第07章--胺类药物的分析课件.ppt

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1、第七章第七章 芳香胺类药物的分析芳香胺类药物的分析制作人：温爱平制作人：温爱平芳胺类芳胺类 芳烃胺类（苯乙胺类和苯丙胺类）芳烃胺类（苯乙胺类和苯丙胺类）一、基本结构与主要性质一、基本结构与主要性质（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物 本类药物主要包括两类：本类药物主要包括两类：对氨基苯甲酸酯类对氨基苯甲酸酯类 酰胺类酰胺类第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析1.对氨基苯甲酸酯类药物对氨基苯甲酸酯类药物基本结构基本结构苯佐卡因苯佐卡因benzocaineProcaine hydrochloride 典型药物：典型药物：盐酸丁卡因盐酸丁卡因Tetracaine hydroch

2、loride盐酸氯普鲁卡因盐酸氯普鲁卡因Chloroprocaine hydrochloride 盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺Procainamide hydrochloride2.酰胺类药物酰胺类药物3.基本结构基本结构非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）对乙酰氨基酚（扑热息痛）paracetamol 典型药物：典型药物：醋氨醋氨苯砜苯砜acedapsone 盐酸利多卡因盐酸利多卡因Lidocaine hydrochloride 盐酸布比卡因盐酸布比卡因Bupivacaine hydrochloride 盐酸罗哌卡因盐酸罗哌卡因ropivacain

3、e hydrochloride HCI 盐酸妥卡尼盐酸妥卡尼Tocainide hydrochloride（二）（二）主要性质主要性质1.具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基，可用重氮化偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定含量，可与芳醛发生缩合反应，易氧化变色。2.酯键或酰胺键易水解（三）具脂烃胺侧链，弱碱性，可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别或非水碱量法测定含量。（四）游离碱易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。（六）UV（七）IR（五）某些特征取代基（如酚羟基）的反应二、鉴别试验（一）重氮化偶合反应芳香第一胺类鉴别反应直接：盐酸普鲁卡因、盐酸氯普盐酸氯普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺鲁卡因、苯佐卡因、盐

4、酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChP（2005）鉴别鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴别）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录反应（附录）取供试品约取供试品约50mg，加稀盐酸加稀盐酸1m1，必必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。色沉淀。间接：对乙酰氨基酚、非那西丁、对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯醋氨苯砜、贝诺酯 对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 ChP（2005）鉴别鉴别 （2）取本品约）取本品约0

5、.1g，加稀盐加稀盐酸酸5m1，置水浴中加热置水浴中加热40分钟，放冷；分钟，放冷；取取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液滴加亚硝酸钠试液5滴，摇滴，摇匀，用水匀，用水3ml稀释后，加碱性稀释后，加碱性-萘酚试萘酚试液液2m1，振摇，即显红色。振摇，即显红色。盐酸丁卡因分子结构中不具有芳伯胺基，不发生重氮化-偶合反应，但其结构中的芳香仲胺在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，形成N-亚硝基化合物的乳白色沉淀，可与具有芳伯胺基药物区别。（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚具有酚羟基，可与三氯化铁试液反应显蓝紫色。（三）与重金属离子反应（三）与重金属离子反应 1.与铜和钴离子反应与铜和钴离子反应 2羟肟酸铁反应羟肟酸铁

6、反应 ChP（2005）盐酸普鲁卡因胺分子结构中具有芳酰盐酸普鲁卡因胺分子结构中具有芳酰胺，可被浓过氧化氢氧化成羟肟酸。胺，可被浓过氧化氢氧化成羟肟酸。3与汞离子的反应与汞离子的反应（四）水解产物的反应1.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChP（2005）鉴别鉴别 （2）取本品约）取本品约0.1g，加水加水2ml溶解溶解后，加后，加10氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml，即生成白即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸

7、化，即析出白色沉淀。酸酸化，即析出白色沉淀。2.苯佐卡因苯佐卡因 ChP（2005）鉴别鉴别 （2）取本品约）取本品约0.1g，加氢氧化钠加氢氧化钠试液试液5m1，煮沸，即有乙醇生成；加碘试煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。的臭气。（五）制备衍生物测熔点（五）制备衍生物测熔点1三硝基苯酚衍生物三硝基苯酚衍生物 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 ChP（2005）鉴别鉴别 取本品取本品0.2g，加水加水20ml溶解。溶解。（1）取取溶溶液液10ml，加加三三硝硝基基苯苯酚酚试试液液10ml，即即生生成成沉沉淀淀；滤滤过过，沉沉淀淀用

8、用水水洗洗涤涤后后，干干燥燥，依依法法测测定定（附附录录C），熔熔点点为为228232，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。盐酸布比卡因盐酸布比卡因 ChP（2005）2.硫氰酸盐衍生物硫氰酸盐衍生物 盐酸丁卡因盐酸丁卡因 ChP（2005）鉴鉴别别 （1）取取本本品品约约0.1g，加加5%醋醋酸酸钠钠溶溶液液10ml溶溶解解后后，加加25%硫硫氰氰酸酸铵铵溶溶液液1ml，即即析析出出白白色色结结晶晶；滤滤过过，结结晶晶用用水水洗洗涤涤，在在80干干燥燥，依依法法测测定定（附附录录C），），熔点约为熔点约为131。盐酸布比卡因盐酸布比卡因 ChP（2005）鉴鉴别别 （2）取取本本品品，精精密密

9、称称定定，按按干干燥燥品品计计算算，加加0.01mol/L盐盐酸酸溶溶液液制制成成每每1ml中中含含0.40mg的的溶溶液液，照照分分光光光光度度法法（附附录录A）测测定定，在在263nm与与271nm的的波波长长处处有有最最大大吸吸收收；其其吸吸收收度度分分别别为为0.530.58与与0.430.48。醋氨苯砜醋氨苯砜 ChP（2005）max 在在 256nm 和和 284nm（六）（六）UV （七）（七）IR 盐酸布比卡因盐酸布比卡因 ChP（2005）鉴鉴别别 （3）本本品品的的红红外外光光吸吸收收图图谱谱与与对对照的图谱（光谱集照的图谱（光谱集324图）一致。图）一致。三、特殊杂质检

10、查三、特殊杂质检查（一）对乙酰氨基酚1.有关物质杂质来源中间体、副产物及分解产物对氯苯乙酰胺对氯苯乙酰胺 杂质对照品法杂质对照品法检查方法TLC其他杂质其他杂质 参比杂质对照品法参比杂质对照品法2.对氨基酚杂质来源中间体、水解产物反应原理检查方法对照法 取本品取本品1.0g，加甲醇溶液加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液化钠试液1m1，摇匀，放置摇匀，放置30min；如显如显色，与对乙酰氨基酚对照品色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基加对氨基酚酚50 g用同一方法制成的对照液比较，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（不得更深（0.005）。）

11、。对乙酰氨基酚各种制剂中对氨基酚的检查ChP（2005）均采用HPLC法。3.乙醇溶液澄清度与颜色乙醇溶液澄清度与颜色 主要检查生产中使用的铁粉，可能带入主要检查生产中使用的铁粉，可能带入产品中，致使乙醇溶液产生浑浊。产品中，致使乙醇溶液产生浑浊。颜色检查主要检查有色的氧化产物。颜色检查主要检查有色的氧化产物。（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查检查方法TLC杂质对照品法杂质来源水解产生 精密量取本品，加乙醇稀释使成为每精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中中含盐酸普鲁卡因含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每取对氨

12、基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含中含30 g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶合剂的硅胶H薄层板上，用苯薄层板上，用苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲甲醇（醇（14 1 1 4）为展开剂，展开后，取出晾干）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基苯对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸加冰醋酸5ml制成）喷雾制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑

13、点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。得更深。（三）盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质（三）盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和光解产物的检查和光解产物的检查USP（30）-NF（25）采用HPLC法进行限度检查（四）（四）盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查USP（30）-NF（25）采用毛细管电泳法进行检查（一）亚硝酸钠滴定法（一）亚硝酸钠滴定法 1.基本原理基本原理 具芳伯氨基的药物具芳伯氨基的药物四、含量测定四、含量测定具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺基药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基

14、化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。2.主要测定条件主要测定条件（1）加入适量）加入适量KBr加速反应加速反应 KBr为催化剂为催化剂NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2O 在盐酸存在下，重氮化反应的机在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：理为：（1）K1（2）K2 K1 300 K2 加加入入KBr，可可增增大大被被测测溶溶液液中中NO+的的浓度，所以能加快重氮化反应速度浓度，所以能加快重氮化反应速度（2）加过量的盐酸加速反应）加过量的盐酸加速反应在不同酸中重氮化反应的速度为：在不同酸中重氮化反应的速度为：HBrHCl H2SO4 HNO3 因因胺胺类类药

15、药物物的的盐盐酸酸盐盐较较硫硫酸酸盐盐的的溶溶解解度度大大，反反应应速速度度也也较较快快，所所以以多多采用盐酸，且盐酸应过量。采用盐酸，且盐酸应过量。盐酸用量盐酸用量理论上理论上:芳胺芳胺盐酸盐酸12mol 12mol 实际上实际上:芳胺芳胺盐酸盐酸12.512.56mol6mol 加入过量盐酸作用：加入过量盐酸作用：重氮化反应速度加快；重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；重氮盐在酸性溶液中稳定；防防止止生生成成偶偶氮氮氨氨基基化化合合物物，而而影影响响测定结果测定结果（3）室温条件下滴定）室温条件下滴定 1030（4）滴定速度：先快后慢）滴定速度：先快后慢 滴定管尖端插入液面下滴定管

16、尖端插入液面下2/3处，滴处，滴定液一次大部分放下，近终点时方定液一次大部分放下，近终点时方改为慢速滴定改为慢速滴定，须在最后一滴加入，须在最后一滴加入后，要搅拌后，要搅拌1 15 5分钟，再判断终点分钟，再判断终点是否真正到达。是否真正到达。3.指示终点的方法指示终点的方法（1）永停滴定法）永停滴定法 ChP（2005）永停滴定法（附录永停滴定法（附录A）用作重氮化法的终点指示时，调节用作重氮化法的终点指示时，调节R1使加使加于电极上的电压约为于电极上的电压约为50mV。取供试品适量，精取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml与盐酸

17、溶液（与盐酸溶液（12）15ml，而后置电磁搅而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾2g，插入铂插入铂铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液（处，用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L或或0.05mol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。然偏转，并不再回复，即为滴定

18、终点。（2）电位法电位法 USP（29）（3）外指示剂法）外指示剂法 KI淀粉糊剂或试纸淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O（4）内指示剂法内指示剂法 中性红中性红 不可逆指示剂不可逆指示剂4.测定方法测定方法 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChP（2005）取本品约取本品约0.6g，精密称定，照永停滴精密称定，照永停滴定法（附录定法（附录A），），在在1525，用亚，用亚硝酸钠滴定液（硝酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液（亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L）相当于相当于27.28mg的的C13H20N2O2HCl

19、（二）非水溶液滴定法（二）非水溶液滴定法 盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、盐盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、盐酸妥卡尼和盐酸布比卡因分子结构中，酸妥卡尼和盐酸布比卡因分子结构中，有有脂烃胺侧链，具弱碱性，脂烃胺侧链，具弱碱性，ChPChP采用非采用非水滴定法测定含量。水滴定法测定含量。本类药物为盐酸盐，故滴定前应加本类药物为盐酸盐，故滴定前应加醋酸汞溶液，以消除盐酸对滴定的干扰醋酸汞溶液，以消除盐酸对滴定的干扰 盐酸利多卡因盐酸利多卡因 ChP（2005）取本品约取本品约0.2g，精密称定，加冰醋精密称定，加冰醋酸酸10ml溶解后，加醋酸汞试液溶解后，加醋酸汞试液5ml与结与结晶紫指示液晶紫指示液1滴，用

20、高氯酸滴定液滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液显绿色，并将滴定至溶液显绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每滴定结果用空白试验校正。每1ml高氯高氯酸滴定液（酸滴定液（0.1mol/L）相当于相当于27.08mg的的C14H22N2OHCl（三）紫外分光光度法（三）紫外分光光度法对乙酰氨基酚在对乙酰氨基酚在0.4氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液中，于中，于257nm波长处有最大吸收，其紫波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。剂的含量测定。ChP（2005）采用百分吸收系数法（采用百分吸收系数法（）测定其）测定其原料、片剂、咀

21、嚼片、注射液、原料、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂及胶囊剂栓剂及胶囊剂的含量。的含量。对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 ChP（2005）取取本本品品约约40mg，精精密密称称定定，置置25ml量量瓶瓶中中，加加0.4氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液50ml溶溶解解后后，加加水水至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取5m1，置置100ml量量瓶瓶中中，加加0.4氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液10m1，加加水水至至刻刻度度，摇摇匀匀，在在257nm的的波波长长处处测测定定吸吸收收度度，按按C8H9NO2的的吸吸收收系系数数 为为715 计计算算，即得即得。原料药原料药吸收系数法吸收系数法USP（30）NF(25):对照

22、法对照法 溶剂：甲醇溶剂：甲醇-水水 测定波长：测定波长：244nm244nm（四）（四）HPLC法法 对乙酰氨基酚泡腾片对乙酰氨基酚泡腾片 ChP（2005）色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：十色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸盐缓冲液（酸盐缓冲液（pH4.5）甲醇（甲醇（80：20）；检）；检测波长：测波长：254nm。理论板数按对乙酰氨基酚。理论板数按对乙酰氨基酚计算不低于计算不低于5000，对乙酰氨基酚与对氨基酚，对乙酰氨基酚与对氨基酚的分离度应符合要求。的分离度应符合要求。测定方法：外标法测定方法：外标法

23、98：133盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有（AB）A.重氮化偶合反应B.羟肟酸铁盐反应C.氧化反应D.磺化反应E.碘化反应97：137采用亚硝酸钠法测定含量的药物有（CD）A.苯巴比妥B.盐酸丁卡因C苯佐卡因D.醋氨苯砜E.盐酸去氧肾上腺素95：85下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者（A）A.乙酰水杨酸B.对氨基水杨酸钠C.对乙酰氨基酚D.普鲁卡因E.苯佐卡因96：81（99：72）.亚硝酸钠滴定法中，加KBr的作用是（B）A.添加BrB.生成NO+BrC生成HBrD.生成Br2E.抑制反应进行95：75中国药典（2005年版）所收载的亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为（B）A.电位法B.

24、永停法C.外指示剂法D.内指示剂法E.自身指示剂法96：127亚硝酸钠滴定法中，可用于指示终点的方法有（BCDE）A.自身指示剂法B.内指示剂法C.永停法D.外指示剂法E.电位法例1.ChP（2005）亚硝酸钠滴定法测定对氨基水杨酸钠的含量时，指示滴定终点的方法为（C）A.自身指示终点法B.电位法指示终点C.永停滴定法D.氧化还原指示剂法E.酸碱指示剂法例2.以下那种药物中应检查对氨基苯甲酸（E）A.盐酸普鲁卡因B.盐酸普鲁卡因胺C.注射用盐酸普鲁卡因D.盐酸普鲁卡因胺片E.盐酸普鲁卡因注射液例3.盐酸普鲁卡因采用亚硝酸钠滴定法测定含量时的反应条件是（ABCDE）A.强酸B.加入适量溴化钾C.

25、室温（1030）下滴定D.滴定管尖端深入液面E.永停法指示终点第二节第二节 苯乙胺类药物的分析苯乙胺类药物的分析一、结构与性质一、结构与性质（一）基本结构与典型药物（一）基本结构与典型药物苯苯乙胺类药物的基本结构乙胺类药物的基本结构*常见的苯乙胺类药物常见的苯乙胺类药物盐酸克仑特罗盐酸克仑特罗硫酸沙丁胺醇硫酸沙丁胺醇一、结构与性质一、结构与性质1.脂烃胺基侧链，显弱碱性脂烃胺基侧链，显弱碱性 2.酚酚羟羟基基特特性性 本本类类药药物物结结构构中中具具邻苯二酚或苯酚结构，易易氧氧化化变变色，可发生三氯化铁反应色，可发生三氯化铁反应 3.具手性碳原子，具旋光性具手性碳原子，具旋光性 5.UV5.U

26、V 6.IR 6.IR 7.7.取取代代基基：具具芳芳伯伯氨氨基基的的盐盐酸酸克克仑仑特特罗罗可可用用重重氮氮化化偶偶合合反反应应鉴鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。别、亚硝酸钠滴定法测定含量。4.溶解性溶解性 游离碱难溶于水，易游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。溶于有机溶剂，其盐可溶于水。二、鉴别试验二、鉴别试验（一）三氯化铁反应（一）三氯化铁反应 因因结结构构中中具具有有酚酚羟羟基基，可可与与三三氯氯化化铁铁显显色色，加加入入碱碱性性溶溶液液后后，随随即即显显紫紫色色或或紫紫红色。红色。Ar-OHFeCl3络合显色络合显色 碱液碱液紫色或紫红色紫色或紫红色。(二）甲醛硫酸反应二）甲

27、醛硫酸反应 在此试剂中形成醌式结构而显色。在此试剂中形成醌式结构而显色。药药 物物 三氯化铁三氯化铁 甲醛硫酸甲醛硫酸 肾上腺素肾上腺素 0.1mol/LHCl0.1mol/LHCl显绿色显绿色,加氨试液显红紫红加氨试液显红紫红 红色红色重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素 绿色绿色,加加NaCONaCO3 3试液显紫色红色试液显紫色红色 淡红色淡红色盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 紫色紫色 玫瑰红玫瑰红橙红橙红棕红棕红盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 深绿色深绿色,加加5 5NaCONaCO3 3试液显蓝紫色红色试液显蓝紫色红色 棕色棕色暗紫色暗紫色（三）（三）氧化反应氧化反应本本类类

28、药药物物多多具具有有酚酚羟羟基基，易易被被碘碘、过过氧氧化化氢氢、铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。铁氰化钾等氧化剂氧化而呈现不同的颜色。在偏酸性条件下：在偏酸性条件下：可区别肾上腺素和重酒石酸去甲肾上腺素。而在pH6.5的缓冲液条件下，三种药物均可被碘氧化产生红色，无法区别。（四）紫外分光光度法与红外分光光度法中国药典（2005年版）收载的本类药物采用紫外吸收光谱进行鉴别的药物见表7-3.中国药典（2005年版）大多数本类药物均采用红外吸收光谱作为鉴别方法之一。（五）与亚硝基铁氰化钠反应（五）与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪伯氨基的专属反应反应）脂肪伯氨基的专属反应可用于可用

29、于重酒石酸间羟胺重酒石酸间羟胺鉴别。鉴别。（六）双缩脲反应（六）双缩脲反应 侧链具有氨基醇结构侧链具有氨基醇结构 是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别盐酸麻黄碱，盐酸伪麻黄碱鉴别盐酸去氧肾上腺素在相同条件下，加硫酸铜和氢氧化钠后，即显紫色；但加入乙醚后，乙醚层不显色。可与盐酸麻黄碱区别。三、特殊杂质检查 检查方法检查方法 采用采用UV法检查：法检查：比较法比较法 （一）酮体的检查 杂质来源杂质来源 本类药物在生产过程中多采用本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮酮体氢化制得，若氢化不完全，易引入酮体杂质。体杂质

30、。检检查查原原理理 利利用用酮酮体体在在310nm波波长长处处有有最最大大吸吸收收，而而药药物物本本身身在在此此波波长长处处几几乎乎没没有有吸吸收收，规规定定一一定定浓浓度度溶溶液液在在310nm波波长长处处的的吸吸收收度度限限制制酮酮体体的的量。量。例如：肾上腺素本项检查例如：肾上腺素本项检查 配配2.0mg/ml =310nm A0.05 2.0mg/ml =310nm A0.05 盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 配配2.0mg/ml =310nm A0.022.0mg/ml =310nm A0.02 盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素 配配2.0mg/ml =310nm A0.152.0

31、mg/ml =310nm A0.15（二）有关物质检查二）有关物质检查 ChP（2005）盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇、硫酸盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林特布他林TLC 盐酸苯乙双胍盐酸苯乙双胍PC 盐酸氨溴索盐酸氨溴索HPLC 1.盐酸氨溴索的检查方法盐酸氨溴索的检查方法对照样品制备：本品对照样品制备：本品供试品溶液供试品溶液对照溶液对照溶液供试样品制备：本品供试样品制备：本品甲醇溶解甲醇溶解加甲醛溶液加甲醛溶液加热加热吹干溶剂吹干溶剂用水和流动相溶解用水和流动相溶解HPLC分析分析色谱条件：色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN(50:50

32、);248 nm分析：对照溶液主成分峰为满量程的分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录，记录至主成分峰保留时间的至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。分之一。2.盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查PCPC法法 样品制备：本品甲醇溶解即得样品制备：本品甲醇溶解即得 展开：展开：7.550 cm，EtOAc-ethanol-water (6:3:1)显色：显色：10铁氰化钾铁氰化钾10亚硝基铁氰化亚硝基铁氰化 钠钠10NaOH 检测

33、：剪下显色斑点后甲醇萃取用检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用UV法法测定测定3.硫酸特布他林的检查方法硫酸特布他林的检查方法 检查方法：检查方法：TLC中高低浓度对中高低浓度对比法比法 四、含量测定四、含量测定（一）非水溶液滴定法（一）非水溶液滴定法 原料药原料药脂烃胺基侧链，显弱碱性脂烃胺基侧链，显弱碱性。测定条件：溶剂：冰醋酸或冰醋酸+醋酐滴定剂：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示终点：指示剂（结晶紫、萘酚苯甲醇）电位法加醋酸汞试液：消除盐酸盐的干扰示例：硫酸沙丁胺醇的测定ChP（2005）溶剂：冰醋酸+醋酐加入醋酐可提高其碱性，使终点突跃明显，但应注意防止氨基被乙酰化，在低温时可防止乙酰化

34、，所以加入冰醋酸溶解样品后，应在放冷的条件下再加醋酐。有机碱的硫酸盐，可直接滴定，但只能滴定至HSO4-（二）溴量法（二）溴量法 本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法。素及其注射液用此法。基本原理基本原理：利用药物分子中的苯酚结利用药物分子中的苯酚结构，在酸性溶液中与过量的溴定量发构，在酸性溶液中与过量的溴定量发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可计算供试品的含量。量，即可计算供试品的含量。以盐酸去氧肾上腺素为例：以盐酸去氧肾上腺素为例：

35、反应摩尔比为反应摩尔比为1 3Br22KI2KBrI2I22Na2S2O32NaINa2S4O6基本操作：供试品基本操作：供试品精密称定精密称定加水溶解加水溶解后精密加后精密加溴滴定液溴滴定液盐酸盐酸放置并振摇放置并振摇加碘化钾加碘化钾振摇振摇用用Na2S2O3滴定至滴定至近终近终点点加淀粉指示液加淀粉指示液继续滴定至蓝色消失继续滴定至蓝色消失同时进行同时进行空白实验空白实验（三）提取酸碱滴定法（三）提取酸碱滴定法 硫酸苯丙胺及其制剂硫酸苯丙胺及其制剂盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂依据性质 基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶

36、于水，而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适当而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适当的有机溶剂萃取，提取液蒸干后用中性乙醇溶解，的有机溶剂萃取，提取液蒸干后用中性乙醇溶解，用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标准酸溶用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标准酸溶液，用标准碱溶液进行回滴。液，用标准碱溶液进行回滴。碱化碱化有机溶剂提取有机溶剂提取（四）紫外分光光度法与比色法（四）紫外分光光度法与比色法 UV法法：基基于于本本类类药药物物有有苯苯乙乙胺胺基基本本 结结 构构，具具 有有 紫紫 外外 特特 征征 吸吸 收收，ChP（2005）对对该该类类药药物物的的一一些些制制剂剂采采用用U

37、V法法测测定定含含量量。包包括括：盐盐酸酸异异丙丙肾肾上上腺腺素素注注射射液液、硫硫酸酸沙沙丁丁胺胺醇醇注注射射液液及及其其胶胶囊囊、重重酒酒石石酸酸间间羟羟胺胺注射剂等。注射剂等。比色法：比色法：利用本类药物分子结构中利用本类药物分子结构中芳伯氨基芳伯氨基，可发生重氮化可发生重氮化偶合反应显色偶合反应显色例如：盐酸克仑特罗栓例如：盐酸克仑特罗栓 ChPChP（20052005）对照法定量对照法定量 也可利用分子结构中的也可利用分子结构中的酚羟基可与亚酚羟基可与亚铁离子配位显色。铁离子配位显色。例如：盐酸多巴胺注射液的测定例如：盐酸多巴胺注射液的测定（五）（五）HPLC法法 广广泛泛用用于于本

38、本类类药药物物及及其其制制剂剂的的含含量量测定。测定。硫酸沙丁胺醇片的测定：硫酸沙丁胺醇片的测定：ChP（2005）色谱柱：色谱柱：C18 流流 动动 相相：磷磷 酸酸 二二 氢氢 钠钠 溶溶 液液（pH3.100.05）甲醇（甲醇（85：15）检测波长：检测波长：276nm 定量方法：外标法定量方法：外标法例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为（D）A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛硫酸试液E.茚三酮试液例2.盐酸异丙肾上腺素的检查项目是（E）A.有关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体第三节：苯丙胺类药物的分析第三节：苯丙胺类药物的分析一、基本结构与主要性质一、基本结构与

39、主要性质ACE抑制剂抑制剂（血管紧张素转化酶）（血管紧张素转化酶）马来酸依那普利（马来酸依那普利（enalapril maleate）盐酸贝那普利盐酸贝那普利(benazepril hydrochloride)典型药物典型药物西拉普利西拉普利 （cilazapril）赖诺普利赖诺普利 (lisinopril)雷米普利（ramipril）盐酸喹那普利盐酸喹那普利Quinapril hydrochloride主要性质主要性质1、酸碱性：、酸碱性：分子中含有分子中含有-COOH，显酸性；含，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性有烃氨链，显弱碱性2、氨基酸特性、氨基酸特性：结构是脯氨酸的衍生物结构是脯氨酸的衍

40、生物3、光学活性：、光学活性：分子中含有不对称中心，具有分子中含有不对称中心，具有旋光性旋光性4、水解特性：、水解特性：本类药物大多是本类药物大多是Pre-drug，在体，在体内转化为活性代谢物内转化为活性代谢物二、鉴别试验二、鉴别试验一、物理与化学鉴别法一、物理与化学鉴别法 (马来酸依那普利）马来酸依那普利）1、熔点测定法、熔点测定法BP2、高锰酸钾反应、高锰酸钾反应ChP 红色消失（氧化还原红色消失（氧化还原反应）反应）3、溴间苯二酚反应：、溴间苯二酚反应：BP 先进行溴代反应，先进行溴代反应，使溴颜色消失使溴颜色消失，再与间苯二酚反应，再与间苯二酚反应，显棕红色显棕红色4、羟胺三氯化铁反

41、应：、羟胺三氯化铁反应：BP 先进行羟肟酸的先进行羟肟酸的生成（羟胺甲醇液生成（羟胺甲醇液KOH乙醇液）乙醇液）FeCl3 显棕红色显棕红色二、旋光法二、旋光法三、光谱与色谱法鉴别三、光谱与色谱法鉴别三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查1、马来酸依那普利有关物质的检查：、马来酸依那普利有关物质的检查：依那依那普利拉依那普利双酮普利拉依那普利双酮采用采用HPLC法检查法检查2、西拉普利中有关物质的检查：、西拉普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质四个主要杂质杂质杂质A-TLC法检查（硅胶法检查（硅胶G板，目视比较），板，目视比较），不得超过不得超过0.1BP杂质杂质B、C、D及其它杂质

42、及其它杂质HPLC法，分别法，分别不得超过不得超过0.5、0.1、0.2和和0.1BPTLC法检查法检查A杂质杂质制备样品液：供试品溶液（制备样品液：供试品溶液（40 mg/ml）、对照品溶液）、对照品溶液a（40 g/ml)、对照溶液、对照溶液b（0.5 mg/ml）点样与展开：硅胶点样与展开：硅胶G板，板，HAc-H2O-n-Hex-MeOH-EtOAc(1:1:3:3:12)显色：显色：KBiI4-HAc(1:10)比较：比较：供试品如显杂质供试品如显杂质A斑点，颜色斑点，颜色对照液对照液a的主斑点。的主斑点。要要求对照液求对照液b显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。显示两个清晰分开的斑

43、点时，结果有效。HPLC法检查法检查B、C、D和其它杂质和其它杂质样品测定液配制：样品测定液配制：供试品溶液（供试品溶液（0.5 mg/ml)、对照溶液、对照溶液a(2.5 g/ml）、对照溶液）、对照溶液b（杂质（杂质D对照品对照品0.5 mg/ml）色谱条件：色谱条件：ODS 色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流速速1.0ml/min，检测波长：，检测波长：214nm色谱系统适用性：色谱系统适用性：分别进样对照溶液分别进样对照溶液a和和b，使对照溶液，使对照溶液a的的主成分峰为满量程的主成分峰为满量程的50，在对照溶液，在对照溶液b中西那普利与杂质中西那普利

44、与杂质D的分离度不得低于的分离度不得低于2.5。测定与评判：测定与评判：1、色谱图记录至峰、色谱图记录至峰A被洗脱为止被洗脱为止2、杂质、杂质B、C、D与西那普利的相对保留时间分与西那普利的相对保留时间分 别为别为0.6、1.6、0.93、峰面积、峰面积杂质杂质B0.50.5（对照液（对照液a a的主峰面积）的主峰面积）峰面积峰面积杂质杂质C0.1（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积）峰面积峰面积杂质杂质D0.2（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积）峰面积峰面积其它其它0.1（对照液（对照液a的主峰面积）的主峰面积）（三）残留溶剂的测定（三）残留溶剂的测定1、马来酸依那普利中残留溶剂乙

45、腈的检查、马来酸依那普利中残留溶剂乙腈的检查 capillary GC法法0.0410.041样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解100mg/ml对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40g/ml分析方法：分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，为固定液的毛细管柱，FID检测器，检测器，程序升温洗脱：程序升温洗脱：Injection tem.:200,detector tem.:250,injection volume:1l2、盐酸喹那普利中丙酮、乙腈、二氯甲烷、盐酸喹那普利中丙酮、乙腈、二氯甲烷、甲苯的检甲

46、苯的检-GC法法色谱系统适用性试验色谱系统适用性试验测定测定结果计算：结果计算：乙腈和丙酮乙腈和丙酮0.250.25二氯甲烷和甲苯二氯甲烷和甲苯0.10.1制备标准溶液所取某溶制备标准溶液所取某溶剂的重量剂的重量供试品量供试品量供试品溶液的色谱峰面积供试品溶液的色谱峰面积标准溶液色谱峰面积标准溶液色谱峰面积四、含量测定四、含量测定（一）酸碱滴定法：利用本类药物结构中的（一）酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析含量分析1、非水滴定法、非水滴定法 马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰

47、醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液高氯酸为滴定液2、水溶液中的滴定、水溶液中的滴定马来酸依那普利：供试品马来酸依那普利：供试品新沸过的冷水溶解新沸过的冷水溶解NaOH滴定滴定电位法指示终点电位法指示终点3、在醇、在醇-水混合溶液中滴定水混合溶液中滴定 供试品供试品甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）米普利和西拉普利）（二）（二）HPLC法法举例说明：举例说明：u 马来酸依那普利片的含量测定马来酸依那普利片的含量测定色谱条件：色谱条件：C8柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相

48、，检测波长流动相，检测波长215 nm，柱温，柱温50色谱系统适用性：色谱系统适用性：n300，T2.0,主峰与其主峰与其它杂质峰的它杂质峰的R4.0进样与计算：进样与计算：20 l，外标法定量，外标法定量u 盐酸喹那普利的含量测定盐酸喹那普利的含量测定色谱条件：色谱条件：CN柱柱guard column(3cm 4.6 mm,5 m)，乙腈水甲磺酸（，乙腈水甲磺酸（28：72：0.1）为流动相，流速）为流动相，流速1.5 ml/min，检测波长，检测波长214 nm色谱系统适用性：主峰与有关物质色谱系统适用性：主峰与有关物质A的的R1.751.75，主峰与，主峰与B B的的R3.5R3.5，

49、n550n550，RSD2.0%(n=5)RSD2.0%(n=5)定量方法：外标法定量方法：外标法三、体内药物分析三、体内药物分析MassspectrawereobtainedusingaFinniganTSQQuantumdiscoverymassspectrometer(USA)andoperatingfittedwiththeelectrosprayionization(ESI)condition.Thepositiveionselectedreactionmonitoring(SRM)modewaschosenforthequantification.Theelectrosprayvo

50、ltagewasfixedat3500eVandtheHPLCfluidwasnebulizedusingN2andcapillarytemperaturewas300C.Thesheathandauxiliarygaspressurewere35and10eV,respectively.ThepeakareasoftheLCMS/MStransitionfromm/z 417.3M+H+ion,toaproductionatm/z234.3bySRMwithcollisionenergyof28eVwasmeasuredforramipril.Ramiprilatandtheinternal