乙酸、碘酒氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀氧化剂氧化剂红汞、硫柳汞红汞、硫柳汞氧化、蛋白酶变性氧化、蛋白酶变性重金属盐重金属盐高锰酸甲高锰酸甲氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀氧化剂氧化剂乙醇乙醇蛋白变性蛋白变性醇类醇类石炭酸石炭酸蛋白变性，细胞膜损伤蛋白变性，细胞膜损伤酚类酚类常用种类常用种类作用机制作用机制类别类别常用消毒剂种类常用消毒剂种类各种消毒剂的应用各种消毒剂的应用消毒剂消毒剂消毒剂消毒剂

13、常用浓度常用浓度常用浓度常用浓度 适用范围适用范围适用范围适用范围含氯消毒剂含氯消毒剂含氯消毒剂含氯消毒剂有效氯量有效氯量有效氯量有效氯量4g/L4g/L4g/L4g/L饮水饮水饮水饮水过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸0.2%-1%0.2%-1%0.2%-1%0.2%-1%皮肤、物体表面、空气皮肤、物体表面、空气皮肤、物体表面、空气皮肤、物体表面、空气戊二醛戊二醛戊二醛戊二醛2%2%2%2%医疗器械医疗器械医疗器械医疗器械碘酒碘酒碘酒碘酒2.5%2.5%2.5%2.5%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面碘伏碘伏碘伏碘伏2%2%2%2%皮肤、黏膜、物

14、体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面乙醇乙醇乙醇乙醇75%75%75%75%医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤新洁尔灭新洁尔灭新洁尔灭新洁尔灭0.4%-1.6%0.4%-1.6%0.4%-1.6%0.4%-1.6%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾高锰酸钾1-10g/L1-10g/L1-10g/L1-10g/L皮肤、黏膜、食具、蔬菜等皮肤、黏膜、食具、蔬菜等皮肤、黏膜、食具、蔬菜等皮肤、黏膜、食具、蔬菜等影响消毒剂作用的因素影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂细菌细菌 环境环境种类种类浓度浓度作用时间作用时间菌龄菌龄种类种类有机物有机物温度温度酸硷度酸硷度1 1、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围2 2、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素3 3、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义4 4、据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微 生物学的诊断方案？生物学的诊断方案？预习：预习：微生物的遗传与变异微生物的遗传与变异思考题思考题