第十七章螺旋体.ppt

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1、第十七章 螺 旋 体 螺旋体是弯曲呈螺旋状、运动活泼的原螺旋体是弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。结构与细菌相似，如核细胞型微生物。结构与细菌相似，如有细胞壁、原始核，以二分裂方式繁殖，有细胞壁、原始核，以二分裂方式繁殖，对抗生素敏感等。对抗生素敏感等。其中致病性螺旋体主要有钩端螺旋体属、其中致病性螺旋体主要有钩端螺旋体属、疏螺旋体属、密螺旋体属等疏螺旋体属、密螺旋体属等3 3个属。个属。第一节 钩端螺旋体 是人畜共患病，鼠类和猪是储存宿主。在肾中存在，是人畜共患病，鼠类和猪是储存宿主。在肾中存在，随尿排出，污染水和土壤，人类接触污染疫水。穿随尿排出，污染水和土壤，人类接触污染疫水。穿

2、透皮肤粘膜侵入，并引起血症，产生如内毒素等物透皮肤粘膜侵入，并引起血症，产生如内毒素等物质，引起钩端螺旋体病，出现发热、头痛肌痛、眼质，引起钩端螺旋体病，出现发热、头痛肌痛、眼结膜充血等中毒症状，患者有全身毛细血管损伤和结膜充血等中毒症状，患者有全身毛细血管损伤和微循环障碍，并引起肝肾功能损害。由于血清型、微循环障碍，并引起肝肾功能损害。由于血清型、毒力数量不同以及免疫水平差异，有毒力数量不同以及免疫水平差异，有流感伤寒型；流感伤寒型；黄疽出血型；黄疽出血型；肺出血型；肺出血型；脑膜脑炎型；脑膜脑炎型；肾肾功能衰竭型；功能衰竭型；胃肠炎型等类型。胃肠炎型等类型。应用显微镜凝集试验和凝集素吸收试

3、验，可应用显微镜凝集试验和凝集素吸收试验，可进行血清群和型的分类。问号状钩端螺旋体进行血清群和型的分类。问号状钩端螺旋体可分为可分为2525个血清群、个血清群、273 273 个血清型，其中我个血清型，其中我国至少存在国至少存在1919个血清群、个血清群、7474个血清型。我国个血清型。我国目前使用的问号钩端螺旋体参考株有目前使用的问号钩端螺旋体参考株有1414群群1515型。型。微生物特性微生物特性 螺旋细密和规则，一端弯曲使菌体呈问号状螺旋细密和规则，一端弯曲使菌体呈问号状 故名钩端螺旋体。故名钩端螺旋体。G-，但不易着色。常用但不易着色。常用 Fontana镀银染色法，被染成棕褐色。暗视

4、镀银染色法，被染成棕褐色。暗视 野显微镜下可见活泼运动、折光性强而成白野显微镜下可见活泼运动、折光性强而成白 色的钩端螺旋体。色的钩端螺旋体。内鞭毛紧紧缠绕在原生质圆柱体表面呈螺旋内鞭毛紧紧缠绕在原生质圆柱体表面呈螺旋 状，使钩端螺旋体活泼地沿长轴旋转运动。状，使钩端螺旋体活泼地沿长轴旋转运动。培养特性培养特性 营营 养养 要要 求求 较较 高高，常常 用用 含含 10 兔兔 血血 清清 的的Korthof培培养养基基，兔兔血血清清除除促促进进钩钩端端螺螺旋旋体体生生长长外外，尚尚有有中中和和代代谢谢产产物物毒毒性性的的作作用用。最最适适生生长长温温度度为为2830，最最适适pH为为7276，

5、人人工工培培养养基基中中生生长长缓缓慢慢。在在液液体体培培养养基基中中，分分裂裂一一次次需需8lOh，培培养养一一周周左左右右，呈呈现现为为半半透透明明云云雾雾状状生生长长，但但菌菌数仅相当于普通细菌的数仅相当于普通细菌的1101100。抵抗力抵抗力n对对热热抵抵抗抗力力弱弱，60、1min即即死死亡亡。02来来苏苏、l：2000升升汞汞、1石石炭炭酸酸经经1030min被杀灭。被杀灭。n对对青青霉霉素素敏敏感感。钩钩端端螺螺旋旋体体在在夏夏秋秋季季酸酸硷硷度度中中性性的的湿湿土土或或水水中中可可存存活活20天天以以上上，甚甚至至数数月之久，这在本菌的传播上有重要意义。月之久，这在本菌的传播上

6、有重要意义。标本采集标本采集n钩钩端端螺螺旋旋体体可可从从临临床床标标本本、携携带带者者和和自自然然界界的水中分离获得。的水中分离获得。n标标本本采采集集包包括括血血液液、尿尿和和脑脑脊脊液液，发发病病早早期期(1(1周周内内)血血液液的的阳阳性性率率高高，1 1周周后后尿尿和和脑脑脊脊液液等等的的阳阳性性率率高高。感感染染6 61010天天取取血血可可检检出出抗抗体体，在在病病程程第第3 3或或4 4周周达达最最高高水水平平，此此后后抗抗体体水水平平逐逐渐渐下下降降，血血清清学学诊诊断断则则需需在在病病程程早早期期及及恢恢复期分别采集血清，作双份血清试验。复期分别采集血清，作双份血清试验。标

7、本直接检查标本直接检查1取急性期病人血以取急性期病人血以4000rmin离心离心45 60min，取取1滴沉淀物置玻片上，加盖滴沉淀物置玻片上，加盖 玻片后作暗视野检查。也可用玻片后作暗视野检查。也可用Fontana 镀银染色法染色后观察。镀银染色法染色后观察。2核酸检测核酸检测 采用同位素或生物素、地高辛采用同位素或生物素、地高辛 标记的特异标记的特异DNA探针法，检出标本中钩探针法，检出标本中钩 端螺旋体的核酸，较培养法快速、敏感。端螺旋体的核酸，较培养法快速、敏感。若先用若先用PCB技术先行扩增，再用探针确技术先行扩增，再用探针确 定，则敏感度更加提高。定，则敏感度更加提高。分离培养分离

8、培养n取取钩钩端端螺螺旋旋体体血血症症期期的的病病人人血血液液2ml或或发发病病后后 第第 2周周 的的 无无 菌菌 弱弱 碱碱 性性 尿尿 沉沉 渣渣 接接 种种 于于Korthof培培养养基基中中，28孵孵育育，因因系系需需氧氧生生长，故靠近培养液面呈半透明雾状混浊。长，故靠近培养液面呈半透明雾状混浊。n取取培培养养物物作作暗暗视视野野检检查查，观观察察有有无无螺螺旋旋体体生长。连续观察生长。连续观察30d，如无生长方判为阴性如无生长方判为阴性抗体检测抗体检测显微镜下凝集试验是常用的方法。显微镜下凝集试验是常用的方法。(1)(1)抗原制备：取标准菌株抗原制备：取标准菌株4 47 7天的培养

9、物，每天的培养物，每 视野视野50506060条活钩端螺旋体。条活钩端螺旋体。(2)方方法法与与结结果果：取取病病人人血血清清以以56，30min灭灭 活活后后稀稀释释，每每个个稀稀释释度度01ml 血血清清中中加加入入 等量活菌抗原，等量活菌抗原，302h后后，取取1滴覆盖玻片，滴覆盖玻片，暗暗视视野野显显微微镜镜下下若若有有抗抗体体存存在在，则则钩钩体体凝凝集集 成团，数减少，菌体溶解。成团，数减少，菌体溶解。结果判定：结果判定：50以上菌体凝集或溶解为以上菌体凝集或溶解为“2+”为血清效价。达为血清效价。达1：300以上才有诊断意义以上才有诊断意义 或效价增高或效价增高4倍以上，则可确诊

10、本病。倍以上，则可确诊本病。酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验n用用ELISA法法和和IgM斑斑点点-ELISA法法等等间间接接检检测测钩钩体体病病人人血血清清中中特特异异性性抗抗体体，用用于于该病的快速诊断。该病的快速诊断。n包包被被抗抗原原用用钩钩端端螺螺旋旋体体培培养养物物经经超超声声波波破破碎碎，15000rmin离离心心20min，用用于于包包被被的的抗抗原原浓浓度度以以20gml为为好好。被被检检血血清清OD值为阴性对照的值为阴性对照的2倍，即为阳性。倍，即为阳性。动物试验动物试验n动动物物是是分分离离钩钩端端螺螺旋旋体体的的敏敏感感方方法法，尤尤其其适用于有杂菌污染的标本。适用于有

11、杂菌污染的标本。n方方法法是是将将标标本本接接种种于于幼幼龄龄豚豚鼠鼠或或金金地地鼠鼠腹腹腔腔。接接种种35d后后，可可用用暗暗视视野野显显微微镜镜检检查查腹腹腔腔液液；亦亦可可在在接接种种后后36d取取心心血血检检查查并并作作分分离离培培养养。动动物物死死后后解解剖剖，可可见见皮皮下下、肺肺部部等等有有大大小小不不等等的的出出血血斑斑，肝肝、脾脾脏脏器器中有大量钩端螺旋体存在。中有大量钩端螺旋体存在。第二节 疏螺旋体属n有有3 31010个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼。个稀疏而不规则的螺旋，运动活泼。n对对人人致致病病的的主主要要有有伯伯氏氏疏疏螺螺旋旋体体、回回归归热热螺旋体、奋森螺旋体等

12、。螺旋体、奋森螺旋体等。一、伯氏疏螺旋体一、伯氏疏螺旋体n是是莱莱姆姆病病的的主主要要病病原原体体，19771977年年在在美美国国莱莱姆姆镇镇发发现现，从从硬硬蜱蜱及及患患者者体体内内分分离离出出伯氏疏螺旋休。伯氏疏螺旋休。n19851985年年我我国国在在黑黑龙龙江江省省林林区区首首次次发发现现莱莱姆姆病病，19881988年年从从病病人人血血液液中中分分离离出出病病原原体体，迄迄今今已已有有十十多多个个省省和和自自治治区区证证实实有有莱姆病存在。莱姆病存在。n传传播播媒媒介介是是硬硬蜱蜱，伯伯氏氏疏疏螺螺旋旋体体可可在在蜱蜱的的中中肠生繁殖，叮咬时使宿主感染。肠生繁殖，叮咬时使宿主感染。

13、n经经330d潜伏期，在叮咬部位可出现慢性移潜伏期，在叮咬部位可出现慢性移行性红斑。经行性红斑。经2-3周，皮损消退，留有斑痕与周，皮损消退，留有斑痕与色素沉着。色素沉着。n早期症状有头痛发热、肌痛等。早期症状有头痛发热、肌痛等。80未经治未经治疗的可发展至慢性关节炎、慢性神经系统异疗的可发展至慢性关节炎、慢性神经系统异常，严重者可同时出现皮肤、神经、关节、常，严重者可同时出现皮肤、神经、关节、心等多脏器损害。心等多脏器损害。微生物特性微生物特性1疏螺旋体，两端稍尖。运动活泼，在培养疏螺旋体，两端稍尖。运动活泼，在培养 基中，不规则地缠绕一起，呈卷圈状。周基中，不规则地缠绕一起，呈卷圈状。周

14、浆鞭毛数不等。与运动有关。浆鞭毛数不等。与运动有关。-易着色。易着色。Giemsa或或Wright染色均佳。染色均佳。2抗原成分抗原成分 主要的有鞭毛蛋白主要的有鞭毛蛋白(40k)、外膜、外膜 蛋白蛋白A(OspA)、B(OspB)和和C(OspC)，60kD 抗原。抗原。40kD鞭毛蛋白既是免疫原，也是致鞭毛蛋白既是免疫原，也是致 病原之一。病原之一。3.营养要求高，培养基需含有长链饱和与不营养要求高，培养基需含有长链饱和与不 饱和脂肪酸、葡萄糖、氨基酸和饱和脂肪酸、葡萄糖、氨基酸和q清蛋白等。清蛋白等。微需氧，微需氧，510C02促进生长。适宜温度促进生长。适宜温度 为为35。生长慢，。生

15、长慢，1代需代需18h，需培养需培养13 周观察到生长情况。周观察到生长情况。微生物检验微生物检验1 1标本采集标本采集 早期取病损皮肤组织、淋巴结抽早期取病损皮肤组织、淋巴结抽 出液、血液。出液、血液。2.2.直接用暗视野显微镜，观察关节滑膜液、脑直接用暗视野显微镜，观察关节滑膜液、脑 脊液、尿液等标本中螺旋体的形态和运动，脊液、尿液等标本中螺旋体的形态和运动，因数量太少，故在实验室诊断中价值不大。因数量太少，故在实验室诊断中价值不大。用于蜱内脏组织检查用于蜱内脏组织检查,检出率较高。检出率较高。3.核酸检测核酸检测 用用PCR技术检查技术检查DNA，方法快速、敏感性高，方法快速、敏感性高，

16、用已知引物，以标本中螺旋体质粒用已知引物，以标本中螺旋体质粒 DNA片段片段 为模板，扩增后形成为模板，扩增后形成309bp的的DNA分子分子(是编是编 码码OspA的基因片段的基因片段)，经琼脂糖电泳证实。，经琼脂糖电泳证实。此此DNA分子在所有伯氏疏螺旋体菌株中均可分子在所有伯氏疏螺旋体菌株中均可 被检出，而其他菌种则为阴性。被检出，而其他菌种则为阴性。4.4.分离培养分离培养n标标本本接接种种在在BSK复复合合培培养养基基中中，33孵孵育育。BSK培培养养基基是是含含有有牛牛血血清清白白蛋蛋白白(BSA)和和热热灭灭活活兔兔血血清清等等营营养养丰丰富富的的液液体体培培养养基基，通通常常从

17、从感感染染的的脾脾中中分分离离螺螺旋旋体体较易，而从损伤皮肤中分离较难。较易，而从损伤皮肤中分离较难。n因因分分裂裂1代代需需12h以以上上，需需培培养养2-3周周可可观观察生长情况。察生长情况。5.抗体检测抗体检测n间间接接免免疫疫荧荧光光法法(IFA)：将将螺螺旋旋体体在在BSK中中培培养养5-7天天，离离心心8200rpm 30min收收集集螺螺旋旋体体，稀稀释释至至200个个螺螺旋旋体体高高倍倍镜镜视视野野。取取20l悬悬液液于于玻玻片片上上，干干燥燥后后用用丙丙酮酮固固定定5min。待待检检血血清清以以PBS倍倍比比稀稀释释，加加于于玻玻片片1015l稀稀释释血血清清，湿湿盒盒内内3

18、7孵孵育育 30min，洗洗后后加加荧荧光光素素标标记记抗抗人人IgG。IFA操操作作简简便便实实用用，但但类类风风湿湿性性关关节节炎炎和和其其他他螺螺旋旋体体病病可可出出现现假假阳阳性反应。性反应。6.动物试验动物试验n常用的实验动物有小白鼠，金地鼠和兔常用的实验动物有小白鼠，金地鼠和兔等。以螺旋体悬液感染，可出现与人类等。以螺旋体悬液感染，可出现与人类相似的皮损症状，血培养亦阳性，抗体相似的皮损症状，血培养亦阳性，抗体效价显著升高，可作为良好的动物模型，效价显著升高，可作为良好的动物模型，常用新西兰白兔。常用新西兰白兔。n动物试验虽是一种经典的方法，但较繁动物试验虽是一种经典的方法，但较繁

19、琐，有生物危害。琐，有生物危害。二、回归热疏螺旋体二、回归热疏螺旋体n是引起人类回归热的病原体。是引起人类回归热的病原体。n根根据据回回归归热热传传播播媒媒介介不不同同，分分为为两两类类:一一为为虱虱传传回回归归热热，或或称称流流行行性性回回归归热热，其其病病原原体体为为回回归归热热疏疏螺螺旋旋体体。另另一一为为蜱蜱传传回回归归热热热热，又又称地方性回归热。称地方性回归热。n我国流行的回归热主要是虱传型。我国流行的回归热主要是虱传型。n流流行行性性回回归归热热主主要要通通过过人人体体虱虱在在人人类类中中传传播播。当当虱虱吸吸吮吮病病人人血血液液后后，螺螺旋旋体体从从中中肠肠进进入入血血淋淋巴巴

20、大大量量繁繁殖殖，不不进进入入唾唾液液或或卵卵巢巢。人人被被虱虱叮叮咬咬后后，因因抓抓痒痒将将虱虱粪粪压碎，经皮肤创伤进入人体。压碎，经皮肤创伤进入人体。n侵侵入入人人体体后后，先先在在内内脏脏繁繁殖殖，经经一一周周左左右右的的潜潜伏伏期期，大大量量流流入入血血液液，引引起起菌菌血血症症型型发发热热、肝肝、脾脾肿肿大大，出出现现黄黄疽疽；持持续续一一周周左左右右，骤骤然然退退热热，血血中中螺螺旋旋体体消消失失，隔隔一一周周或或数数日日又又发发热热，血血中中出出现现螺螺旋旋体体。如如此此反复发作与缓解可达反复发作与缓解可达3 31010次，故称回归热次，故称回归热 n取发热期外周血取发热期外周血

21、1 1滴，加盖玻片用暗视野显微滴，加盖玻片用暗视野显微镜观察，螺旋体运动活泼；为红细胞直径的镜观察，螺旋体运动活泼；为红细胞直径的2-42-4倍，螺旋稀疏不规则，呈波状。倍，螺旋稀疏不规则，呈波状。n如发热期未能查到螺旋体，取抗凝血如发热期未能查到螺旋体，取抗凝血0 01 1mlml接接种乳鼠腹腔，每日取尾静脉血镜检，种乳鼠腹腔，每日取尾静脉血镜检，1 13 3天可天可查到大量疏螺旋体。抗原易自发变异，使其血查到大量疏螺旋体。抗原易自发变异，使其血清学诊断十分困难。清学诊断十分困难。三、奋森疏螺旋体三、奋森疏螺旋体 n有有38个不规则疏螺旋，形态与回归热螺旋体个不规则疏螺旋，形态与回归热螺旋体

22、类似。类似。G-，运动活泼。专性厌氧，常与梭杆运动活泼。专性厌氧，常与梭杆菌寄生于牙龈部。菌寄生于牙龈部。n一般不致病，只有当人体抵抗力显著降低时，一般不致病，只有当人体抵抗力显著降低时，两种菌繁殖，协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、两种菌繁殖，协同引起奋森咽峡炎、牙龈炎、口颊坏疽、溃疡性口腔炎等。口颊坏疽、溃疡性口腔炎等。n用棉拭子从病灶处取材，涂片染色镜检，可见用棉拭子从病灶处取材，涂片染色镜检，可见G-螺旋体与螺旋体与G-梭杆菌共存。梭杆菌共存。第四节第四节 密螺旋体属密螺旋体属n螺旋细密、规则两端尖，数目多；包括致病性螺旋细密、规则两端尖，数目多；包括致病性和非致病性两大类。和非致病性两大类

23、。n致病密螺旋体有苍白和品他密螺旋体两个种。致病密螺旋体有苍白和品他密螺旋体两个种。n苍白密螺旋体又分苍白密螺旋体又分3 3个亚种：苍白亚种、地方个亚种：苍白亚种、地方亚种和极细亚种，它们分别引起梅毒、是性传亚种和极细亚种，它们分别引起梅毒、是性传播疾病。地方性梅毒通过污染餐具传染，雅司播疾病。地方性梅毒通过污染餐具传染，雅司病经直接接触患者皮肤受损部位而传染，二者病经直接接触患者皮肤受损部位而传染，二者的临床症状与梅毒相似，但不是性传播疾病。的临床症状与梅毒相似，但不是性传播疾病。n品他密螺旋体引起人类品他病。品他密螺旋体引起人类品他病。一、梅毒螺旋体一、梅毒螺旋体n引起梅毒。人是惟一传染源

24、。先天性梅毒通引起梅毒。人是惟一传染源。先天性梅毒通过胎盘由母体传染胎儿，获得性梅毒经性接过胎盘由母体传染胎儿，获得性梅毒经性接触传播。也可经输血引起。触传播。也可经输血引起。n获得性梅毒，临床上分为三期：获得性梅毒，临床上分为三期：期无痛性期无痛性硬下疳。多见于外生殖器；硬下疳。多见于外生殖器；期梅毒疹，全期梅毒疹，全身淋巴结肿大；身淋巴结肿大；期损害全身组织和器官。期损害全身组织和器官。n先天性梅毒，又称胎传梅毒。引起胎儿全身先天性梅毒，又称胎传梅毒。引起胎儿全身性感染，导致流产或死胎；或出生呈现马鞍性感染，导致流产或死胎；或出生呈现马鞍鼻、先天性耳聋等特殊体征。鼻、先天性耳聋等特殊体征。

25、微生物特性微生物特性1形态与染色形态与染色 有有814个致密规则小螺旋，个致密规则小螺旋，两端尖直运动活泼，两端尖直运动活泼，G-，但不易着染。但不易着染。Fontana镀银染成棕褐色。在光镜下易于镀银染成棕褐色。在光镜下易于 查见。在暗视野显微镜下，可观察标本形查见。在暗视野显微镜下，可观察标本形 态和运动方式。态和运动方式。2.电镜下观察，有细胞壁和细胞膜。细胞壁外电镜下观察，有细胞壁和细胞膜。细胞壁外有包膜，细胞膜内为含细胞质和核质的螺旋有包膜，细胞膜内为含细胞质和核质的螺旋形原生质圆柱体。绕着形原生质圆柱体。绕着34根周浆鞭毛或内根周浆鞭毛或内鞭毛鞭毛，与运动有关。，与运动有关。3.不

26、能在无活细胞的人工培养基中生长繁殖。不能在无活细胞的人工培养基中生长繁殖。4.抵抗力极弱。对温度和干燥特别敏感，抵抗力极弱。对温度和干燥特别敏感，4 3天死亡。天死亡。保存保存4 3天血液就无传染梅毒的危险。天血液就无传染梅毒的危险。梅毒螺旋体检验梅毒螺旋体检验1.直接显微镜检查直接显微镜检查 初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取梅初期梅毒，取下疳分泌物；二期梅毒取梅毒疹、病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液，将毒疹、病灶渗出物或局部淋巴结穿刺液，将上述检材置于玻片上用暗视野显微镜检查，上述检材置于玻片上用暗视野显微镜检查，如见有呈现运动活泼，沿其长轴滚动、屈伸、如见有呈现运动活泼，沿其长轴滚动、屈伸、

27、旋转、前后移行等的螺旋体即有诊断意义。旋转、前后移行等的螺旋体即有诊断意义。2.2.核酸检测核酸检测用用PCR技术直接检测临床标本中梅毒螺旋技术直接检测临床标本中梅毒螺旋体的特异性体的特异性DNA片段，用于检测的引物和片段，用于检测的引物和探针是编码外膜蛋白探针是编码外膜蛋白47kD的基因，其扩的基因，其扩增产物经斑点印迹，或电泳以增产物经斑点印迹，或电泳以Southern 印印迹法鉴定。迹法鉴定。3.3.抗体检测抗体检测(1)(1)非密螺旋体抗原试验非密螺旋体抗原试验 多用牛心肌的心脂质作为抗原，测定病人血多用牛心肌的心脂质作为抗原，测定病人血 清中的反应素。初期梅毒病灶出现后清中的反应素。

28、初期梅毒病灶出现后1-21-2周时，周时，阳性率为阳性率为53538383，二期梅毒的阳性率可，二期梅毒的阳性率可 达达100100，晚期梅毒的阳性率，晚期梅毒的阳性率5858-85-85，胎，胎 传梅毒的阳性率为传梅毒的阳性率为8080-100-100。1)1)性病研究所实验室性病研究所实验室 (VDRL)VDRL)玻片试验玻片试验 所用抗原所用抗原(003心拟脂、心拟脂、021卵磷脂、卵磷脂、09胆固醇，用无水乙醇配制胆固醇，用无水乙醇配制)03ml加入加入装有装有03ml缓冲盐水的小瓶内缓冲盐水的小瓶内(1015ml容积容积)，加塞混匀。再加，加塞混匀。再加24ml缓冲盐水即为抗原缓冲盐

29、水即为抗原悬液，待检血清经悬液，待检血清经56 30min灭活，滴加于灭活，滴加于玻片的漆圈内加等量抗原液，摇转玻片玻片的漆圈内加等量抗原液，摇转玻片5min充分混匀反应后观察结果。有大片絮状凝聚物充分混匀反应后观察结果。有大片絮状凝聚物为为(3+)，中等凝聚物为，中等凝聚物为(2+)，细小凝聚物为，细小凝聚物为(+)，液体混浊为，液体混浊为()。2)2)快速血浆反应素环状快速血浆反应素环状 卡片试验卡片试验(RPR)RPR)n用活性炭颗粒吸附用活性炭颗粒吸附VDRLVDRL抗原。与反应素结合抗原。与反应素结合形成黑色凝集块，可肉眼观察结果。形成黑色凝集块，可肉眼观察结果。n取待检血清加于环状

30、卡圆圈内，加取待检血清加于环状卡圆圈内，加VDRLVDRL抗原抗原致敏活性炭致敏活性炭1 1滴，旋转摇匀滴，旋转摇匀8 8minmin，观察结果。观察结果。在白色底板出现明显黑色凝集颗粒为阳性，在白色底板出现明显黑色凝集颗粒为阳性，试验结果用肉眼很容易判断，不需显微镜，试验结果用肉眼很容易判断，不需显微镜，也易于推广。也易于推广。n可将标本倍比稀释进行半定量试验。对评价可将标本倍比稀释进行半定量试验。对评价疗效和判断是否再感染有价值。疗效和判断是否再感染有价值。(2)(2)密螺旋体抗原试验密螺旋体抗原试验n用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性用密螺旋体抗原检测病人血清中特异性抗体，由于梅毒螺旋体

31、、雅司螺旋体等抗体，由于梅毒螺旋体、雅司螺旋体等抗原性相似，所以用血清学试验不可能抗原性相似，所以用血清学试验不可能区别这些密螺旋体及其所致疾病。区别这些密螺旋体及其所致疾病。1)1)荧光密螺旋体抗体荧光密螺旋体抗体 吸收试验吸收试验(FTA-ABS)FTA-ABS)n先用吸收剂去除病人血清非特异性抗原，提先用吸收剂去除病人血清非特异性抗原，提高特异性高特异性，稀释成不同稀释度稀释成不同稀释度，加于预先涂加于预先涂有梅毒螺旋体抗原的玻片上，置湿盒内，有梅毒螺旋体抗原的玻片上，置湿盒内，37 孵育孵育30min，洗片后再用荧光素标记的羊洗片后再用荧光素标记的羊抗人丙球蛋白抗体，在荧光显微镜下观察

32、。抗人丙球蛋白抗体，在荧光显微镜下观察。阳性者可见发荧光的梅毒螺旋体。阳性者可见发荧光的梅毒螺旋体。FTA-ABS试验具高度特异性和敏感性，在第一期梅毒试验具高度特异性和敏感性，在第一期梅毒的头几天就可测出特异性抗体。的头几天就可测出特异性抗体。2)2)梅毒螺旋体荧光抗体梅毒螺旋体荧光抗体 双染色试验双染色试验(FTAABS-DS)FTAABS-DS)n用用 NicholNichol株梅毒螺旋体作抗原，用四甲基异株梅毒螺旋体作抗原，用四甲基异硫氰酸若丹明结合的抗人球蛋白抗血清及异硫氰酸若丹明结合的抗人球蛋白抗血清及异硫氰酸荧光素硫氰酸荧光素(FITC)FITC)结合的抗梅毒螺旋体球结合的抗梅毒

33、螺旋体球蛋白双重染色，用间接免疫荧光技术检测血蛋白双重染色，用间接免疫荧光技术检测血清中的抗清中的抗TPlgGTPlgG抗体。抗体。nFTA-ABS-DS法无论对早期梅毒或晚期梅毒都法无论对早期梅毒或晚期梅毒都有很高的敏感性和特异性，且阳性出现时间有很高的敏感性和特异性，且阳性出现时间早。一期梅毒阳性率达早。一期梅毒阳性率达90，晚期梅毒的阳，晚期梅毒的阳性率为性率为95。对确诊病人的敏感性和特异性。对确诊病人的敏感性和特异性分别为分别为917和和92o，但技术要求较高，但技术要求较高，且较费时费钱，因此多用于实验室试验。且较费时费钱，因此多用于实验室试验。3)抗梅毒螺旋体抗体的微量抗梅毒螺旋

34、体抗体的微量 血凝检测血凝检测(MHA-TP)n用抗原致敏红细胞作间接血凝试验是检测抗用抗原致敏红细胞作间接血凝试验是检测抗体最简易的方法，所用抗原是用梅毒螺旋体体最简易的方法，所用抗原是用梅毒螺旋体(Nichols株株)提取物去致敏经醛化处理的绵提取物去致敏经醛化处理的绵羊红细胞，病人的血清先与非致病性羊红细胞，病人的血清先与非致病性Reiter细胞。血清若含有抗体则与这些细胞反应形细胞。血清若含有抗体则与这些细胞反应形成平铺孔底的凝集；用非致敏红细胞作对照，成平铺孔底的凝集；用非致敏红细胞作对照，以除外非特异性凝集。以除外非特异性凝集。4)ELISAn用用Nichols株为抗原，以超声波击

35、碎。此法可株为抗原，以超声波击碎。此法可用于各期梅毒诊断，灵敏度为用于各期梅毒诊断，灵敏度为96，对感染，对感染血清灵敏度为血清灵敏度为95。与荧光抗体双吸收法。与荧光抗体双吸收法(FTA-ABS-DS)比较，两法符合率为比较，两法符合率为96。ELISA试剂具有价廉、保存时间久且稳定试剂具有价廉、保存时间久且稳定(4个月个月)等优点，是目前梅毒血清学诊断试验等优点，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。的首选方法。5)免疫印迹试验免疫印迹试验 (immuno-blotting test)n将梅毒螺旋体抗原用将梅毒螺旋体抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电聚丙烯酰胺凝胶电泳泳(SDS-PAGE)后，再

36、将凝胶中的抗原经电后，再将凝胶中的抗原经电转移至硝酸纤维薄膜上，将膜切成转移至硝酸纤维薄膜上，将膜切成15mm宽小条。试验时加病人血清宽小条。试验时加病人血清20 l(1：100稀稀释释)，置摇床上室温过夜，次日用洗涤液洗，置摇床上室温过夜，次日用洗涤液洗3次后，加辣根过氧化物酶标记的抗人次后，加辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗抗血清血清(1：500稀释稀释)，室温作用，室温作用1小时后，加小时后，加底物显色底物显色5min后用蒸馏水冲洗，终止反应。后用蒸馏水冲洗，终止反应。出现蓝色区带为阳性。出现蓝色区带为阳性。nWHO推荐用推荐用VDRL、RPR法对血清进行法对血清进行过筛试验，出现阳性者

37、用过筛试验，出现阳性者用FTA-ABS、FTA-ABS-DS、MHA-TP、ELISA和免和免疫印迹试验等方法做确认试验。疫印迹试验等方法做确认试验。n先天梅毒很难诊断，可用先天梅毒很难诊断，可用RPR半定量试半定量试验每月检测验每月检测1次，连续次，连续6个月，检测反应个月，检测反应素效价，或用素效价，或用VDRL定量试验查抗体效价定量试验查抗体效价变化。如效价增高或稳定在高水平，表变化。如效价增高或稳定在高水平，表明是先天梅毒。如抗体是来自母体明是先天梅毒。如抗体是来自母体 lgG，通常在通常在23月内消失。月内消失。二、其他密螺旋体二、其他密螺旋体n有苍白密螺旋体地方亚种、极细亚种以及有

38、苍白密螺旋体地方亚种、极细亚种以及品他密螺旋体，分别引起地方性梅毒、雅品他密螺旋体，分别引起地方性梅毒、雅司和品他病。大多发生于经济较落后地区司和品他病。大多发生于经济较落后地区的儿童。的儿童。n微生物学检查，可从皮肤标本直接在暗视微生物学检查，可从皮肤标本直接在暗视野显微镜下观察有无密螺旋体。也可用血野显微镜下观察有无密螺旋体。也可用血清学试验检测血清中有无相应抗体。清学试验检测血清中有无相应抗体。n由于与梅毒病原体形态、抗原结构，由于与梅毒病原体形态、抗原结构，DNADNA同同源性基本相同，无法区别。因此，查到密源性基本相同，无法区别。因此，查到密螺旋体及血清试验阳性只能诊断为密螺旋螺旋体及血清试验阳性只能诊断为密螺旋体感染，还必须结合临床表现确定。体感染，还必须结合临床表现确定。