第六章微生物的生长与控制课件.pptx

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1、微生物学及实验第六章第六章 微生物的生长与控制微生物的生长与控制 第第一节一节 微生物的纯培养及生长测定微生物的纯培养及生长测定方法方法微生物的生长：当微生物细胞吸收营养物质后，通过代谢作用，合成自身的细胞组成成分，使菌体质量增加、体积增大的现象。微生物的繁殖:当细胞生长到一定程度时就开始分裂形成新个体，使个体数目增加纯培养：微生物学中把在实验条件下，从一个细胞或同种细胞群繁殖得到后代称为纯培养：在无菌（无活的微生物存在）条件下通过分离和培养就可获得只含一种微生物的培养基的即纯培养一、获得纯培养的方法（一）纯培养的分离技术1、平板划线法平板：人们通常把灭菌的培养基倾倒在无菌的培养皿上制成固体培

2、养基，称为平板平板划线法的演示：平板划线的线型及划法：分区划线和连续划线平板划线培养后的菌落2、稀释法稀释的流程：（1）稀释倒平皿法：菌料稀释与45左右培养基混匀倒入培养皿培养（2）稀释混合平板法：热培养基倒入培养皿凝固，制成平板菌料稀释吸取1mL注入有培养基的平板中加盖摇动培养（3）稀释涂布平板法热培养基倒入培养皿凝固，制成平板菌料稀释吸取1mL注入有培养基的平板中用无菌涂布棒涂匀培养3、单细胞挑取法将显微镜挑取器安装在显微镜上，把一滴待分离的微生物悬液置于载玻片上，在显微镜下，用显微镜挑取器上的极细的毛细吸管对准单个细胞挑取，再接种于培养基上培养后即可得到纯培养。操作技术难度大4、选择培养

3、基分离法配制成适合某种微生物生长而限制其他微生物生长的各种选择培养基自学P78第五段，回答下列问题：从土壤中分离放线菌，在培养基中加入（）马丁培养基分离霉菌，在培养基中加入（）分离病原菌，接种于（）分离有芽孢细菌时，应（）分离霉菌时，（）为提高分离概率，可在特定环境中先进行富集培养从土壤中分离放线菌，在培养基中加入（）10%酚 抑制细菌和霉菌马丁培养基分离霉菌，在培养基中加入（）链霉素 抑制细菌分离病原菌，接种于（）敏感动物、宿主组织分离有芽孢细菌时，应（）分离前先将样品高温处理，杀死营养菌体保留芽孢分离霉菌时，（）用过滤法除丝状菌体而保留孢子为提高分离概率，可在特定环境中先进行富集培养（二）

4、培养方法要培养微生物需要提供营养物质、适宜温度、pH等培养基条件，还要防止染菌1、固体培养（1）好氧菌的培养实验室中培养方法：试管斜面 培养皿平板 茄形瓶 克氏扁瓶生产中培养方法：曲法培养（固体培养在摊平）、（2）厌氧菌的培养需要特殊培养基：加入还原剂（半胱氨酸、Vc）、氧化-还原势的指示剂（刃天青）需要特殊的培养基装置：主要有：高层琼脂柱培养法 Hungate滚管技术 厌氧培养皿 厌氧罐技术 厌氧手套2、液体培养（1）好氧菌的培养培养措施：浅层液体培养、摇床振荡培养、深层通气搅拌培养。实验室进行好氧菌液体培养的常用方法：试管液体培养、锥形瓶浅层培养、摇瓶培养生产中好氧菌液体培养方法：浅盘培养

5、、发酵罐深层液体培养（2）厌氧菌的液体培养实验室中：深层液体培养，加有机还原剂（巯基乙酸、半胱氨酸、Vc或疱肉）、无机还原剂（铁丝），用凡士林-石蜡层封口；厌氧罐和厌氧手套培养生产中：液体培养严格厌氧，仅一种发酵，丙酮丁醇梭菌的丙酮丁醇二、微生物纯培养生长的测定方法1、以细胞数目变化为指标测定微生物的生长（1）显微镜直接计数法（全菌计数法、血球板计数法）（测单细胞）器材：血球计数板（细菌计数器、血细胞计数器）、显微镜优点：简便、快捷、最常用缺点：无法区别死菌和活菌血球计数板（2）比浊法（测单细胞）原理：菌悬液中单细胞微生物的细胞浓度与其浑浊度成正比，与透光度成反比。器材：分光光度计、浊度计测出

6、透光度或光密度要求：菌悬液颜色要浅，颜色深时影响测定结果（3）平板菌落计数法（测单细胞，不适合霉菌多细胞）多级稀释先三个稀释级数接种到平板培养基上培养长菌落计数（4）稀释培养法：多级稀释，直至无菌选取最后几个稀释度的菌液培养菌落计数（5）薄膜过滤计数法微孔过滤膜过滤菌体被阻留在滤膜上固体培养基上培养菌落计数2、以细胞物质量为指标测定微生物的生长（1）称重法：直接称量样品的湿重和干重方法：离心沉淀分离菌体洗净称湿重烘干称干重（为湿生的20-25%）（2）含氮量测定法：原理：因细胞的主要物质是蛋白质方法：分离菌体洗净凯氏微量定氮法测含氮量乘以6.25微生物粗蛋白质的含量（3）DNA含量测定法：通过测定荧光反应强度求得DNA得细胞物质的量计算出细菌数量