微生物分析原理汇总.xls

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1、sop原原理理及及分分析析原原因因8.1.4麦麦汁汁琼琼脂脂酵酵母母生生长长培培养养基基（加加锌锌）范范围围:本培养基用于评估啤酒厂普遍存在的酵母。也被用于确定酵母的活性。分分析析原原因因:啤酒厂的有些区域是不允许存在酵母的。对酵母的培养可指明某些过程功能是否完好（例如：过滤、清洗）。酵母的培养也可以指明某些区域啤酒里是否有潜在的更严重的污染（例如CO2系统，水管&管道，S/C罐等）此培养基可支持酵母生长的能力还可用于评估发酵罐中接种酵母的再生长能力。原原理理:提供一种有合适成分能有效支持酵母特别是啤酒酵母生长的培养基。8.1.5大大豆豆胰胰蛋蛋白白酶酶琼琼脂脂培培养养基基（TSA）范范围围:

2、本培养基用于无选择需氧细菌的培养。分分析析原原因因:本方法提供用于生长需氧细菌的培养基。在一定区域内（未加酵母的麦汁），它将成为产品污染的安全守卫。也被用于按一定规则分析水来表明清洁程度。原原理理:提供一种适合总需氧细菌总数定量分析的培养基。8.1.8.1.1111加加放放线线菌菌酮酮抑抑制制酵酵母母生生长长范范围围：放线菌酮作为一种抗生素被用来抑制细菌平板上酵母的生长。同时也用作稳定啤酒样品中的酵母数量。分分析析原原因因在在培培养养基基中中添添加加为使平皿上细菌菌落正常的生长，酵母的生长必须被抑制在在啤啤酒酒中中添添加加加入啤酒样品中是为了停止酵母生长进行酵母细胞数分析原原理理放线菌酮是一种

3、有效抑制酵母细胞而不影响细菌生长的抗生素8.1.8.1.1212硫硫酸酸锌锌促促进进酵酵母母生生长长范范围围:当培养基需要促进酵母生长时按每1000ml加入2ml的比例添加15%硫酸锌。加入麦汁琼脂培养基（SOP8.1.4）用于酵母活性培养或者酵母为目标生物时。当厌氧菌和酵母菌都是目标生物时加入QA33（SOP8.1.1）。分分析析原原因因:本程序是配置一种添加在培养基中的试剂，不是一项分析。原原理理:本程序用于制备一种加入QA33（SOP8.1.1）或麦汁琼脂（SOP8.1.4）培养基加强酵母生长的试剂。8.1.14培培养养基基控控制制样样范范围围:此程序用于一个新批次的培养剂开始使用前。分

4、分析析原原因因:本测试用于确认所有的培养基都有生长目标生物体的能力。原原理理:通过在培养基上接种已知微生物，我们可确认每批次的培养基都有生长目标菌种的能力。同时空白样品可确认培养基是无菌的。8.1.8.1.1616硫硫代代硫硫酸酸钠钠除除氯氯范范围围:本程序用于制备硫代硫酸钠溶液（阴氢剂）在取含氯的水样前加至取样容器内。分分析析原原因因:这不是一项分析。本程序是试剂的配置。这种试剂被用于除去水中的余氯。原原理理:余氯可通过减少或除去一定数量的微生物来干扰结果。另外，如果余氯留在水中，可结合残留有机物升高TTHM。硫代硫酸钠是一种很好的除氯试剂可除去残留的卤素，在样品输送过程中阻止其杀菌作用。这

5、样可提供更加准确的反映取样时水的微生物状况的结果。8.1.8.1.1717生生理理盐盐水水范范围围:此溶液用于稀释或悬浮需要评估其生长或活性的微生物。分分析析原原因因:在将微生物从自身环境转移至生长培养基过程中，制造一个可供其临时生存的环境。原原理理:这种悬浮液体跟活细胞内部的液体是等压的，这样可以最低程度破坏其原始状态。微生物将在溶液中保持其活性和生长能力。8.1.8.1.1818硫硫酸酸铜铜增增加加酵酵母母稳稳定定性性目目的的：此溶液用于稳定需要测量细胞数的啤酒样品的酵母数量。如有样品在测量前需要放置一定时间，可使用此方法。分分析析原原因因：为控制我们的发酵过程，维持特定阶段酵母细胞在特定

6、的水平是非常必要的。确认这些数量需要实验室的细胞数测量。我们要确保测试的结果与取样时是一致的。此方法可稳定样品细胞数保持在取样时样品的水平。原原理理:硫酸铜可杀死酵母细胞，这样便可使细胞数保持在取样时的水平。8.1.8.1.21MR21MRS S肉肉汤汤培培养养基基厌厌氧氧菌菌种种保保存存范范围围:本程序用于必要时用肉汤作为培养基保存从生产样品中得到的厌氧菌种。分分析析原原因因:本程序表述的是一种厌氧培养基而不是一种分析方法。这种液体介质用于繁殖和保存啤酒破坏菌种。这种液体培养基便于将菌种接种到固体培养基上检验固体培养基是否支持目标菌种的生长。原原理理:此程序用于配置一种特别能生长在我们产品中

7、增生扩散的的菌种的培养基。Lactobacilli MRS肉汤包括聚山梨醇酯、醋酸盐、镁和锰等这些已知易于乳酸菌生长的成分，对于其他细菌也是非常有营养的。MRS培养基支持链球菌、乳酸菌及其他二级细菌的生长8.1.8.1.22MR22MRS S琼琼脂脂培培养养基基范范围围:MRS琼脂（deMan、Rogosa、Sharpe）被推荐用于乳酸菌的分离、筛选和保存。试验表明这种培养基为所有乳酸菌的生长提供丰富的营养。分分析析原原因因:本程序是培养基的制作，不是一种分析。此培养基用于检测啤酒、接触表面、过程添加物或其他产品相关物质例如调节水和清洗水等的啤酒破坏性厌氧菌。原原理理:MRS琼脂含有蛋白胨和葡

8、萄糖，这些成分为细菌生长提供了必需的氮、碳及其他一些物质。聚山梨醇酯、醋酸盐、镁和锰是各种乳酸菌的生长促进因子。上述成分可能会抑制除乳酸菌外的一些微生物的生长。8.2.1大大口口、小小口口、自自动动取取样样口口取取无无菌菌样样范范围围:本程序用于从Zwickel，管道口或自动取样端口取无菌样。分分析析原原因因:本程序用于确保从发酵罐、管道和设备取的样品能够真实的代表目标容器中样品的微生物状况而未受到取样口本身的干扰。原原理理:本方法包括两种消毒/杀菌方法。一种是通过取样口排放冲掉一些残留的物质。二是利用化学杀菌试剂（70%乙醇）除去取样口残留的微生物污染。然后再一次取样口排放可以除去取样口残留

9、的酒精。8.2.8.2.3 3取取无无菌菌浸浸渍渍样样范范围围:本程序适用于无法从正常的取样口取无菌样。分分析析原原因因:这不是一项分析。本程序描述的是从没有取样口的系统取无菌样的取样方法。此方法也同样适用于粘性液体和干的物质。原原理理:8.1.8.1.1717生生理理盐盐水水此程序提供一种通过“浸”而不是通过取样口取流体的方法取无菌样。8.2.5温温度度测测量量方方法法范范围围:本程序用于没有在线或在现场的温度记录装置测量温度时。分分析析原原因因:此分析是监测酵母在储藏，前酵和后酵时期温度的必要部分。也被用于监测清洗和清酒储存温度。原原理理:当温度是关键指标时，温度差异可能影响发酵和其他过程

10、的功能。8.2.8.2.6 6取取擦擦拭拭样样范范围围：评估被怀疑的表面、狭窄空间、设备等是否有微生物存在。分分析析原原因因：评估有微生物存在的非液体对象。原原理理:经常遇到有些液体样品我们无法直接对其进行微生物评估。此程序可比喻为“涂抹”。通过棉签在干或湿的表面擦试，表面残留物质堆积在棉签表面，然后被转移到生长培养基上确认是否有微生物的存在。8.2.8.2.10Wh10Whirl-irl-PakPak取取样样袋袋范范围围：这是可用于取无菌样的取样程序。可被用于取酵母的无菌样。分分析析原原因因：这是取样容器的变化。可以节约清洗玻璃容器和灭菌的时间。原原理理：用无菌一次性使用的取样袋收集样品。8

11、.2.8.2.1313酵酵母母细细胞胞数数控控制制样样/协协作作样样范范围围：此程序提供了准备和处理计数议细胞数分析控制样的指导方针，此控制样用于每天分析时确认计数议分析悬浮细胞数的准确性。可用于必须准备样品使用或需要进行悬浮酵母细胞浓度协作测试时。分分析析原原因因：酵母细胞数是发酵过程一个重要的监控项目。用于分析这一发酵参数的设备每天提供稳定的结果是非常重要的。原原理理：此方法提供了控制库尔特电子定量设备的血球计数板的可视/手测的分析。8.2.8.2.1414瓶瓶装装线线自自动动冲冲洗洗系系统统取取样样范范围围:本方法适用于从瓶装线自动喷淋系统取水样。分分析析原原因因:这些系统在灌酒机区域直

12、接喷淋水可能潜在的接触已灌装未压盖的产品。因此，检测水样可能给产品带来的微生物水平非常必要。原原理理:此程序提供一种为可能给系统带来微生物污染的流动水源的取样方法。8.2.8.2.1616引引泡泡水水取取样样范范围围：本方法用于指导包装线取Jetter水样。分分析析原原因因通过这一系统监控压盖前产品的微生物污染水平。原原理理:从运行的包装线上取引泡水样可检查引泡系统对产品带来的的微生物影响及可能带来的对口感的间接影响。8.2.8.2.1818麦麦汁汁追追踪踪取取样样范范围围:此程序用于取到代表麦汁冷却序列启动后最开始进入冷却器的水和麦汁。分分析析原原因因：设计本方法的目的在于确定某个特定点在短

13、时间内是否存在一定数量的微生物。当在正常操作条件下系统中该取样点没有目标物时可用来识别感染源。原原理理：此处描述的取样步骤是以时间和温度为原理产生的。与温度因素有关的实际情况是：工艺过程中正常情况下此点麦汁温度太高，大多数微生物不能生存，所以必须在液体温度低时采样，即在起动时水与麦汁交界时采样。时间因素则有双重影响：首先是低温液体有限的存在时间，其次是基于有限存在的微生物数量，虽然它们可能仅仅存在于起动初期或顶水时，但在后续工艺过程的某处却可能成为细菌感染的“种子”。“初次出击”这个取样概念的“时间”观点，在工厂内许多其他位置也可以应用。8.2.8.2.1919巴巴氏氏杀杀菌菌水水槽槽取取水水

14、样样范范围围:此程序用于从巴氏杀菌水槽箱内取样。分分析析原原因因:此方法用于评估杀菌机热温区延长系统在控制微生物活性方面的效能。过多的微生物可能会引起微生物堆积堵塞喷嘴或给产品外表面带来不好的气味。原原理理:此取样程序描述了两种不同的取样方法。8.2.8.2.2121气气体体取取样样充充气气法法范范围围:此程序用于从没有液体残留的各种气体系统取样。分分析析原原因因:对酿造和包装接触产品的不同气体系统的微生物状况进行跟踪。在酿造和包装，气体（CO2或空气）被用于整个生产过程。如用于加压于大罐减少氧含量，更便利的转移啤酒，还有碳化，除此外CO2也提供了不好的微生物味道。因此，这些系统业需要监控微生

15、物状态。原原理理:此方法提供一种将气体中的微生物收集在无菌的生理盐水中的方法，然后再用膜滤的方法进行培养.8.2.8.2.2222清清洗洗水水取取样样范范围围:此程序用于取包装线的清洗水样。分分析析原原因因:清洗系统用于清洗灌酒前的空瓶空听，将会带来直接接触产品的残留水。因此，必须评估清洗水可能给包装材料带来的微生物数量。原原理理:此程序提供从清洗水系统取无菌样的方法，评估此清洗水将会给清洗后的包装产品带来微生物的状况。8.3.8.3.1 1稀稀释释方方法法范范围围:稀释程序用于当过程样品中微生物数量很高时，辅助进行定量分析。分分析析原原因因:当必须稀释样品降低微生物浓度得到准确的微生物数量时

16、使用。原原理理:按一定比例稀释可以降低样品浓度，最后可按照稀释比例计算出原始样品目标微生物的浓度。8.3.8.3.2 2培培养养（时时间间及及温温度度）范范围围:此程序不是一个方法。是建立的一个标准培养温度和时间的参考表格，当对这些参数有疑问时按此表格执行。分分析析原原因因:此参考用于标准化系统中的微生物平板的生长条件和培养参数。原原理理:此温度参数用于给特定的微生物在一定温度范围内创造生长条件。8.3.8.3.3 3倾倾倒倒培培养养范范围围:倾倒的培养方法适用于样品体积太多无法涂布太少无法膜滤（1-5ml）。分分析析原原因因:为样品体积太多无法涂布太少无法膜滤时提供更合适的分析方法。原原理理

17、:倾倒基于均匀的将一种液体搅拌分布在另外一种液体内，两种液体混匀后凝固。被分布的液体是样品，分布载体是培养基。8.2.8.2.1818麦麦汁汁追追踪踪取取样样8.3.8.3.4 4涂涂布布范范围围:此程序是处理小体积样品的做样方法。分分析析原原因因:此程序提供便利的方法直接将小体积样品接种至培养基上。特别适用于样品有较高的微生物浓度，能够鉴别高的数量比高度敏感更重要时。原原理理:原理是均匀的将样品涂布在固体培养基表面，达到微生物细胞的正确分布便于菌落罗列生长。8.3.8.3.5 5膜膜滤滤范范围围:此程序用于将微生物从体积大于或等于10ml的过程样品中分离出来再在选择性培养基上培养。.分分析析

18、原原因因:此程序用于大体积样品在保持菌落计数能力的状况下在培养基上培养。原原理理:通过膜滤器过滤样品，大体积的样品可以用来分析微生物污染状况。8.3.8.3.7 7取取样样袋袋样样品品的的培培养养范范围围:Whirl-Pak取样袋是微生物无菌样的主要取样容器。分分析析原原因因:这不是一种分析。Whirl-Pak取样袋用于取无菌样可以避免使用硬的且需要清洗和灭菌取样容器。原原理理:塑料Whirl-Pak取样袋用于取代传统取样容器（例如烧瓶和瓶子）取无菌样。当对取样袋中的样品进行培养时应特别小心，这些注意事项罗列在后面的章节。8.3.8.3.8 8读读培培养养皿皿指指南南范范围围:此程序用于通过常

19、规和专门的样品来监控整个酿酒厂的微生物状况。分分析析原原因因:完整的评估酿造和包装过程的微生物。不受欢迎的微生物可反面影响产品质量。原原理理:用肉眼是看不到微生物的，必须提供所需要的营养物以及生长的条件，使目标微生物增长到可以检测出来的水平，以便评估。8.4.8.4.3 3酵酵母母活活性性，麦麦汁汁琼琼脂脂生生长长法法目目的的:此分析方法适用于成为产品发酵和成熟过程一部分的酵母。分分析析原原因因:此测试提供发酵和成熟过程中酵母能力的预测。也帮助检测潜在的风味物质对啤酒的影响。原原理理:此实验测量酵母在营养物质与车间条件相似的培养基中的生长繁殖能力。8.4.8.4.5 5过过氧氧化化氢氢酶酶实实

20、验验范范围围:此方法适用于评估厌氧平皿当生物体无法用视觉判断是否啤酒破坏菌时。分分析析原原因因:厌氧平皿有时会生长不熟悉的菌落。此测试结果阳性可判断为非啤酒破坏菌，阴性判断为可可能能是啤酒破坏菌。原原理理:本测试以细菌细胞中是否有过氧化氢酶为基础。已知破坏啤酒的微生物不含过氧化氢酶，因此测试结果为阴性。8.4.8.4.6 6革革兰兰氏氏染染色色实实验验范范围围:此程序是细菌的基本分类方法。革兰氏染色被普遍用于区分啤酒破坏菌或非啤酒破坏菌。分分析析原原因因:在显微镜下观察细菌菌落往往不能鉴别是否为啤酒破坏菌，因此通过革兰氏染色进一步分类非常必要。原原理理:通过结晶紫和番红精染色，生物体将变为蓝色

21、或红色。革兰氏阳性的生物将变成蓝/紫色，革兰氏阴性生物将变成红/粉红色。啤酒破坏菌（乳酸菌和四联球菌）为革兰氏阳性。8.4.8.4.1919残残留留清清洗洗水水听听/瓶瓶范范围围:此方法主要用于包装线洗瓶机后灌酒机前空瓶和空听的微生物评估。这种分析方法也可被用于评估传送系统任何点空包装，来确认系统的微生物状况。特别要描述的是，由于取样位置的关键性，应集中评估包装线离灌酒机最近位置的状况。分分析析原原因因:此方法用于评估最接近灌酒前的空包装最后的微生物状况。此样品可以表明从洗瓶机到灌酒机的清洁状况和清洗系统的工作效力。（也可参看SOP8.4.33大体积空瓶/听的微生物评估）原原理理:此方法利用一

22、定体积的“液体载体”（生理盐水），去除清洗后包装内的残留清洗水便于做样评估。结果被报告为每毫升残留清洗水中的细菌数量。此数量是由一个对各种包装标准评估和计算的换算因子计算所得。每种包装有一个换算因子。8.4.20 计计数数仪仪测测酵酵母母细细胞胞数数范范围围:此程序可被用于任何过程和阶段测量悬浮酵母细胞数，如满罐、后酵酒、高泡酒和离心酒。在AB系统中使用的库尔特技术仪有几种型号。包括ZM,Z1,Z2和Multisizer。此SOP适用于各种型号。分分析析原原因因:帮助酿造监控发酵各阶段酵母细胞数。也被用于发酵结束过程监控离心效率和确认KF过滤机的工作效率。原原理理:库尔特计数仪的计数方法是通过

23、测量电导液（Isoton II 稀释水2#）中悬浮细胞通过微孔的电阻来计算细胞的个数。因为大小在小孔尺寸范围内的细胞通过小孔将产生电脉冲。库尔特计数仪对电脉冲计数，因为已知体积样品通过小孔。最后计数被重合误差矫正。8.4.8.4.2121血血球球计计数数板板测测酵酵母母细细胞胞数数范范围围:此程序用于必须直接用目测方法确定悬浮酵母细胞数量的特定阶段。分分析析原原因因:提供用设备定量分析悬浮酵母细胞数的备份方法，并确认电子设备的工作状态是否正常。也可被用于在过滤过程，确认KF过滤器对酵母浓度改变的贡献。原原理理:此方法通过目测对一定体积样品酵母细胞数定量。8.4.8.4.3030啤啤酒酒破破坏坏

24、细细菌菌确确认认范范围围:此程序适用于下面三种状况：厌氧平板中不熟悉的微生物关键的厌氧平板中的微生物（满罐。回收酵母。无菌灌装样品）厌氧平板上数量过多分分析析原原因因:提供一种确认平板上的微生物在厌氧的啤酒中是否有再生长能力的方法。原原理理:此测试给微生物提供厌氧的啤酒环境来确定其在啤酒中是否有可视的再生长能力。8.4.8.4.3636擦擦试试样样P&LP&L的的阳阳性性&阴阴性性评评估估范范围围:用于评估被怀疑存在微生物的表面，受限制的空间，设备部件等。分分析析原原因因:评估非液体表面是否存在啤酒破坏菌。原原理理:通过用棉签接触问题表面然后在一定温度和时间下培养，确认是否存在啤酒破坏菌。8.

25、4.8.4.4040水水和和酒酒样样的的大大肠肠杆杆菌菌评评估估范范围围:此程序用于评估水样或酒样（按反应方案必要时）里的大肠细菌。分分析析原原因因:此分析结合需氧细菌总数将能确认水源（直接跟产品接触或者用于设备清洗等）是否达到饮用水标准。由于引泡水直接与产品接触，当其呈E.coli阳性时还应分析啤酒样品。我们使用此程序是为了满足法律要求。此程序还可被用于测试不含酒精的麦芽饮料或其他过程啤酒样品。原原理理：对水中细菌的病原体进行测试是不切合实际的，因为那是危险的，而且程序冗长棘手，大部分对的微生物检测是测量指标微生物，而不是病原体。指标微生物是指那些可能不是病原体，但是通常与病原体同时存在的细

26、菌，它们对环境压力的适应性比病原体强。没有哪一种微生物或微生物群落能够完全达到作为指标微生物的标准，但是有一种群落-大肠菌群，能满足其大部分要求；Colilert系统采用两种营养指示剂OPNG（邻硝基苯半乳糖苷）和MUG（葡糖苷酸酶的底物），帮助检查和确认大肠菌属和埃希氏大肠杆菌（E.coli）。总大肠菌群分泌的B-半乳糖苷酶可以使OPNG代谢而产生黄色。E.coli产生的B葡糖苷酸酶，可使MUG发生代谢，在紫外线光照射下产生荧光。（此方法）可以不考虑干扰或假阴性，因为绝大多数非大肠杆菌微生物不含有这些酶8.5.8.5.2 2酵酵母母峰峰值值细细胞胞数数研研究究范范围围:此程序用于前酵酒的常规追踪。分分析析原原因因:峰值细胞数是被用于控制主酵的参数。真实测量主酵期间特定时间悬浮酵母的数量可表明酵母的生长状况。原原理理:峰值细胞数通过主酵期间特定时期取样测量酵母数得到。分析中最高的结果被认为是峰值。10.510.5.5.5酿酿酒酒厂厂CO2CO2风风味味品品尝尝充充气气样样范范围围：啤酒厂各种工艺上使用气体的风味评估。分分析析原原因因：一些化合物在与各种工艺上使用的气体相接触时会被吸收，随之对啤酒的风味及品质产生负面影响。原原理理:通过对充气水的品尝可以对气体进行感官评估。8.4.8.4.3636擦擦试试样样P&LP&L的的阳阳性性&阴阴性性评评估估