食品中大肠菌群测定PPT课件.ppt
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1、关于食品中大关于食品中大肠菌群菌群的的测定定第一张,PPT共六十二页,创作于2022年6月1、了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌群测定在食品卫生检验中的意义。群测定在食品卫生检验中的意义。2、练习并掌握大肠菌群的检验方法、练习并掌握大肠菌群的检验方法。一、一、目的目的第二张,PPT共六十二页,创作于2022年6月二、原理二、原理1 1、大肠菌群、大肠菌群大肠菌群系指一群在大肠菌群系指一群在3737、2424小时能发酵乳小时能发酵乳糖产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性糖产酸产气,需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌无芽孢杆菌。第三张,PPT共六十二页,创作于202
2、2年6月主要由肠杆菌科中主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的的亚属细菌亚属细菌组成。组成。第四张,PPT共六十二页,创作于2022年6月该菌主要来源于该菌主要来源于人畜粪便人畜粪便,故以此作为粪便污染指,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。标来评价食品的卫生质量,具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否被粪便污染,同时间接地指出食品是否它反映了食品是否被粪便污染,同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。有肠道致病菌污染的可能性。食品中大肠菌群数系以每食品中大肠菌群数系以每1
3、 1g(或(或mL)检样内大肠菌群)检样内大肠菌群最可能数最可能数MPNMPN(themostprobablenumber-简称简称MPN)表示)表示2 2、测定的意义、测定的意义第五张,PPT共六十二页,创作于2022年6月3大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌的生物学特性基本形态:基本形态:此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约此菌为两端钝圆的短小杆菌,一般约0.5-0.8m*1.0-3.0 m,多单独存在或成双,多单独存在或成双,但不呈长链排列。约但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛,的菌株有周生鞭毛,但多数只有但多数只有1-4根,一般不超过根,一般不超过10根,故菌体动根,故菌体动力弱。多数菌株
4、有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,力弱。多数菌株有菌毛,有的有荚膜或微荚膜,不形成芽孢,对普通碱性染料着色良好,革兰氏不形成芽孢,对普通碱性染料着色良好,革兰氏染色阴性。染色阴性。第六张,PPT共六十二页,创作于2022年6月在普通营养琼脂上有3中菌落形态:1)光滑型:菌落边缘整齐,表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色,在生理盐水中易分散;2)粗糙型:菌落扁平、干涩、边缘不整齐,易 在生理盐水中自凝;3)黏液型:常为含有荚膜的菌株。培养特性:大肠杆菌合成代谢能力强,在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37,在42-44 条件下仍能生长,生长温度范围15-46。第七张,PPT共六十
5、二页,创作于2022年6月三三、材料材料1 1、食品样品、食品样品乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。或其他食品。2 2、阳性对照菌、阳性对照菌大肠杆菌大肠杆菌第八张,PPT共六十二页,创作于2022年6月除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:其他设备和材料如下:恒温培养箱、恒温水浴箱、恒温培养箱、恒温水浴箱、均质器、振荡均质器、振荡器、器、无菌吸管无菌吸管或微量移液器及吸头、或微量移液器及吸头、无菌锥无菌锥形瓶形瓶、无菌培养皿无菌培养皿、菌落计数器菌落计数器等。等。3、仪器设备仪器设
6、备第九张,PPT共六十二页,创作于2022年6月月桂基硫酸盐胰蛋白胨(月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST LST)肉汤)肉汤、煌绿乳糖胆煌绿乳糖胆盐(盐(BGLB BGLB)肉汤)肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂(结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)VRBA)、无菌生理盐水无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、或磷酸盐缓冲液、1mol/L1mol/L氢氧化钠氢氧化钠(NaOH)NaOH)、1mol/L 1mol/L 盐酸(盐酸(HCI)HCI)。4 4、培养基和试剂培养基和试剂第十张,PPT共六十二页,创作于2022年6月第一法第一法 大肠菌群大肠菌群MPNMPN计数法。计数法。第二法第二法 大肠菌群平板计数法。大肠菌
7、群平板计数法。四、四、检验方法检验方法第十一张,PPT共六十二页,创作于2022年6月试验流程试验流程第十二张,PPT共六十二页,创作于2022年6月1 1、样品的稀释、样品的稀释(1 1)固体和半固体样品固体和半固体样品u称取称取25g25g 样品,放入盛有样品,放入盛有225ml225ml磷酸盐缓冲液或生理磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,盐水的无菌均质杯内,8 000r/min-10000r/min 8 000r/min-10000r/min 均均质质1 min-2 min 1 min-2 min,或放入盛有,或放入盛有225ml225ml磷酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均
8、质袋中,用拍击式均质器拍打生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 1 min-2 min min-2 min,制成,制成1:101:10 的样品匀液。的样品匀液。第一法第一法 大肠菌群大肠菌群MPNMPN计数法计数法第十三张,PPT共六十二页,创作于2022年6月(2 2)液体样品液体样品以无菌吸管吸取以无菌吸管吸取25m25mL L样品,置盛有样品,置盛有225m225mL L磷酸盐缓冲液或生理磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分棍匀,制成棍匀,制成1:101:10 的样品匀液。的样品匀液。(
9、3 3)样品匀液的样品匀液的pH pH 值应在值应在6.5-7.56.5-7.5 之间,必要时之间,必要时分别用分别用1mol/L 1mol/L 氢氧化钠(氢氧化钠(NaOH NaOH)或)或1 mol/L 1 mol/L 盐酸盐酸(HCI HCI)调节。)调节。第十四张,PPT共六十二页,创作于2022年6月第十五张,PPT共六十二页,创作于2022年6月(4 4)用用1m1mL L无菌吸管或微量移液器吸取无菌吸管或微量移液器吸取1:101:10 样品样品匀液匀液1m1mL L,沿管壁缓缓注入,沿管壁缓缓注入9m9mL L磷酸盐缓冲液或生理磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖
10、端不要触及盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用稀释液面),振摇试管或换用1 1 支支1m1mL L无菌吸管反复无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成吹打,使其混合均匀,制成1:1001:100 的样品匀液。的样品匀液。第十六张,PPT共六十二页,创作于2022年6月(5 5)、)、根据对样品污染状况的估计,按上述操作,根据对样品污染状况的估计,按上述操作,依次制成依次制成1010倍递增系列倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释稀释样品匀液。每递增稀释1 1 次,次,换用换用1 1 支支1m1mL L无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至
11、样品接种完毕,全过程不得超过接种完毕,全过程不得超过15 min15 min 。第十七张,PPT共六十二页,创作于2022年6月每个样品,选择每个样品,选择3 3 个个适宜的适宜的连续稀释度连续稀释度的样品匀液的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3 3 管管月桂月桂基硫酸盐胰蛋白胨基硫酸盐胰蛋白胨(LSTLST)肉汤)肉汤,每管接种,每管接种1m1mL L(如接(如接种量超过种量超过1m1mL L,则用双料,则用双料LSTLST肉汤)肉汤),361,361 培养培养24h24h2 2h h,观察倒管内是否有气泡产生,如未产气则继,观察倒管内
12、是否有气泡产生,如未产气则继续培养至续培养至48h2h 48h2h。2 2、初发酵试验初发酵试验第十八张,PPT共六十二页,创作于2022年6月记录在记录在24h 24h 和和48h 48h 内产气的内产气的LST LST 肉汤管数。肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性未产气者为大肠菌群阴性,产气者则进行复产气者则进行复发酵试验发酵试验。第十九张,PPT共六十二页,创作于2022年6月用接种环从所有用接种环从所有48h2h 48h2h 内内发酵产气的发酵产气的LST LST 肉汤管中分肉汤管中分别取培养物别取培养物l l环,移种于煌绿乳糖胆盐环,移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB(BGLB)肉汤管肉汤管
13、中,中,361 361 培养培养48h2h48h2h ,观察产气情况。,观察产气情况。产气者,产气者,计为大肠菌群阳性管计为大肠菌群阳性管。3 3、复发酵试验复发酵试验第二十张,PPT共六十二页,创作于2022年6月根据大肠菌群阳性管数,检索根据大肠菌群阳性管数,检索MPN MPN 表(见附录表(见附录B)B),报告报告每克(或毫升)样品中大肠菌群的每克(或毫升)样品中大肠菌群的MPN MPN 值值。注意:注意:当检样的量与表中的量有增加或减少时,表内的数也应相当检样的量与表中的量有增加或减少时,表内的数也应相应减少或增加。应减少或增加。4 4、大肠菌群最可能数(大肠菌群最可能数(MPN MP
14、N)的报告)的报告第二十一张,PPT共六十二页,创作于2022年6月第二十二张,PPT共六十二页,创作于2022年6月大肠杆菌大肠杆菌0157显色显色培养基上培养基上的菌落的菌落第二十三张,PPT共六十二页,创作于2022年6月在伊红美兰乳糖在伊红美兰乳糖琼脂(EMB)上)上第二十四张,PPT共六十二页,创作于2022年6月大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征典型菌落为红典型菌落为红色色,菌落周围有菌落周围有红色的胆盐沉淀红色的胆盐沉淀环。菌落直径为环。菌落直径为 2-3mm 或更大。或更大。第二十五张,PPT共六十二页,创作于2022年6月大肠菌群在结晶紫
15、中性红琼脂大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征上典型特征典型菌落为紫红典型菌落为紫红色色,菌落周围有菌落周围有红色的胆盐沉红色的胆盐沉淀环。菌落直淀环。菌落直径为径为 0.5mm 或更大。或更大。第二十六张,PPT共六十二页,创作于2022年6月大肠杆菌在大肠杆菌在MFC琼脂上的典型特征琼脂上的典型特征第二十七张,PPT共六十二页,创作于2022年6月第二十八张,PPT共六十二页,创作于2022年6月试验流程试验流程第二十九张,PPT共六十二页,创作于2022年6月1 1、样品的稀释样品的稀释按第一法中的稀释方法进行。按第一法中的稀释方法进行。第三十张,PPT共六十二页,创作于20
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