薄层色谱法在定量分析中的应用.pdf

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1、综 述薄层色谱法在定量分析中的应用董慧茹,金 花(北京化工大学 应化系,北京100029)摘 要:对薄层色谱的定量方法,即目测法、斑点面积法、洗脱法及扫描法作了简要介绍;对19982000年薄层色谱法在医药、食品及其他领域定量分析中的应用进行了综述。关键词:薄层色谱;应用;定量分析;药品;食品中图分类号:O658.1 文献标识码:A 文章编号:100124020(2002)0520265206APPLICATION OF THIN LAYER CHROMATOGRAPHY(TLC)IN QUANTITATIVE ANAL YSISDONG Hui2ru,JIN Hua(Dept.of Appl

2、ied Chemistry,Beijing University of Chemical Engineering,Beijing100029,China)Abstract:The quantitative methods of TLC,including the visual method,spot planimetry,elution method andscanning method,were briefly described,and the recent progress of the application of TLC to the quantitative analysis of

3、medicine and foodstuffs in years from 1998 to 2000 were reviewed(39 references cited).Keywords:TLC;Application;Quantitative analysis;Medicines;Foodstuffs 薄层色谱法又称薄层层析法(Thin Layer Chro2matography,简称TLC)是在20世纪50年代以后,在纸色谱和柱色谱的基础上发展起来的一种色谱分析方法。1951年克尔希内首先对它进行了比较系统的研究,1958年斯塔尔将薄层层析用的吸附剂和涂层工具进行了改进和标准化,克服了技

4、术上的困难,才使薄层色谱获得广泛应用。近年来,尽管其他色谱技术发展迅速,但薄层色谱的应用并没有明显减少,反而随着新的固定相和高速发展的仪器技术的引入,呈现出重受欢迎的势头,并成为一种现代的、灵敏的、高效的分离分析方法。本文试图对19982000年间薄层色谱在定量分析中的应用作一简要评述。1 薄层色谱定量方法混合物在薄层上经过展开及用适当方法定位后可获得一个或多个斑点,根据斑点的颜色和在薄层上的位置(Rf值)可对样品进行定性分析,此外对斑点还能进行半定量或定量分析。常用的定量方法有收稿日期:2000212224作者简介:董慧茹(19452)女,大连市人,教授,研究方向为波谱 分析和离子浮选。目测

5、法、斑点面积法、洗脱测定法和薄层扫描法等。1.1 目测法将试液与一系列不同浓度的标准溶液并排点样于同一薄层上,层析展开后比较各斑点的大小及颜色的深浅,可藉以估计某一组分的大概含量。目测法只是一种半定量方法,它只能作初略的定量,如在进行大批未知量的样品测定前,可用该法估计样品中欲测组分含量,为正式定量提供合理的点样量。1.2 斑点面积法薄层上斑点的面积与含量之间存在一定关系,因此测量斑点面积可以定量。斑点面积和含量之间的关系曾有不少报道,概括起来有以下几种不同的线性关系,即lgw2A呈线性关系,lgw2A呈线性关系,lgw2lgA呈线性关系。究竟哪一种线性关系适合所测定的试样,需通过试验来确定。

6、斑点面积的测量可用面积测量仪,也可用剪纸称重法和数格法等。利用斑点面积法进行定量,仪器设备比较简单,但对层析操作要求较为严格,误差为5%15%,常作为半定量分析方法。1.3 洗脱测定法这是目前较常用的定量测定法,该方法是先将被测组分的斑点位置确定,将斑点取下,用溶剂将被测组分洗脱下来,收集洗脱液并用适当的方法,如紫562第38卷 第5期2002年5月理化检验2化学分册PTCA(PART B:CHEMICAL ANAL YSIS)Vol.38No.5May2002外吸光光度法、比色法、电化学方法等进行检测。洗脱测定法虽然操作步骤较多,但只要仔细操作,结果还是比较准确的,因此在没有薄层扫描仪的实验

7、室,用洗脱测定法还是可以解决定量问题的。1.4 薄层扫描法用于定量的薄层色谱仪称为薄层色谱扫描仪,用这种仪器对薄层上被分离的物质进行直接定量的方法称为薄层扫描法。即以一定波长和一定强度的光束扫描分离后的各个斑点,用仪器测量通过斑点或被斑点反射的光束强度的变化以达到定量的目的。测量方式可分为透射光测定法、反射光测定法以及透射光和反射光同时测定法。扫描所用光线可分为可见光、紫外光及荧光三种。定量方法可用外标法、内标法和归一化法。薄层扫描法定量简单快速,斑点吸收峰的描绘和吸光度的积分值可自动记录,每小时可完成60个试样的测定,一般测定一个试样只需几分钟,而且测定的灵敏度和准确度都较高,检出灵敏度为1

8、0-610-9g,误差约为 3%。2 薄层色谱在定量分析中的应用薄层色谱由于对被分离物质的性质没有限制,可同时进行多个样品的分离,并可重复测定,可以扫描或彩色摄影永久保存;又由于吸附剂的高效化、定量分析的仪器化和自动化,提高了薄层色谱的分辨率及重现性,因此气相色谱和高效液相色谱并不能完全代替薄层色谱,在实际工作中薄层色谱仍是被广泛应用的一种方法。本文对薄层色谱在定量分析中的应用作以下几个方面介绍。2.1 薄层色谱在医药方面的应用薄层色谱在医药方面的应用一直是薄层色谱定量分析的一个重要方面,最近几年仍然保持着好的发展势头。具体应用情况详见表1。2.2 薄层色谱在食品分析方面的应用薄层色谱在食品分

9、析方面的应用虽没有医药方面那么多,但是也有一定的分量,其应用见表2。2.3 薄层色谱在其他方面的应用薄层色谱在环境、生物组织、防腐剂、钢铁、土壤、煤炭等方面仍发挥着作用,并出现了一些新的、更好的方法。薄层色谱在其他方面的应用见表3。最近几年,薄层色谱仍因其仪器简单、适用性广,可以快速给出可靠、准确的结果等特点,被很多分析工作者所关注,并被用于许多领域中。表1 薄层色谱在医药方面的应用样品测定成分薄层展开剂测定波长(nm)线性范围RSD(%)回收率(%)文献银杏叶提取物银杏内酯A银杏内酯B银杏内酯C白果内酯硅胶GF25420.5%CMC2Na(310)乙酸乙酯 甲苯 丙酮 正己烷=4411R30

10、0S37020100g2.52.04.03.4(n=6)99.031银黄片,银黄注射液黄芩苷绿原酸聚酰胺薄片5%SDBS7.5%TritonX2100 甲酸=422S280R370S325R3500.1221.83g0.11.6g3.3(n=6)4.2(n=6)片99.39液98.14片101.4液100.92紫草1)紫草素硅胶G硅胶GF254 甲苯 乙酸乙酯 甲酸=511253.7365.010-510-9molL-1同板:0.82异板:3.34(n=5)963万应胶囊小檗碱 硅胶G20.5%CMC2Na 苯 乙酸乙酯 甲醇 异丙醇 浓氨试液=126331激发3650.0250.125g同板

11、:1.9异板:2.5(n=5)96.74生地、熟地梓醇硅胶G20.2%CMC2Na氯仿 甲醇水=1481S340R4000.52.5g生地:2.7熟地:3.1(n=5)生地:96.1熟地:94.35感冒通片2)扑尔敏硅胶GF254苯 氯仿 冰乙酸 甲醇=10100.50.6S260R3202.512.5g0.79(n=24)101.66662董慧茹等:薄层色谱法在定量分析中的应用续表1样品测定成分薄层展开剂测定波长(nm)线性范围RSD(%)回收率(%)文献气血葆口服液蛇床子素硅胶G 苯 乙酸乙酯=301激发0.190.95g同板:1.2异板:2.4(n=5)97.27槟榔四消丸大黄素硅胶高效

12、薄层板 氯仿 甲醇=11S440R5300.07750.3875g1.10(n=6)99.418玄冬冲剂绿原酸 硅胶H2015%CMC2Na(13)乙酸丁酯 甲酸 水=72.52.5S320R3700.5454.36g2.16(n=5)97.459药EtodolacAluminumbacked硅胶GF254(60)正己烷 乙酸乙酯 冰乙酸=620.4282100400ng0.388100.6610药柳丁氨醇硫酸盐溴己烯氢氯酸硅胶GF254(60)甲醇 氯仿三乙胺=5.54.50.0527620580ng l-1糖浆:1.4片:1.62(n=5)糖浆:98.84片:99.0糖浆:99.62片:9

13、9.611糖浆3)s2羧甲基2巯基丙氨酸硅胶G(60)正丁醇 冰乙酸 水=3114870.22.0g 7020L2抗坏血酸棕榈酸酯硅胶G(60)氯仿 甲酸 冰乙酸 水=801082激发365扫描4472.520g1.3498.4101.821芦荟口服液芦荟大黄素SG硅胶层析板 乙酸乙酯甲 醇 水=10051S490R6900.160.80g 2.2898.4422苹果制品 棒曲霉素硅胶GF254(60)甲苯 乙酸乙酯 甲酸=63127541250250ng30250ng3.330ng50ng7823蔬菜丹 酰 化 生物氨硅胶GF254 正己烷 正丁醇 三乙胺=90109.13132.515ng

14、24木薯亚麻苦硅胶GHPTLC板 乙酸乙酯丙酮 水=40501052550600ng当天1.93(n=9)隔天3.47(n=8)97.48104.3625烟草 2胡萝卜素HSGF254HPTLC板 苯 丙酮=41S450R52050ng0.5g 3.25(n=5)同板:2.02异板:3.25(n=5)98.626酒苹果酸乳酸硅胶G 乙酸丁酯乙酸=21430020g27表3 薄层色谱在其他方面的应用样品测定成分薄层展开剂测定波长(nm)线性范围RSD(%)检出限回收率(%)文献水 苯酚硅胶G氧化铝 氯仿 二氯甲烷 己烷 乙酸 乙 酯=10101212541.32.8(n=3)10100ng608

15、028二次蒸馏水,活性水I-IO-3IO-4硅胶G+氧化 铝G+微晶 纤 维 素+硅藻土G0.1molL-1氨水 丙酮=910.11.0mg20200g20200g76.4g16.3g16.6g92.9123.838.929862董慧茹等:薄层色谱法在定量分析中的应用续表3样品测定成分薄层展开剂测定波长(nm)线性范围RSD(%)检出限回收率(%)文献污水含 氮 多 环芳烃化合物硅胶GF254(60)二氯甲烷己烷 二乙醚=12812540135ng30苯氧乙酸2,42二氯苯氧乙酸硅胶G 甲苯 甲醇 乙酸=12214403.64.1(n=6)0.0620.040gL-197.096.331复方间

16、苯二酚洗剂邻苯二酚间苯二酚对苯二酚 硅胶H20.5%CMC2Na苯 乙醚 冰乙酸=7212702702853.903.684.671.0710-41.6410-41.9010-4molL-1104.096.097.032合成的 2内酰胺1,52苯并硫氮 杂2 2氯 代2 2内酰胺硅胶GF254(60)25gL-1CMC2Na(13)乙酸乙酯石油醚=18127023100.2855.7g同板:4.84(n=6)异板:5.61(n=4)0.114g96.7533牙齿组织 甲醛氯 仿 二氯甲烷=1327534防腐剂对 羟 基 苯甲酸甲酯对 羟 基 苯甲酸乙酯对 羟 基 苯甲酸丙酯硅胶GF254(60

17、)苯 乙酸乙酯 冰乙酸=2450.3S260R3500.25.0g0.28.0g0.28.0g4.391.302.070.1g0.1g0.1g99.33102.9896.2435高合金不锈钢CrNi微晶纤维素 丙酮 盐酸 水=86862.461.5836土壤苯并a芘C18板 甲醇 乙腈=1137012.5g8437煤炭烃基类型Aluminumbacked硅胶G 二氯甲烷甲醇=955250芳香族:1.3极性的:1.0未洗脱的:1.2(n=4)38参考文献:1 唐于平,楼凤昌.药物分析杂志J ,1998,18(5):305.2 戈早川,余 倩.药物分析杂志J ,1999,19(5):348.3 李

18、海峰,汪宝琪.分析化学J ,1998,26(10):1282.4 伍 娥,周 莉.药物分析杂志J ,1998,18(4):243.5 张 玲,徐新刚.药物分析杂志J ,1998,18(2):123.6 梁 勇,李全民.分析试验室J ,1998,17(1):63.7 刘 杰.药物分析杂志J ,1999,19(5):319.8 刘谦光,张尊听.药物分析杂志J ,2000,20(1):63.9 刘吉金.药物分析杂志J ,2000,20(2):131.10Ramesh T S,Mary F,Aamer.J Planar ChromatogrJ ,1998,11(3):211.11Argekar A P

19、,Powar S G.J Planar Chromatogr J ,1998,11(4):254.12Gunawan I,Sonja W,Lisa A,et al.J Planar Chro2matogrJ ,1998,11(4):263.13Matthias R,Adamczyk M,Rats H,et al.J PlanarChromatogrJ ,1998,11(5):374.14Agbaba D,Djurkovic M,Brboric J,et al.J PlanarChromatogrJ ,1998,11(6):447.15Sane R T,Simita G,Joshi,et al.

20、J Planar ChromatogrJ ,1999,12(2):158.16Argekar A P,Sawant J G.J Planar ChromatogrJ ,962董慧茹等:薄层色谱法在定量分析中的应用1999,12(3):202.17Donna D G,Joseph S.J Planar ChromatogrJ ,1999,12(3):230.18Argekar A P,Powar S G.J Planar Chromatogr J ,1999,12(4):272.19 张启华,张志军.分析测试学报J ,1998,17(4):54.20 孙保国,刘德馨,詹连生.色谱J ,1999,

21、17(1):93.21 汤鲁宏,孙云飞.食品工业科技J ,1999,20(5):57.22 邓郁琼,覃 文.食品科学J ,1999,(10):57.23Silvana V,Alvaro V,Maria P C,et al.J Planar Chro2matogrJ ,1999,12(3):172.24Agenes K.J Planar ChromatogrJ ,1998,11(1):43.25Patricia B,Jacques P,Luc A,et al.J Planar Chro2matogrJ ,1998,11(1):38.26 时 亮,朱晓兰.色谱J ,1999,17(6):606.2

22、7Boido E,Dellacassa E,Carrau F,et al.J Planar Chro2matogrJ ,1999,12(4):269.28Bladek J,Rostkowski A,Neffe S.J Planar ChromatogrJ ,1998,11(5):330.29Mohammad A.J Planar ChromatogrJ ,2000,13(1):12.30Danuta B,Cezary D,Beata J,et al.J Planar Chro2matogrJ ,1999,12(4):265.31 李金昶,赵晓亮.分析化学J ,1999,27(10):1240.

23、32 黄少鹏,徐金瑞.分析化学J ,1999,27(3):331.33 孙 娜,李 媛,王继业,等.色谱J ,1999,17(6):604.34Ryszard S,Katarzyna Rz yxo T,Jamrozek2Man ko A.J Planar ChromatogrJ ,1998,11(6):417.35 朱 玉,李永红.分析化学J ,1998,26(1):120.36Schubert G,Alar V,ZivkoBa bic J,et al.J PlanarChromatogrJ ,1998,11(6):460.37Nemergut R,Johnson R M,Wunch K G,

24、et al.J LiqChrom&Rel TechnolJ ,2000,23(4):579.38Jess V.J Planar ChromatogrJ ,1998,11(4):277.问1.NaF2SnCl2光度法测定磷的操作过程中,当试样含磷w(P)0.02%时,有时会出现钼蓝色泽消退,或变为绿色甚至无色的现象,为什么?2.用“杂多蓝”法作磷的光度测定有何优点?陕西读者 李 兵 答1:这一现象的出现是由于氮的氧化物未驱尽的缘故,且由于试样含磷较低,钼蓝色泽的变化容易为肉眼所觉察。为确保氮氧化物的除尽,在加入NaF2SnCl2溶液并摇匀后随即加入50gL-1脲溶液25ml,即可避免此现象出现。

25、答2:122磷钼杂多酸在适当条件下还原后可得蓝色的“杂多蓝”,借此可进行磷的光度测定。“杂多蓝”的吸收峰位于可见光区的红光区,或者在近红外区。具体波长与还原剂等条件有关。例如,用抗坏血酸作还原剂,所得“杂多蓝”的吸收峰位于840nm波长处,而用氯化亚锡作还原剂时,其吸收峰则位于726nm波长处。但总的说来,用“杂多蓝”法测定可获得比“钼黄”法高得多的灵敏度,而且对测定仪器的要求也比较简单,因此“杂多蓝”或“磷钼蓝”法的应用更为广泛。吴 诚(上海材料研究所200437)仪器分析技术应用学术交流会(第二轮通知)中国分析测试协会、中国有色金属学会与北京有色金属研究总院联合主办的“2002年仪器分析技

26、术应用学术交流会”,筹备工作进展顺利,征文工作已于2001年9月开始,截稿日期为2002年5月30日。目前,会议筹备组已收到大量回执和部分论文。经研究,会议确定于2002年8月中旬在新疆乌鲁木齐市举行。会议报告论文集将以“分析试验室 创刊20周年纪念专辑”的形式隆重出版。凡前往参加会议交流并交纳版面费的论文收入 分析试验室 期刊2002年第21卷第5期或2002年第21卷增刊,正式出版。会议主题内容、征稿要求等详见 分析试验室2001年第20卷第5、6期。由于会议期间正值新疆旅游旺季,饭店、交通、旅游等资源非常紧张,为保证会议圆满成功,会议筹备组要为参会人员提前预定食、住、行等事务。因此,凡未寄交第一轮回执者,请通知会议筹备组,没有论文但欲参加会议的人员也请务必于5月30日前报名,以便联系并寄发第三轮通知。联系地址:北京新街口外大街2号603室分析会议筹备组,邮编:100088,联系电话/传真:010282013328,联系人:孙臣良,E2mail:fenxi 。072董慧茹等:薄层色谱法在定量分析中的应用