mRNA 表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性分析.pdf

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1、DOI:10.3781/j.issn.1000-7431.2012.02.Copyright 2012 by TUMOR外周血单个核细胞中Nrf2 mRNA表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性分析曹宝山1，阙琳玲2，张煜1，陈森1，尹文琤1，王世凡2，马力文1，余四旺21.北京大学第三医院肿瘤治疗中心，北京100191；2.北京大学药学院化学生物学系，北京100191 摘要 目的：探讨肿瘤患者化疗前外周血有核细胞中核因子 E2 相关因子 2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）mRNA 表达水平的个体差异与化疗所致骨髓抑制程度的相关

2、性。方法：采用半定量 RT-PCR 法检测 30 例肿瘤患者化疗前外周血有核细胞中 Nrf2 mRNA 的表达水平，并分析其与肿瘤患者化疗后骨髓抑制程度的相关性。结果：肿瘤患者化疗前外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平存在明显的个体差异；其在化疗后发生0 1 度白细胞或中性粒细胞减少患者中的表达水平明显高于 2 4 度的患者（P 0.05），但与患者的年龄、性别、治疗方案及肿瘤类型等无相关性。相关性分析表明，外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 的表达水平与白细胞减少 （r 0.448，P 0.013）和中性粒细胞减少（r0.493，P 0.006）呈显著负相关。结论：化疗前外周

3、血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗所致骨髓抑制具有相关性，因此，其可能成为一种预测化疗所致骨髓抑制程度的理想标志物，用于指导临床方案的选择及骨髓抑制的早期防治。关键词 肿瘤；抗肿瘤联合化疗方案；白细胞减少；粒细胞减少；核因子 E2 相关因子 2中图分类号R730.43 文献标志码A 文章编号1000-7431(2012)02-0124-06Association analysis of the expression level of Nrf2 mRNA in peripheral blood nucleated cells and the severity of chemoth

4、erapy-induced myelosuppressionCAOBao-shan1,QUELin-ling2,ZHANGYu1,CHENSen1,YINWen-cheng1,WANGShi-fan2,MALi-wen1,YUSi-wang2 1.CancerTreatmentCenter,ThirdHospital,PekingUniversity,Beijing100191,China;2.DepartmentofChemicalBiology,SchoolofPharmaceuticalSciences,PekingUniversity,Beijing100191,ChinaABSTRA

5、CTObjective:Toinvestigatetheinterindividualvariationofnuclearfactorerythroid2-relatedfactor2(Nrf2)mRNAexpressionlevelintheperipheralbloodnucleatedcellsanditscorrelationwiththeseverityofchemotherapy-inducedmyelosuppression.Methods:TheexpressionlevelofNrf2mRNAintheperipheralbloodnucleatedcellsfrom30ca

6、sesofcancerwasdetectedbysemi-quantitativeRT-PCRbeforechemotherapy,andtheassociationbetweentheNrf2mRNAexpressionandthechemotherapy-inducedmyelosuppressionwasanalyzed.Results:TheNrf2mRNAexpressionlevelintheperipheralbloodmononuclearcellsexhibitedsignificantinterindividualdifferences.TheNrf2mRNAexpress

7、ionlevelwassignificantlyhigherinthepatientswithgrades0-1leukopeniaorneutropeniathanthatinthepatientswithgrades2-4(P0.05),butitwasnotassociatedwiththeage,gender,chemotherapeuticregimenandthetypeoftumor.TheassociationanalysisshowedthattheNrf2mRNAexpressionlevelintheperipheralbloodmononuclearcellswasne

8、gativelyassociatedwithleukopeniaandneutropenia(r=0.448,P=0.013;r=0.493,P=0.006).Conclusion:TheexpressionlevelofNrf2mRNAintheperipheralbloodmononuclearcellsissignificantlycorrelatedwithchemotherapy-inducedmyelosuppression.Itmaybeemployedasanidealmarkertopredicttheseverityofchemotherapy-inducedmyelosu

9、ppressionandhelpfulforclinicaldecision-makingandearlypreventionandtreatmentofmyelosuppression.KEY WORDSNeoplasms;Antineoplasticcombinedchemotherapyprotocols;Leukopenia;Neutropenia;Nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2TUMOR,2012,32(02):124-129Correspondence to:MA Li-wen（马力文）E-mail: YU Si-wang（余四旺）E-

10、mail:swang_Received2011-10-10Accepted2012-01-17009www.tumorsci.org肿瘤 2012 年 2 月第 32 卷第 2 期TUMOR Vol.32,February,2012124临床研究Clinical Research恶性肿瘤在中国占疾病发病率和病死率的第 1 位1，化学治疗仍是治疗恶性肿瘤的主要手段之一，而骨髓抑制是化疗中最常见的剂量限制性不良反应，对化疗效果和患者生活质量均会产生重要的影响。但是，骨髓抑制是否发生及其严重程度存在显著的个体差异，目前临床上还没有可行的预测方法，因此导致化疗方案的选择很大程度上依赖于临床医生的经验和

11、患者治疗后的反应。有些患者可能因为严重的骨髓抑制而下调药物剂量或推迟治疗，从而影响治疗最佳时机和疗效，甚至直接导致病情恶化。因此，寻找可预测骨髓抑制的生物标志物，对于优化治疗方案和防治骨髓抑制具有重要的临床意义。化疗所导致的骨髓抑制现在被认为是造血祖细胞（haematopoietic progenitor cells，HPCs）生长抑制和（或）产生的细胞不良反应2以及造血微环境中细胞间异常联系的结果3。多项研究表明，化疗药物诱导的氧化性应激或亲电性应激与骨髓损伤密切相关4-6。核因子 E2 相关因子 2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，N

12、rf2）是螺旋-环-螺旋碱性亮氨酸拉链转录因子家族中的一员，是细胞调节抗氧化应激和亲电性应激反应的核心转录因子7。Nrf2 通过调控抗氧化反应元件（antioxidant response element，ARE）驱动的药物代谢酶和抗氧化酶（蛋白）等的表达，控制着细胞对氧化性和亲电性应激的敏感性，从而保护细胞免受或减少外来有毒物质的杀伤7。Numazawa 等5研究证实，在采用 5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）处理后，Nrf2 高表达的HPCs 克隆形成能力受损，明显低于 Nrf2 低表达的 HPCs5。上述研究提示，HPCs 中 Nrf2 的表达水平与所致的骨髓抑制密切

13、相关。但由于临床上获取 HPCs 较难，而获取外周血细胞相对容易，故本研究将初步探讨外周血细胞中 Nrf2 水平与化疗后骨髓抑制的相关性。本研究通过对 30 例接受化疗的肿瘤患者化 疗 前 外 周 血 单 个 核 细 胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）和粒细胞（peripheral blood granulocytes）中 Nrf2 mRNA 表达水平的检测，分析了 Nrf2 mRNA 表达水平的个体差异与化疗后骨髓抑制程度的相关性，并探讨了外周血细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平的检测对化疗后骨髓抑制的预测作用和临床应用价值。1资料与方法

14、1.1病例资料选择 30 例 2010 年 12 月2011年 4 月在北京大学第三医院接受化疗的肿瘤患者入组检测。入组标准：年龄 18 75 岁；病理确诊为恶性肿瘤；化疗前血常规、肝肾功能、心肌酶化验均正常；Karnofsky 行为状态（Karnofsky performance status，KPS）评分在 70 分以上；无明确骨髓转移和血液系统疾病；采血前 3 d 无发热症状。所有患者均签署化疗知情同意书。所有血液标本采集和相关实验均符合北京大学第三医院伦理委员会批准的临床研究项目要求。排除标准：长期使用升白细胞药物者和明确骨髓转移或血液系统疾病者。1.2临床资料收集及血液毒性评价标准记

15、录患者的临床特征及化疗期间所有血常规检测中的白细胞、中性粒细胞及血小板数。以化疗后白细胞、中性粒细胞和血小板数各自的最低点作为血液不良反应严重程度的评判依据。根据美国国立癌症研究所常见的不良事件术语标准 3.0 版（National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events v3.0，NCI-CTCAE 3.0）8分级为 0 4 度。1.3试剂与仪器人淋巴细胞分离液购自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司；总 RNA 提取试剂 TRIzol 购 自 Invitrogen 公 司；PCR mastermix购自天

16、根生化科技（北京）有限公司；cDNA 反转录试剂盒购自 Fermentas 公司；所有塑料耗材购自 Axygen 公司；其他试剂均为国产分析纯。基因扩增仪 XP-Cycler 为杭州博日科技有限公司产品；低速离心机 KDC-40 为安徽中科中佳科学仪器有限公司产品；低温冷冻离心机为德国Eppendorf 公司产品；United-Bio GK-330C 凝胶成像系统为上海高科联合生物技术研发有限公司产品。1.4外周血中PBMCs 和粒细胞分离所有的患者在化疗前空腹静脉采血 2 mL，注入抗凝管中 4 保存，4 h 内采用密度梯度离心法和红细胞裂解法从外周血中分离 PBMCs 和粒细胞。PBMCs

17、 的分离：4 条件下 200g离心5 min，吸出上层血浆；余下的血细胞中加入 PBS 稀释至 4 mL，轻轻吹匀；取 2 mL 淋巴细胞分离液加入 10 mL 离心管底部，然后将稀释后的血细胞沿管壁逐滴缓缓铺于分离液上面，形成清晰界面。将离心管置于水平离心机中，600g室温下离心 20 min，取出离心管，管中液体分为 4 层，从下到上依次为红细胞和粒细胞层、分层液层、PBMCs 层和血浆层。小心吸出 PBMCs 层（约1 mL）置于新离心管中，再加入 4 倍体积的 PBS混匀，室温下 600g离心 5min，弃上清液，沉曹宝山，等.外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗后骨

18、髓抑制程度的相关性分析125淀用 1 mL PBS 重悬于 1.5 mL 离心管中，再次离心收集 PBMCs。粒细胞的分离：吸去 PBMCs 层后，弃去血浆层和分层液层，在余下的红细胞和粒细胞层中加入 10 mL 红细胞裂解液混匀，冰上放置 20 min，中间颠倒混匀 2 次，直至溶液变得红色澄清。水平离心机中 600g离心 5 min，弃上清液。沉淀重悬于 1 mL 红细胞裂解液中并转移到 1.5 mL 离心管中，再次离心弃上清液，沉淀用 1 mL PBS洗涤一次，再次离心弃上清液，最后收集粒细胞。1.5RT-PCR 检 测 及 半定 量 分 析 收 集 分 离获 得 的 PBMCs（3 5

19、）105个 和 粒 细 胞（8 12）105个，采 用 TRIzol 裂 解 和 氯 仿二步法抽提细胞中的总 RNA，根据D260/D280值定 量 并 判 定 RNA 质 量。取 总 RNA 0.5 g，以 Oligo dT 为 引 物，按 照 Fermentas 反 转录 酶 使 用 说 明 进 行 反 转 录，合 成 cDNA，以cDNA 为 模 板 进 行 Nrf2 和 内 参 照 GAPDH的 PCR 扩 增。Nrf2 基 因 的 上 游 引 物 序 列 为 5-TCAGCGACGGAAAGAGTA-3，下 游 引物序列为 5-TGGGCAACCTGGGAGTAG-3，PCR 产物大

20、小 201 bp；GAPDH基因的上游引物序列为 5-GGATTTGGTCGTATTGGG-3，下游引物序列为：5-GGAAGATGGTGATGGGATT-3，PCR 产物大小 496 bp。PCR 扩增步骤：第 1 步，95 预变性 3 min；第 2 步，95 30 s、55 45 s、72 45 s，GAPDH基因扩增共 22个循环，Nrf2 基因扩增共 25 个循环；第 3 步，72再延伸 5 min。产物置于 4 保存。将扩增产物行 2%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，紫外凝胶成像采集结果。应用 Quantity One 软件（Bio-Rad Laboratories）计算扩增获得的目的基因

21、和内参基因灰度值比。所有 PCR 反应和检测均重复 3 次。1.6统计学方法应用 SPSS 17.0 软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以 s 表示。计数资料用率（%）表示，计量资料行t检验或方差分析，计数资料以卡方检验进行统计处理；Pearson 相关分析进行相关性检验，多因素分析采用 logistic 回归模型，采用逐步后退法（backward,walds），以P 0.05 为差异有统计学意义。绘制 PBMCs 中 Nrf2 受 试 者 工 作 特 征（receive operating characteristic，ROC）曲线，并应用曲线下面积（area under the c

22、urve，AUC）来评价其临床诊断价值。2结果2.1患者临床特征符合入组条件的患者共 30例，其中男性 14 例，女性 16 例；年龄 32 74 岁，中位年龄 63 岁；肺癌 7 例，结直肠癌 8 例，肝胆系统肿瘤 5 例，胃及食管癌 5 例，乳腺癌 5 例；初治患者 14 例，复治患者 16 例；行根治术后患者9 例，带瘤患者 21 例；用氟尿嘧啶联合铂类方案治疗的 7 例，以紫杉类药物为主方案治疗的 6 例，以伊立替康为主方案治疗的 6 例，以吉西他滨为主方案治疗的 8 例，以长春瑞宾或蒽环类药物为主方案治疗的 3 例。2.2PBMCs中 Nrf2 表达水平对化疗所致骨髓抑制程度的预测价

23、值RT-PCR 检测结果显示，30例患者中，Nrf2 mRNA 在 PBMCs 中的表达水平有明显的个体差异（图 1A），但在粒细胞中个体差异不明显（图 1B）。将 30 例患者按白细胞减少和中性粒细胞减少进行分级，分为 0 1 度和 2 4 度 2 组。Nrf2 mRNA 表 达 的 ROC 曲线见图 2，图 2A 为对白细胞减少患者的诊断，Nrf2/GAPDH 的 AUC 值 为 0.801,95%可 信 区间（confidence interval，CI）：0.640 0.963，P 0.005，最 佳 判 读 值 为 0.37；以 Nrf2/GAPDH 的 AUC 值 0.37 作 为

24、 2 4 度 组 白细胞减少的诊断标准，灵敏度为 81.3%，特异度为 70.4%；图 2B 为对粒细胞减少患者的诊断，Fig.1Expression levels of nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)mRNA in peripheral blood mononuclear cells(A)and granulocytes(B)detected by semi-quantitative RT-PCR analysis.Glyceroaldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)was tak

25、en as the internal reference.图 1Nrf2 mRNA 在外周血单个核细胞和粒细胞中的表达Fig.2Receiver operating characteristic(ROC)curve of Nrf2 mRNA level in chemotherapy-induced myelosuppression.A:ROC curve of Nrf2 mRNA level in chemotherapy-induced leukopenia;B:ROC curve of Nrf2 mRNA level in chemotherapy-induced neutropenia

26、.图 2Nrf2 mRNA 表达水平检测化疗所致骨髓抑制的ROC 曲线曹宝山，等.外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性分析126Nrf2/GAPDH 的 AUC 值为 0.873，95%CI：0.749 0.998，P 0.001，最佳判读值为 0.37；以 Nrf2/GAPDH 的 AUC 值 0.37 作 为 2 4度组粒细胞减少的诊断标准，灵敏度为 92.3%，特异度为 70.6%。2.3PBMCs 中 Nrf2 mRNA 表达水平同临床特征之间的关系根据 ROC 曲线中 Nrf2 与 GAPDH表达水平半定量比值（Nrf2/GAPDH）,判定 0

27、.37为临界（cut-off）值，因此设定比值 0.37 为Nrf2 mRNA 高表达，0.37 为 Nrf2 mRNA 低表达。分析结果显示，30 例患者中 13 例（43.33%）为 Nrf2 mRNA 高表达，17 例（56.67%）为 Nrf2 mRNA 低表达。Nrf2 mRNA 高表达在 0 1 度组和 2 4 度组白细胞减少或粒细胞减少患者中，差异存在明显的统计学意义（P 0.05），但与血小板数减少、患者的性别、年龄、肿瘤类型、化疗方案、治疗时机及肿瘤负荷与否无相关性 （P 0.05，表 1）。2.4单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性单个核细

28、胞中 Nrf2 mRNA 表达水平在 0 1 度白细胞减少患者中明显高于 2 4 度的患者，Nrf2/GAPDH 分别为0.6460.549 和 0.2510.224（P 0.013）；在0 1 度中性粒细胞减少患者中也明显高于 2 4度组的患者，分别为 0.6230.514 和 0.1870.130（P 0.003）（表 2）。校正性别、年龄、肿瘤类表 1Nrf2 mRNA 高表达与化疗患者临床特征之间的关系Table 1Relationship between high-expression nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)

29、mRNA and the clinical features of patients receiving chemotherapyClinical characteristicN/caseHigh-expression of Nrf2/n(%)2P valueGender 0.6210.431 Male14 5(35.71)Female16 8(50.00)Age/year 0.0680.794 6520 9(45.00)6510 4(40.00)Tumor type 2.2500.690 Colorectal cancer 8 2(25.00)Lung cancer 7 4(57.14)He

30、patic-biliary-pancreatic cancer 5 2(40.00)Upper gastrointestinal cancer 5 3(60.00)Breast cancer 5 2(40.00)Chemotherapeutic regimen 3.3350.503 Fluorouracil-based 7 4(57.14)Taxanes-based 6 1(16.67)Iritecan-based 6 2(33.33)Gemcitabine-based 8 4(50.00)Navebine or epirubicin-based 3 2(66.67)Chemotherapy

31、0.0020.961 Initial treatment14 6(42.86)Retreatment16 7(43.75)Tumor load 0.7820.376 Postoperation 9 5(55.56)Bearing cancer21 8(38.10)Leukopenia grade 8.4380.004 0-11410(71.43)2-416 3(18.75)Neutropenia grade-11.8680.001 0-11712(70.59)2-413 1(0.08)Thrombocytopenia grade 0.1630.922 02511(44.00)1 3 1(33.

32、33)2 2 1(50.00)曹宝山，等.外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性分析127型、化疗方案和治疗时机后，多因素 logistic 回归分析结果表明，PBMCs 中 Nrf2 mRNA 的表达水平是白细胞减少或中性粒细胞减少的重要影响因素（P 0.05，表 3）。Pearson 相关分析结果表明，PBMCs 中 Nrf2 mRNA 的表达水平与白细胞减少（r 0.448，P 0.013）及中性粒细胞减少 （r 0.493，P 0.006）均呈显著的负相关性。表 2Nrf2 mRNA 表达水平与骨髓抑制程度的关系Table 2Relationshi

33、p between expression level of Nrf2 mRNA and the grade of myelosuppressionGroupn/case Nrf2 mRNA/(s)t valueP valueLeucopenia grade 0-1 140.6460.5492.6490.013 2-4 160.2510.224Neutropenia grade 0-1 170.6250.5143.3810.003 2-4 130.1870.130表 3回归模型比较化疗骨髓毒性相关的各组变量Table 3Comparisons of variables related with

34、chemotherapy-induced myelosuppression in each group(N=30)CharacteristicRegression coefficient Standard errorWaldP valueExp(B)95%Confidence intervalLeukopenia Gender-0.1331.1490.0130.9080.8760.092-8.320 Age 1.5561.4181.2050.2724.742 0.295-76.327 Tumor type 0.3900.4570.7270.3941.4770.603-3.619 Chemoth

35、erapeutic time 2.0261.2472.6400.1047.586 0.658-87.399 Chemotherapeutic regimen 1.0590.6562.6060.1062.884 0.797-10.432 Nrf2 mRNA-4.0431.6585.9450.0150.0180.001-0.452Neutropenia Gender-1.4921.2391.4500.2290.2250.020-2.551 Age 1.0101.3390.5690.4512.746 0.199-37.883 Tumor type 0.1540.4000.1470.7011.1660

36、.532-2.556 Chemotherapeutic time 1.6171.4621.2230.2695.037 0.287-88.407 Chemotherapeutic regimen 0.5390.5371.0060.3161.7130.598-4.908 Nrf2 mRNA-4.2321.6036.9740.0080.0150.001-0.3363讨论研究显示，骨髓抑制是最常见的化疗剂量限制性不良反应，尽管临床上可以通过药物类型、药物剂量、剂量强度、肿瘤负荷和患者一般状况等指标进行初步预测9-11，但由于存在显著的个体差异，预测准确度较低。大多数化疗药物所致的骨髓抑制与氧化性和亲电

37、性应激的产生密切相关。例如，白消安、亚硝基脲和环磷酰胺等抗癌药产生的亲电性应激6,12和 5-FU、铂类药物产生的氧化应激是其发生骨髓抑制的重要原因4,5，铂类药物导致的氧化应激还可导致骨髓的后遗损伤4。转录因子 Nrf2 是细胞防御系统的核心调控分子，其高表达可以使细胞避免氧化性和亲电性应激导致的细胞损伤7。高表达 Nrf2 的 HPCs 受5-FU 所致损伤显著减轻5，高表达 Nrf2 的造血干细胞对放射治疗所致损伤也具有更强的抵抗力13。因此，造血干细胞或祖细胞中的 Nrf2 表达水平可能是一个预测骨髓不良反应的理想指标，但迄今尚无相关临床研究。此外，临床上造血干祖细胞获取较为困难，也是

38、其应用的重要限制因素。目前多数类似检测均采用外周血样本，然而，虽然外周血细胞源于骨髓造血干细胞，但外周血细胞中 Nrf2 的表达水平是否存在个体差异，以及其与化疗所致骨髓抑制的发生和程度是否具有相关性，正是本研究旨在探讨解决的问题。本研究以临床外周血样本为研究对象，采用半定量 RT-PCR 方法检测了外周血 PBMCs 中Nrf 2 mRNA 的表达水平。结果显示，PBMCs 中Nrf2 mRNA 表达水平存在明显的个体差异，而粒细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平的个体差异无统计学意义。PBMCs 和粒细胞中 Nrf2 表达水平的不一致可能源于：（1）分化过程中所受刺激因子不同，粒细胞为成熟

39、的终末细胞，而 PBMCs 仍具有分化能力14；（2）PBMCs 中含有一定比例的造血祖细胞14,15。总之，PBMCs 保留了更多祖细胞的性质，PBMCs 中 Nrf2 表达的个体差异可能来源于遗传导致的基因多态性，也可能是外源刺激导致人体产生应激的结果，或这 2 种因素可能同时存在。Nrf2 是细胞调节抗氧化应激和亲电性应激反应的重要转录因子。生理状态下 Nrf2 与胞浆蛋白 伴 侣 分 子 Keap1（Kelch-like ECH-associated protein1）结合使活性处于相对抑制状态。氧化性或亲电性应激条件下，Nrf2 与 Keap1 解偶联后转移入细胞核内，与 ARE 上

40、的 GCTGAGTCA 位曹宝山，等.外周血单个核细胞中 Nrf2 mRNA 表达水平与化疗后骨髓抑制程度的相关性分析128点结合16，启动 ARE 调控的相关基因表达。与ARE 相关的基因主要包括 3 大类：（1）细胞内氧化还原基因，如谷氨酸半胱氨酸连接酶和血红素氧合酶-1 等；（2）相解毒基因，如谷胱甘肽-S转移酶和 NAD（P）H 苯醌氧化还原酶-1 等；（3）编码转运蛋白的基因，如多药耐药蛋白（multidrug resistant proteins，MRP）等17。Nrf-2 过 表 达可增加细胞对氧化应激和亲电性应激的抗性。因此 Nrf2 的表达水平更能反映细胞对氧化性或亲电性应激

41、抵抗的能力。结合临床数据分析显示，PBMCs 中 Nrf2 的表达水平与骨髓抑制程度具有显著的相关性。本研究的主要限制在于样本量较小，而化疗方案和肿瘤类型较多，可能存在选择偏倚。但本研究观察发现，外周血 PBMCs Nrf2 表达水平与白细胞、中性粒细胞减少的程度明显相关，其表达水平是骨髓抑制显著相关的独立因素。ROC曲线也表明，PBMCs 中 Nrf2/GAPDH 的临界值低于 0.37，患者 2 4 度白细胞、粒细胞减少的发生率明显增加，AUC 均超过 0.8，具有一定的准确性，提示外周血 PBMCs 中 Nrf2 的表达水平可能成为一个理想的预测化疗后骨髓抑制的指标。本研究尚需进一步扩大

42、样本量进行前瞻性研究，明确 Nrf2 表达水平与不同化疗方案之间所致骨髓毒性的具体临界值，从而指导骨髓抑制的早期防治和优化治疗方案选择。参考文献 1 全国肿瘤防治研究办公室，全国肿瘤登记中心，卫生部预防控制局编写 中国肿瘤死亡报告全国第三次死因回顾抽样调查 M.北京:人民卫生出版社,2010.2 FRIBERG L E,KARLSSON M O.Mechanistic models for myelosuppressionJ.Invest New Drugs,2003,21(2):183194.3 CANCELAS J A,KOEVOET W L,DE KONING A E,et al.Con

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