中药制剂分析第四章含量测定.ppt

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1、第四章 中药制剂的含量测定【目的要求目的要求】v掌握中药制剂含量测定的样品前处理方法及测定方法的掌握中药制剂含量测定的样品前处理方法及测定方法的效能指标。效能指标。v掌握可见掌握可见-紫外分光光度法、紫外分光光度法、TLCS、HPLC、GC在中在中药制剂分析中的应用。药制剂分析中的应用。v熟悉荧光分光光度法及原子吸收光度法在中药制剂分析熟悉荧光分光光度法及原子吸收光度法在中药制剂分析中的应用。中的应用。v了解双波长、三波长、差示、导数光谱法在中药制剂分了解双波长、三波长、差示、导数光谱法在中药制剂分析中的应用。析中的应用。药物分析学科1 样品的处理样品处理的主要作用样品处理的主要作用l释放被测

2、组分，制成稳定试样释放被测组分，制成稳定试样l除去杂质，纯化除去杂质，纯化l浓缩浓缩l试样形式符合测定的要求试样形式符合测定的要求一、样品的粉碎一、样品的粉碎目的目的取样均匀，提取完全取样均匀，提取完全粉碎设备粉碎设备粉碎机、研钵、匀浆机粉碎机、研钵、匀浆机 粒度大小合适，粒度大小合适，全部过筛全部过筛 防止污染或损失防止污染或损失药物分析学科1 样品的处理样品处理的主要作用样品处理的主要作用l释放被测组分，制成稳定试样释放被测组分，制成稳定试样l除去杂质，纯化除去杂质，纯化l浓缩浓缩l试样形式符合测定的要求试样形式符合测定的要求一、样品的粉碎一、样品的粉碎目的目的取样均匀，提取完全取样均匀，

3、提取完全粉碎设备粉碎设备粉碎机、研钵、匀浆机粉碎机、研钵、匀浆机 粒度大小合适，粒度大小合适，全部过筛全部过筛 防止污染或损失防止污染或损失药物分析学科1 样品的处理二、样品的提取二、样品的提取（一）冷浸法（一）冷浸法操作：操作：样品样品精密称定精密称定置容器内置容器内精密加入溶剂精密加入溶剂称定重量称定重量 浸泡（浸泡（1224h）称重称重补足重量补足重量测定测定测定方法：测定方法：全部测定法：过滤全部测定法：过滤滤液滤液蒸干蒸干定容定容测定测定（低浓）（低浓）部分测定法：过滤部分测定法：过滤滤液滤液取若干体积进行测定取若干体积进行测定（高浓）（高浓）优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：操作

4、简便，适用于热不稳定的样品，提取杂质较少，但是费操作简便，适用于热不稳定的样品，提取杂质较少，但是费时，费溶剂时，费溶剂药物分析学科掌握每种提取方法的操掌握每种提取方法的操作、优缺点及应用范围作、优缺点及应用范围1 样品的处理二、样品的提取二、样品的提取（二）回流提取法（二）回流提取法采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热提取采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热提取优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：提取效率高，提取时间短，为提取效率高，提取时间短，为0.52小时；提取小时；提取杂质较多杂质较多，不适用于热不稳定或具有挥发性的成分不适用于热不稳定或具有挥发性的成分（三）连续回

5、流提取（三）连续回流提取用索氏提取装置，少用混合溶剂，其余操作同回流提取法。用索氏提取装置，少用混合溶剂，其余操作同回流提取法。优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：提取效率高，所需溶剂少，提取提取效率高，所需溶剂少，提取杂质较少杂质较少操作简便；不适用于受热易分解的成分。操作简便；不适用于受热易分解的成分。药物分析学科1 样品的处理二、样品的提取二、样品的提取（四）超声提取法（四）超声提取法样品置容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取样品置容器中，加入提取溶剂，放入超声振荡器中进行提取 优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：提取效率高，速度快提取效率高，速度快30min；超声波可引起化学

6、成分的改变超声波可引起化学成分的改变（五）超临界流体提取法（五）超临界流体提取法（SFE）优点：优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性高、节省速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和光谱等分析仪器直接联用能与色谱和光谱等分析仪器直接联用 药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（1）沉淀法）沉淀法样品样品+沉淀剂沉淀剂 沉淀沉淀过滤过滤滤液滤液测定测定 沉淀沉淀重量法或溶解后测定重量法或溶解后测定药物分析学科处理样品的处理样品的核心核心复方

7、益母草口服液中水复方益母草口服液中水苏苏碱的含量碱的含量测测定定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（2 2）蒸馏法）蒸馏法适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、适用于具挥发性的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、丹皮酚等丹皮酚等最常用的水蒸气蒸馏法：最常用的水蒸气蒸馏法：v共水蒸馏法共水蒸馏法v通水蒸气蒸馏法通水蒸气蒸馏法v水上蒸馏法水上蒸馏法利用盐析作用，提高蒸馏效果利

8、用盐析作用，提高蒸馏效果药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（3 3）液液-液萃取法液萃取法直接萃取法直接萃取法l萃取剂的选择：萃取剂的选择：亲亲脂性有机溶脂性有机溶剂剂，如苯、，如苯、氯氯仿或乙仿或乙醚醚；弱弱亲亲脂性的溶脂性的溶剂剂，如乙酸乙，如乙酸乙酯酯、正正丁醇等丁醇等l多次萃取（多次萃取（3-43-4次）次）l调整水相酸度，提取有机酸、有机碱调整水相酸度，提取有机酸、有机碱l利用盐析作用，提高提取率利用盐析作用，提高提取率药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（3 3）液液-液萃取法液萃取法离子对萃取法离子对萃取法 BH+In-BH+

9、In-（水相）（水相）BH+In-（有机相）（有机相）适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃l水相酸度的控制水相酸度的控制l离子对试剂的选择离子对试剂的选择l有机溶剂的选择有机溶剂的选择药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（4 4）色谱法（层析法）色谱法（层析法）v分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱v操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱v装柱方法：湿法装柱、干法装柱装柱方法：湿法装柱、干法装柱v操作程序：操作程序：柱的活化；柱的活化；

10、上上样样；清洗；清洗；洗脱。洗脱。v微柱色谱（固相萃取）微柱色谱（固相萃取）v柱填料：柱填料：硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔硅硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭、聚酰胺、大孔硅 藻土、藻土、离子交换树脂、键合相硅胶离子交换树脂、键合相硅胶C C8 8、C C1818等等 药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（4 4）色谱法（层析法）色谱法（层析法）硅胶：酸性吸附剂硅胶：酸性吸附剂，适用于中性或酸性成分的层析，适用于中性或酸性成分的层析，强强烈保留碱性化合物烈保留碱性化合物v洗脱洗脱顺序：顺序：极性小极性小大大氧化铝：弱碱性氧化铝：弱碱性，分离一些碱性中草药成分，

11、不宜用于醛、酮、酸、内，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、酸、内酯等类型的化合物分离酯等类型的化合物分离中性氧化铝、酸性氧化铝中性氧化铝、酸性氧化铝：适用于中性、酸性成分的分离：适用于中性、酸性成分的分离键合相硅胶（键合相硅胶（C C1818或或ODSODS）：分分开开脂溶性和水溶性成分脂溶性和水溶性成分v洗脱洗脱顺序：顺序：极性极性大大小小药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（4 4）色谱法（层析法）色谱法（层析法）大孔树脂大孔树脂：分为极性（：分为极性（丙丙烯酰烯酰胺聚合物胺聚合物 ）和非极性（）和非极性（苯乙苯乙烯烯和二乙和二乙烯烯苯苯的共聚物的共聚物）型

12、）型非极性型（非极性型（XAD-2XAD-2等）：等）：分分开开脂溶性和水溶性成分脂溶性和水溶性成分 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗 聚聚酰酰胺胺：与溶与溶质质形成形成氢键氢键而而产产生吸附作用，常用于含酚、酸、生吸附作用，常用于含酚、酸、醌类药醌类药物物样样品液的品液的净净化分离化分离硅藻土、硅藻土、纤维纤维素素：以水基以水基质质液作液作为为固定相，与水不混溶的有机溶固定相，与水不混溶的有机溶剂为剂为流流动动相相的分配色谱的分配色谱药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（4 4）色谱法（层析法）色谱

13、法（层析法）离子交离子交换树换树脂脂：用于除去：用于除去样样品中的离子品中的离子及及萃取可离解化合物萃取可离解化合物(弱酸、弱酸、弱碱药物弱碱药物)（5 5）固相微萃取（）固相微萃取（SPMESPME）集萃取、浓缩、进样于一集萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理新方法体的样品前处理新方法药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（6 6）消化法消化法-测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素目的：破坏有机物，使无机物游离目的：破坏有机物，使无机物游离F湿法消化：湿法消化：硝酸硝酸-高高氯氯酸法酸法：适用于血，尿、：适用于血，尿、组织组织等生物等生物样样品和含品和含动动

14、植物植物药药制制剂剂的破坏，无机金属离子均的破坏，无机金属离子均为为高价高价态态。对对含氮含氮杂环类杂环类有机物破坏不有机物破坏不够够完全。完全。硝酸硝酸-硫酸法硫酸法：适用于大多数有机物的破坏。：适用于大多数有机物的破坏。与硫酸形成不溶性硫酸与硫酸形成不溶性硫酸盐盐的金属离子的的金属离子的测测定，不宜采有此法。定，不宜采有此法。硫酸硫酸-硫酸硫酸盐盐法法：常用于含砷或：常用于含砷或锑锑的有机的有机样样品的破坏，破坏后得到品的破坏，破坏后得到三价砷或三价砷或锑锑。药物分析学科1 样品的处理三、样品的分离纯化三、样品的分离纯化（6 6）消化法消化法-测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元

15、素目的：破坏有机物，使无机物游离目的：破坏有机物，使无机物游离F干法消化：干法消化：供试品供试品 灰分灰分 控制温度在控制温度在420420以下以下不适用于含易不适用于含易挥发挥发性金属（如汞、砷等，）有机性金属（如汞、砷等，）有机样样品的破坏。品的破坏。如果灰化不完全，可以加入硝酸如果灰化不完全，可以加入硝酸-水（水（1：3）或稀盐酸）或稀盐酸-水（水（1：3）水浴上蒸干后，继续小火灰化水浴上蒸干后，继续小火灰化药物分析学科灼烧灰化(+NaCO3/MgO)2 含量测定方法的验证需验证的分析项目需验证的分析项目1.鉴别试验；2.杂质定量或限度检查；3.3.原料或制剂中有效成分含量测定；原料或制

16、剂中有效成分含量测定；4.制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定；5.溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。药物分析学科2 含量测定方法的验证一、准确度一、准确度是指以测得结果与真实值之间的接近程度。由于真实值是未知是指以测得结果与真实值之间的接近程度。由于真实值是未知的，故常用回收率试验来表示。的，故常用回收率试验来表示。二、精密度二、精密度是指一种均匀样品经多次取样重复分析后，各次结果之间的符是指一种均匀样品经多次取样重复分析后，各次结果之间的符合程度。常用标准偏差或相对标准偏差表示。重复性、中间精合程度。常用标准偏差或相对标准偏差表示。重复性、中间精密度及重现性密度及重现性

17、药物分析学科2 含量测定方法的验证1.重复性重复性 在相同条件下在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次；或把被测物浓度当作三次；或把被测物浓度当作100%，至少测，至少测6次进行评价。次进行评价。2.中间精密度中间精密度 同一实验室同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分果的精密度。考察随机变动因素

18、的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。析人员、不同设备。3.重现性重现性 不同实验室不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。说明中。药物分析学科2 含量测定方法的验证三、专属性三、专属性是指在样品中存在干扰成分的情况下，分析方法能够准确，专一是指在样品中存在干扰成分的情况

19、下，分析方法能够准确，专一地测定分析物的能力。地测定分析物的能力。四、检测限四、检测限检测限是指在规定的实验条件下，分析方法能够检测（但不需要检测限是指在规定的实验条件下，分析方法能够检测（但不需要定量）样品中分析物的最低浓度。定量）样品中分析物的最低浓度。1非仪器分析目视法非仪器分析目视法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。2.信噪比法信噪比法药物分析学科2 含量测定方法的验证五、定量限五、定量限是指在规定的实验条件下和具有可接受的精密度和准确度前提是指在规定的实验条件下和具有可接受的精密度和准确度前提下，分析方

20、法能够测定样品中分析物的下，分析方法能够测定样品中分析物的最低浓度最低浓度。六、线性六、线性七、范围七、范围八耐用性八耐用性是指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的程度为常规检是指测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的程度为常规检验提供依据。衡量方法不受参数微小变差影响的能力。验提供依据。衡量方法不受参数微小变差影响的能力。药物分析学科2 含量测定方法的验证分析方法效能指标的要求分析方法效能指标的要求1、用于鉴别试验、用于鉴别试验：只对：只对专属性专属性、耐用性耐用性二项指标有所要求，其余二项指标有所要求，其余均无须要求均无须要求2、杂质测定或制剂中降解物测定、杂质测定或制剂中降解物测定

21、：当用于定量除：当用于定量除检测限不必要求检测限不必要求外，其余七项指标均应有所要求；用于限度检查只对外，其余七项指标均应有所要求；用于限度检查只对专属性专属性、检检测限测限、和、和耐用性耐用性有要求。有要求。3、用于原料药中主成分或制剂中、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定有效成分含量测定及溶出度测及溶出度测定，除了定，除了检测限和定量限外检测限和定量限外，其余均要求。，其余均要求。药物分析学科3 常用定量分析方法一、化学分析法一、化学分析法适用于适用于含量较高含量较高的成分及的成分及无机成分无机成分的测定的测定（一）重量分析（一）重量分析挥发法：如水分测定挥发法：如水分测定萃取法：

22、如冰片散中冰片的含量测定萃取法：如冰片散中冰片的含量测定沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定3 常用定量分析方法一、化学分析法一、化学分析法（二）滴定分析（二）滴定分析酸碱滴定法酸碱滴定法：、内酯类：、内酯类 沉淀滴定法沉淀滴定法测定生物碱、有机酸测定生物碱、有机酸银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物四苯硼钠法：四苯硼钠法：+生物碱生物碱白色沉淀白色沉淀配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物碱及法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物碱及Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量等矿物类制剂的

23、含量氧化还原滴定法氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等等3 常用定量分析方法二、可见二、可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（一）单波长分光光度法（一）单波长分光光度法1、吸收系数法（、吸收系数法（CHP最为常用）最为常用）例题左金丸的含测例题左金丸的含测 A=ECL（百分吸收系数，单位（百分吸收系数，单位g/100ml）v 朗伯朗伯-比尔定律：比尔定律：物质对物质对单色光单色光吸收特性与吸收特性与浓度、液层厚度浓度、液层厚度关系定律关系定律 2、对照品比较法、对照品比较法 对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（10010）3、标准

24、曲线法、标准曲线法3 常用定量分析方法二、可见二、可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（二）计算分光光度法（二）计算分光光度法1、双波长分光光度法、双波长分光光度法系数倍率法系数倍率法等吸收点法等吸收点法2、三波长分光光度法、三波长分光光度法讨论：计算分光光度法在中药及其制剂中的应用前景讨论：计算分光光度法在中药及其制剂中的应用前景双波长分光光度法双波长分光光度法 在单位时间内有两条波长不同的光束1和2交替照射同一个溶液，由检测器测出的吸收度是这两个波长下吸收度的差值A。A与被测定物质的浓度成正比，这个方法称双波长分光光度法。双波长分光光度法的关键是正确选择两波长1、2，要求被测组分D在两波长处

25、的A足够大，而干扰组分G和背景在两波长应有相同的吸光度(A=0)。为满足上述要求，一般是将2选在待测组分的最大吸收波长，1是选在干扰组分等吸收波长。此法可测定浑浊样品，也可测定吸收光谱相互重叠的混合物样品，也是当杂质使主峰产生肩峰时测定主峰物质的较好定量方法。三波长分光光度法三波长分光光度法v选定的三个波长在干扰物质的吸收光谱上应为一条直线。在三波长处分别测定混合物的吸光度A1、A2、A3，根据相似三角形的等比特性，可得下式：E1、E2、E3分别为待测组分在三个波长处的吸光系数，L为光程，Cx为待测组分浓度。m=2-3，n=1-2，可见A只与待测组分浓度有关。本法可有效消除干扰组分对待测组分测

26、定的干扰，尤其适用于浑浊样品分析。但三波长选择及结果计算较为费时。目前已有些紫外仪器装备了专用程序，自动完成三波长法的运算。vA=A1-K（A2+A3)3 常用定量分析方法三、薄层扫描法三、薄层扫描法TLCS（一）薄层吸收扫描法（一）薄层吸收扫描法光源：氘灯光源：氘灯(190-340nm)和和W灯灯(340-900nm 薄层板引起的散射现象（散射系数薄层板引起的散射现象（散射系数SX）标准曲线（标准曲线（Kubella-Munk曲线）弯曲曲线）弯曲校正（曲线校直法和计算机回归法）校正（曲线校直法和计算机回归法）（二）薄层荧光扫描法（二）薄层荧光扫描法光源：汞灯光源：汞灯(250-580nm)直

27、线式扫描，无需曲线校直直线式扫描，无需曲线校直药物分析学科3 常用定量分析方法三、薄层扫描法三、薄层扫描法TLCS（三）定量分析方法（三）定量分析方法1、方法学考察、方法学考察v工作曲线：工作曲线：检查所选散射参数检查所选散射参数SX是否适宜；是否适宜；考察工作曲线是否过原考察工作曲线是否过原点，以便确定是用外标一点法还是二点法测定；点，以便确定是用外标一点法还是二点法测定；确定点样量的线性范围。确定点样量的线性范围。v分离度：分离度：R1.0v重复性考察：重复性考察：RSD3%v准确度考察：准确度考察：95%105%2、定量方法、定量方法（讨论常用定量方法）（讨论常用定量方法）v外标法：一点

28、法、两点法、标准曲线法外标法：一点法、两点法、标准曲线法v内标法内标法药物分析学科3 常用定量分析方法三、薄层扫描法三、薄层扫描法TLCS健脾丸中熊果酸的含量测定健脾丸中熊果酸的含量测定含量测定含量测定 取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，加，精密称定，加水水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室温干燥至呈松软粉末状或低洗涤，在室温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器内，加温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器内，加乙醚乙醚适量，加热回流提取适量，加热

29、回流提取4小时，小时，提取液回收乙醚至干，残渣用提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚石油醚（3060）浸泡两次，每次）浸泡两次，每次10ml（浸泡约（浸泡约2分分钟），倾去石油醚，残渣加适量三氯甲烷钟），倾去石油醚，残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精密量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每称定，加无水乙醇制成每1ml含含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录录VI

30、B）试验，精密吸取供试品溶液）试验，精密吸取供试品溶液4ul与与6ul，对照品溶液，对照品溶液2ul与与4ul，分别交叉点于分别交叉点于同一硅胶同一硅胶G薄层板上薄层板上，以环已烷，以环已烷-三氯甲烷三氯甲烷-乙酸乙酯乙酸乙酯-冰醋酸（冰醋酸（20:5:8:0.5）为展开剂，）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，取出，加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长S=540nm，R=700nm，测量供试品吸收度

31、积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品含山楂以熊果酸（本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）计，小蜜丸每）计，小蜜丸每1g不得少于不得少于0.10mg；大蜜丸每丸不得少于大蜜丸每丸不得少于0.90mg。药物分析学科3 常用定量分析方法四、气相色谱法四、气相色谱法GC（一）应用范围（一）应用范围v挥发油及其它挥发性组分挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等v中药制剂含中药制剂含水水量、含量、含醇醇量量（二）系统适应性试验（二）系统适应性试验v理论塔板数理论塔板数 n5.54(t

32、R/W1/2)2 最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响v分离度分离度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)R1.5（两峰完全分离）（两峰完全分离）v重复性，相对标准偏差重复性，相对标准偏差RSD2.0(n=5)v拖尾因子拖尾因子T=W0.05h/2d1 (d1峰极大至峰前沿之间的距离峰极大至峰前沿之间的距离)1.05T0.95药物分析学科样品沸点范围样品沸点范围柱温柱温固定相配比固定相配比300400 200250 15%200300 150180 510%100200 各组分的平均各组分的平均沸点沸点2/3左右左右 1015%气体等

33、低沸点样品气体等低沸点样品 室温或室温或50下下 1525%3 常用定量分析方法四、气相色谱法四、气相色谱法GC（三）实验条件的选择（三）实验条件的选择1、固定相的选择、固定相的选择气固色谱硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等气固色谱硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等气液色谱烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（手性）气液色谱烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（手性）2、柱温的选择、柱温的选择药物分析学科宽沸程样品：宽沸程样品：程序升温法程序升温法3 常用定量分析方法四、气相色谱法四、气相色谱法GC（三）实验条件的选择（三）实验条件的选择3、载气的选择、载气的选择H2、He：流

34、速大，柱长，热导检测器：流速大，柱长，热导检测器N2：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器 流速：流速：2080ml/min4、其它条件的选择、其它条件的选择进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）进样口（汽化室）温度：样品的沸点或稍高于沸点，进样口（汽化室）温度：样品的沸点或稍高于沸点，30/50+T柱柱T汽汽 50+T沸点沸点检测室温度：检测室温度：30+T柱柱T检检T汽汽药物分析学科3 常用定量分析方法四、气相色谱法四、气相色谱法GC（三）实验条件的选择（三）实验条件的选择4、其它条件的选择、其它条

35、件的选择进样时间：进样时间：1秒以内秒以内进样量：进样量：理论允许最大进样量使下降的塔板数不超过理论允许最大进样量使下降的塔板数不超过10。气体：气体：0.11ml；液体：；液体：0.1-1l分流器分流分流器分流进样：1/101/100检测器：器：TCD,FID,NPD,ECD药物分析学科3 常用定量分析方法四、气相色谱法四、气相色谱法GC（四）含量测定方法（四）含量测定方法（例题见（例题见P84）1 1、内标法加校正因子、内标法加校正因子 求算校正因子求算校正因子 待测组分含量测定待测组分含量测定2 2、外标法、外标法3 3、面积归一化法、面积归一化法4 4、标准溶液加入法、标准溶液加入法药

36、物分析学科3 常用定量分析方法五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法HPLC（一）特点（一）特点分离效能高、分析速度快及应用范围广分离效能高、分析速度快及应用范围广（二）（二）适用范围适用范围挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类脂、核酸、维生素及无物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类脂、核酸、维生素及无机盐类机盐类（三）系统适应性试验（三）系统适应性试验药物分析学科3 常用定量分析方法五、高效液相色谱法五、高效液相色谱法HPLC（四）实验条件的选择（四）实验条件的选择色谱柱的选择（

37、固定相的选择）色谱柱的选择（固定相的选择）流动相的选择流动相的选择优级纯或色谱纯，脱气，过滤（优级纯或色谱纯，脱气，过滤（0.45m0.45m）部分含水溶剂：适用于分离中等极性、弱极性药物部分含水溶剂：适用于分离中等极性、弱极性药物非水溶剂：分离疏水性物质非水溶剂：分离疏水性物质 缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如蛋白质、肽及弱酸、弱碱类化合物。肽及弱酸、弱碱类化合物。洗脱方式洗脱方式：等度洗脱与梯度洗脱：等度洗脱与梯度洗脱检测器器：UVD,FD,ELSD,ECD,RID 药物分析学科3 常用定量分析方法五、高效液相色谱

38、法五、高效液相色谱法HPLC（五）含量测定方法（五）含量测定方法1、外、外标法法2、内、内标法法3、内加法、内加法4、归一化法一化法 例例题P90药物分析学科3 常用定量分析方法六、荧光分析法六、荧光分析法（一）基本原理（一）基本原理（二）适用范围（二）适用范围胺类、甾体、蛋白质、氨基酸、酶胺类、甾体、蛋白质、氨基酸、酶（三）测定方法（三）测定方法直接荧光法、制备荧光法、化学引导荧光法、直接荧光法、制备荧光法、化学引导荧光法、荧光淬灭法、胶束增敏荧光法荧光淬灭法、胶束增敏荧光法（四）优缺点（四）优缺点灵敏度高（灵敏度高（10101012g/ml）选择性好，干扰因素多，应用范围有限。选择性好，干

39、扰因素多，应用范围有限。S1S0激发光激发光荧光荧光振动弛豫振动弛豫药物分析学科3 常用定量分析方法七、原子吸收分光光度法七、原子吸收分光光度法原子吸收光谱（Atomic Absorption Spectroscopy，AAS)，是利用气态原子可以吸收一定波长的光辐射，使原子中外层的电子从基态跃迁到激发态的现象而建立的。由于各种原子中电子的能级不同，将有选择性地共振吸收一定波长的辐射光，这个共振吸收波长恰好等于该原子受激发后发射光谱的波长，由此可作为元素定性的依据，而吸收辐射的强度可作为定量的依据。AAS现已成为无机元素定量分析应用最广泛的一种分析方法。药物分析学科v此法是本世纪50年代中期出

40、现并在以后逐渐发展起来的一种新型的仪器分析方法，它在地质、冶金、机械、化工、农业、食品、轻工、生物医药、环境保护、材料科学等各个领域有广泛的应用。该法主要适用样品中微量及痕量组分分析。（一）基本原理一）基本原理A=K C 式中K为常数；C为试样浓度；I0v为原始光源强度；Iv为吸收后特征谱线的强度。按上式可从所测未知试样的吸光度，对照着已知浓度的标准系列曲线进行定量分析。（二）测定对象（二）测定对象呈原子状态的金属元素及部分非金属元素呈原子状态的金属元素及部分非金属元素（三）含测方法（三）含测方法标准曲线法标准曲线法标准加入法标准加入法习 题1、薄层扫描法方法学考察时作标准曲线的目的何在？、薄

41、层扫描法方法学考察时作标准曲线的目的何在？2、薄层扫描法测定中药制剂中有效成分含量时为何常用随行外标法？、薄层扫描法测定中药制剂中有效成分含量时为何常用随行外标法？3、简述、简述GC、HPLC建立中药制剂有效成分含量测定方法时系统适用性建立中药制剂有效成分含量测定方法时系统适用性试验的各项参数及具体指标。试验的各项参数及具体指标。4、试述、试述HPLC法测定中药制剂有效成分含量时实验条件及参数的选择。法测定中药制剂有效成分含量时实验条件及参数的选择。5、定量分析方案设计定量分析方案设计：丹参为某合剂君药，请分别以：丹参为某合剂君药，请分别以水提水提、醇提醇提制备制备工艺，设计工艺，设计HPLC法法测定制剂中丹参含量的分析方法。测定制剂中丹参含量的分析方法。药物分析学科