定量检测方法学验证探讨课件.ppt

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1、定量检测方法学性能验证探讨定量检测方法学性能验证探讨2015.32015.3？问题？问题第三方试剂做第三方试剂做性能评价性能评价，和我们原装试剂，和我们原装试剂性性能验证能验证实验的实验方案区别大不大？实验的实验方案区别大不大？关键词关键词性能评价性能评价性能验证性能验证检测系统检测系统l问题解析问题解析性能评价和性能验证的区别？性能评价和性能验证的区别？什么是检测系统？什么是检测系统？方法学评价和验证术语方法学评价和验证术语评价（评价（EvaluationEvaluation）临床实验室通过实验，测量新方法的分析性能。临床实验室通过实验，测量新方法的分析性能。验证（验证（Verificati

2、on Verification）方法满足一定性能标准的检验过程。方法满足一定性能标准的检验过程。确认（确认（ValidationValidation ）方法满足预期用途的证明过程。方法满足预期用途的证明过程。证明（证明（Demonstration Demonstration）评价实验室能否遵循厂家指导书，并取得预期结果。评价实验室能否遵循厂家指导书，并取得预期结果。（卫生部北京医院（卫生部北京医院 郭健）郭健）方法学评价和验证术语方法学评价和验证术语建立（建立（Establish Establish）方法学性能）方法学性能 =评价（评价（EvaluationEvaluation）实验室通过对实

3、验室通过对未知其方法学性能未知其方法学性能的检测系统的检测系统/方法进行实方法进行实验评价，以建立其方法学性能。通常针对验评价，以建立其方法学性能。通常针对制造商制造商开发的新的开发的新的检测系统检测系统/方法，或临床方法，或临床实验室实验室自行建立或者组合的检测系自行建立或者组合的检测系统统/方法。方法。验证（验证（VerifyVerify）方法学性能）方法学性能=验证验证(Verification(Verification ）实验室通过对实验室通过对已知其方法学性能已知其方法学性能的检测系统的检测系统/方法进行实方法进行实验评价，证明方法满足一定性能标准和预期用途。通常针对验评价，证明方法

4、满足一定性能标准和预期用途。通常针对实验室实验室内部的质量管理。内部的质量管理。检测系统检测系统测量程序测量程序 measurement procedure measurement procedure进行特定测量时所用的，根据给定的测量方法具体叙述的进行特定测量时所用的，根据给定的测量方法具体叙述的一组操作。一组操作。JJF1001-1998JJF1001-1998，4.64.6检测系统检测系统完成一个检验项目的测定所涉及的完成一个检验项目的测定所涉及的仪器、试剂、校准品、仪器、试剂、校准品、质控品、消耗品、操作程序、质量控制程序、维护保养程质控品、消耗品、操作程序、质量控制程序、维护保养程序

5、等的组合，称为检测系统。如果从更广义来看也可以包序等的组合，称为检测系统。如果从更广义来看也可以包括样品采集器具、检测用水等。若是有手工操作步骤，则括样品采集器具、检测用水等。若是有手工操作步骤，则还应包括具体的操作人员。还应包括具体的操作人员。全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程P47P47狭义：仪器狭义：仪器+试剂试剂+校准品（检测系统校准品（检测系统3 3要素）要素）广义：仪器广义：仪器+试剂试剂+校准品校准品+人员人员+SOP+SOP检测系统的构成检测系统的构成仪器仪器校准品校准品试剂试剂？问题？问题第三方试剂做性能评价，和我们原装试剂性第三方试剂做性能评价，和我们原装试剂性能验证

6、实验的实验方案区别大不大？能验证实验的实验方案区别大不大？问题解析问题解析方法学性能有哪些？方法学性能有哪些？性能评价怎么做？性能评价怎么做？性能验证怎么做？性能验证怎么做？方法学性能方法学性能法规要求法规要求 医疗机构临床实验室管理办法医疗机构临床实验室管理办法（20062006年）年）第三十条第三十条“医疗机构临床实验室应当对方法学进行评价，包医疗机构临床实验室应当对方法学进行评价，包括括准确性、精密度、特异性、线性范围、稳定性、抗干扰性、准确性、精密度、特异性、线性范围、稳定性、抗干扰性、参考范围参考范围等，并有质量保证措施。等，并有质量保证措施。”体外诊断试剂注册管理办法体外诊断试剂注

7、册管理办法 （20072007年）年）第二十条产品性能评估是指对体外诊断试剂分析性能和第二十条产品性能评估是指对体外诊断试剂分析性能和临床性能的评估。临床性能的评估。分析性能主要包括分析性能主要包括分析灵敏度、分析特异性、测定范围、分析灵敏度、分析特异性、测定范围、测定准确性、批内不精密度、批间不精密度等测定准确性、批内不精密度、批间不精密度等。临床性能主要包括临床性能主要包括临床灵敏度、临床特异性临床灵敏度、临床特异性等等。20122012年上海市医疗机构临床实验室质量管理基本内容和要年上海市医疗机构临床实验室质量管理基本内容和要求求 （20122012年）年）第七款第七款 仪器和试剂仪器和

8、试剂 第第6 6条条“仪器、试剂、仪器、试剂、方法更新时应进行方法学验证，并有相应的实验记录。方法方法更新时应进行方法学验证，并有相应的实验记录。方法学验证的内容至少应包括：学验证的内容至少应包括：精密度；精密度；正确度；正确度；线性范线性范围；围；病人结果的可报告范围；病人结果的可报告范围；生物参考区间。生物参考区间。”方法学性能方法学性能实验室认可的要求实验室认可的要求CAPCAP认可认可良好良好的实验室惯例要求的实验室惯例要求每个每个检测检测/方法方法/仪器系统在其用于仪器系统在其用于患患者检测之前，者检测之前，需提供全部的性能参数，无需提供全部的性能参数，无需要考虑需要考虑实验室是实验

9、室是否首次使用否首次使用。如适。如适用用，实验室必须提供每个，实验室必须提供每个用于用于检测检测血液血液项项目的目的准确准确度度、精密度、分析灵敏度、干扰和可报告范围、精密度、分析灵敏度、干扰和可报告范围(也就也就是，分析测量范围是，分析测量范围(AMR)(AMR)和临床可报告范围和临床可报告范围(CRR)(CRR)的数据。的数据。方法学性能方法学性能实验室认可的要求实验室认可的要求ISO15189ISO15189认可认可何谓方法学性能何谓方法学性能正确度正确度(TruenessTrueness)精密度精密度(PrecisionPrecision)分析测量范围分析测量范围(Analytical

10、 Measurement Range Analytical Measurement Range)或线性或线性(Linearity Linearity)/)/可报告范围（可报告范围（Reportable Reportable RangeRange）参考区间参考区间(Reference IntervalReference Interval)定量定量/检测限检测限(Limit of Detection/QuantitationLimit of Detection/Quantitation)/)/灵灵敏度敏度干扰实验干扰实验(Interference Testing Interference Test

11、ing)基质效应基质效应(Matrix Effects Matrix Effects)方法学性能评价方法学性能评价正确度：正确度：EP-9A3EP-9A3精密度精密度:EP-5A2:EP-5A2分析测量范围分析测量范围：EP-6AEP-6A参考区间：参考区间：EP28-A3EP28-A3（C28-A3C28-A3）定量定量/检测限检测限/灵敏度：灵敏度：EP-17A2EP-17A2干扰实验：干扰实验：EP07-A2 EP07-A2基质效应：基质效应：EP14-A2 EP14-A2问题问题ISO15189 2007ISO15189 2007版中提及性能参数（如线性、版中提及性能参数（如线性、精密

12、度、以测量不确定度表示的准确性、检出精密度、以测量不确定度表示的准确性、检出限、测量区间、测量真实性、分析灵敏度和分限、测量区间、测量真实性、分析灵敏度和分析特异性），以及干扰（如乳糜血、溶血、胆析特异性），以及干扰（如乳糜血、溶血、胆红素血）及交叉反应等是否都需要进行验证？红素血）及交叉反应等是否都需要进行验证？（南）（南）CNAS-CL38CNAS-CL38：20122012医学实验室质量和能力医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明认可准则在临床化学检验领域的应用说明5.5.1.2 5.5.1.2 检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包检验方法和程序的分析性能验证内容至

13、少应包括括正确度、精密度和可报告范围。正确度、精密度和可报告范围。检验程序的验证检验程序的验证 CNAS-CL02 CNAS-CL02：20122012医学实验室质量和能力认医学实验室质量和能力认可准则可准则5.5.1.25.5.1.2“在常规应用前在常规应用前，应由，应由实验室实验室对未加修改而使用的已确认的对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证检验程序进行独立验证。”“实验室进行的独立验证，应通过获取客观证据（以性能特实验室进行的独立验证，应通过获取客观证据（以性能特征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。征形式）证实检验程序的性能与其声明相符。”关键点：关键点：时间：时间：“在常

14、规应用前在常规应用前 ”人物：人物：“实验室实验室 ”事件：事件：“对检验程序进行独立验证。对检验程序进行独立验证。”检验程序验证的内容检验程序验证的内容1 1、精密度、精密度2 2、正确度、正确度3 3、参考范围、参考范围4 4、分析测量范围、分析测量范围5 5、分析灵敏度的验证、分析灵敏度的验证6 6、临床可报告范围、临床可报告范围问题问题性能评估或实验室质量目标这块，对免疫项目的性能评估或实验室质量目标这块，对免疫项目的CVCV要求，目前基本都是要求，目前基本都是参考卫生部的总误差要求，然后取参考卫生部的总误差要求，然后取1/31/3作为要求，但我们部分免疫项目如作为要求，但我们部分免疫

15、项目如E2E2，PROGPROG等项目在实际操作中满足不了等项目在实际操作中满足不了1/31/3的卫生部总误差，但满足我的卫生部总误差，但满足我们试剂说明书上的声明，这种情况，实验室是否可以用厂家声明作为实们试剂说明书上的声明，这种情况，实验室是否可以用厂家声明作为实验室质量控制的要求，如果可以，是否有出处？这样方便我们说服用户验室质量控制的要求，如果可以，是否有出处？这样方便我们说服用户（兴）（兴）CVCV的标准，是选择卫生不的还是选择的标准，是选择卫生不的还是选择CLIA88CLIA88的标准或是厂家声明的标的标准或是厂家声明的标准？（吴）准？（吴）生化、免疫等各个项目重复性生化、免疫等各

16、个项目重复性CVCV要求出处，除了要求出处，除了clal88 clal88 或试剂说明书或试剂说明书？还有多少个？免疫项目目前我们达不到客户要求的？还有多少个？免疫项目目前我们达不到客户要求的CV10%CV10%以内，这类以内，这类问题问题ISOISO过程中专家如何判定合格。其它有更宽范围的标准可以引用吗过程中专家如何判定合格。其它有更宽范围的标准可以引用吗?（东）（东）问题解析问题解析如何来制定质量目标？如何来制定质量目标？质量目标的制定质量目标的制定质量目标的制定质量目标的制定根据生物学变异制定的质量目标根据生物学变异制定的质量目标最全生物变异数据库最全生物变异数据库以室间质量评价允许总误

17、差制定的质量目标以室间质量评价允许总误差制定的质量目标卫生部临检中心卫生部临检中心CLIA88CLIA88以以1/21/2总误差为偏倚范围，以总误差为偏倚范围，以1/31/3总误差为不精密度范围总误差为不精密度范围推荐阅读：推荐阅读：临床检验质量规范临床检验质量规范参考书籍参考书籍全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程P79P79临床检验质量控制技术临床检验质量控制技术（第二版）王治国（第二版）王治国P457P457临床检验方法学评价临床检验方法学评价杨有业杨有业 张秀明张秀明 P59P59E2E2质量目标的比较质量目标的比较不精密度不精密度正确度正确度总误差总误差基于生物变异基于生物变异1

18、1.2511.258.38.326.8626.86卫生部卫生部8.38.312.512.52525实际使用中的问题实际使用中的问题评审员通常只认卫生部室间质评（评审员通常只认卫生部室间质评（EQA/PTEQA/PT）允许总误差和）允许总误差和CLIACLIA规规范；范；评审员只在没有上述规范时才考虑其它标准；评审员只在没有上述规范时才考虑其它标准；按照按照EP-15EP-15评价方案比较标准是与厂商声明比较，所以可以用厂商评价方案比较标准是与厂商声明比较，所以可以用厂商声明为标准，评审员在评审方法学验证报告时通常无异议，但是声明为标准，评审员在评审方法学验证报告时通常无异议，但是在现场比对时基

19、本以在现场比对时基本以EQA/PTEQA/PT为标准。为标准。CLSICLSI推荐精密度评价方法推荐精密度评价方法建立性能建立性能 EP05-A2,EP05-A2,Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods;Approved GuidelineSecond Edition)方法概要：方法概要：样本：样本：至少至少2 2个水平样本，浓度在分析范围之内，最好在医学决定个水平样本，浓度在分析范围之内，最好在医学决定水平；可以是稳定的患者样本，或蛋白基质的样本。水平；可以是稳定的患者样本，或蛋白基质的样

20、本。检测：检测：每个样本测定每个样本测定2 2批，每批测定批，每批测定2 2，连续测定，连续测定2020天。天。统计分析：统计分析：统计计算精密度。统计计算精密度。CLSICLSI推荐精密度验证方法推荐精密度验证方法验证性能：验证性能：EP15-A2,EP15-A2,User Verification of Performance for Precision and User Verification of Performance for Precision and Trueness;Approved GuidelineSecond EditionTrueness;Approved Guide

21、lineSecond Edition方法概要：方法概要：样本：样本：至少至少2 2个水平样本，浓度应与厂商申明的性能的浓度相近，。个水平样本，浓度应与厂商申明的性能的浓度相近，。检测：检测：每天测定每天测定1 1批，每批测定批，每批测定3 3次，连续测定次，连续测定5 5天。天。统计分析：统计分析：计算批内不精密度和总不精密度；统计估计不精密度计算批内不精密度和总不精密度；统计估计不精密度与厂商声明不精密度比较。与厂商声明不精密度比较。贝克曼贝克曼IgGIgG精密度声明精密度声明接近实际的精密度接近实际的精密度理想的精密度理想的精密度低浓度时精密度低浓度时精密度CV更大更大贝克曼贝克曼E2E2

22、精密度声明精密度声明精密度比较标准：精密度比较标准：120时换算成时换算成SD，精密度验证精密度验证填写合适精密度填写合适精密度排除统计方法误差排除统计方法误差CLSICLSI推荐正确度评价方法推荐正确度评价方法建立性能建立性能 EP09-A2-IR,EP09-A2-IR,Method Comparison and Bias Estimation Using Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved GuidelineSecond Edition(Interim Patient Samples;Ap

23、proved GuidelineSecond Edition(Interim Revision)Revision)方法概要：方法概要：样本：样本：临床实验室至少临床实验室至少4040个，厂家至少个，厂家至少100100个；浓度分布于整个个；浓度分布于整个分析测量范围，如可能至少分析测量范围，如可能至少50%50%样本在参考范围以外。样本在参考范围以外。检测：检测：每个样本测定每个样本测定2 2次；测定应分几天完成（修订前要求分次；测定应分几天完成（修订前要求分5 5天）天）；每天测定应在；每天测定应在2 2小时内完成；指定测定次序。第二次反向进行。小时内完成；指定测定次序。第二次反向进行。统计

24、分析：统计分析：方法内离群值检验；数据作图；目测线性关系；方法方法内离群值检验；数据作图；目测线性关系；方法间离群值检验；间离群值检验；X X值合适范围检验；线性回归分析；预期偏倚及可信值合适范围检验；线性回归分析；预期偏倚及可信区间计算；预期结果与可接受标准比较。区间计算；预期结果与可接受标准比较。CLSICLSI推荐正确度验证方法推荐正确度验证方法验证性能：平均偏倚法验证性能：平均偏倚法 EP15-A2,EP15-A2,User Verification of Performance for Precision and User Verification of Performance fo

25、r Precision and Trueness;Approved GuidelineSecond EditionTrueness;Approved GuidelineSecond Edition方法概要：方法概要：样本：样本：2020份患者样本，浓度在线性范围以内。份患者样本，浓度在线性范围以内。检测：检测：每个样本测定每个样本测定1 1次；实验方法和比较方法应在次；实验方法和比较方法应在4 4小时内完成；小时内完成；所有测定可在同一天完成，推荐每天所有测定可在同一天完成，推荐每天5-75-7样本分样本分3-43-4天完成。天完成。统计分析：统计分析：计算两方法偏倚；统计估计偏倚与厂商声明偏

26、倚比较。计算两方法偏倚；统计估计偏倚与厂商声明偏倚比较。贝克曼贝克曼IgGIgG正确度声明正确度声明厂商提供的厂商提供的“等价性等价性”使用受限制。使用受限制。主要原因实际使用时比较方法不一致；主要原因实际使用时比较方法不一致；推导预期偏倚复杂。推导预期偏倚复杂。正确度验证正确度验证偏倚目标可设定为实验室质量目标；也可是偏倚目标可设定为实验室质量目标；也可是EQA目标；目标；CLIA目标。目标。卫生部卫生部IgG测定测定EQA为为25%，偏倚通常为，偏倚通常为1/2EQA，即，即12.5%。偏倚目标可更改偏倚目标可更改问题问题一客户使用的国家标准的一客户使用的国家标准的NANA参考范围，该标准

27、和我们仪器说参考范围，该标准和我们仪器说明书只高一个单位，但是操作老师反映有不小一定数量的样明书只高一个单位，但是操作老师反映有不小一定数量的样本都低于该标准本都低于该标准3-43-4单位，该仪器质控结果和卫生部室间质评单位，该仪器质控结果和卫生部室间质评结果都良好，这是不是代表这个参考范围不适用？要重新结果都良好，这是不是代表这个参考范围不适用？要重新做该室参考范围？（南）做该室参考范围？（南）由于性激素参考范围涉及到不同怀孕时期，如黄体期等不同由于性激素参考范围涉及到不同怀孕时期，如黄体期等不同孕期的参考范围如何验证？（西）孕期的参考范围如何验证？（西）问题解析问题解析参考区间的适用性参考

28、区间的适用性参考区间的转换参考区间的转换参考区间的验证参考区间的验证参考区间的适用性参考区间的适用性因为确定一个可靠的参考区间是一个很繁重和耗因为确定一个可靠的参考区间是一个很繁重和耗费资金的任务，将某个参考区间从一个实验室转费资金的任务，将某个参考区间从一个实验室转换给其他实验室，通过一些过程以减少费用并且换给其他实验室，通过一些过程以减少费用并且更方便，这是很有用的。更方便，这是很有用的。作为较新的项目和方法被引入更多的实验室，不作为较新的项目和方法被引入更多的实验室，不论实验室的大小，不切实际地要求每个实验室去论实验室的大小，不切实际地要求每个实验室去形成它自己的参考区间，很困难。形成它

29、自己的参考区间，很困难。结果，临床实验室会越来越多地依靠其他实验室结果，临床实验室会越来越多地依靠其他实验室或诊断产品的厂商，产生和提供相应和合适的参或诊断产品的厂商，产生和提供相应和合适的参考值数据，以期望予以转换。考值数据，以期望予以转换。问题问题参考范围的选择，应该参照厂家说明书，还是只参考范围的选择，应该参照厂家说明书，还是只要是权威部门发布的或者文献资料都可以用来作要是权威部门发布的或者文献资料都可以用来作为验证？（吴）为验证？（吴）参考区间选择参考区间选择公认公认/权威教科书、书籍权威教科书、书籍全国临床检验操作规程全国临床检验操作规程 （第三版）（第三版）标准或指南标准或指南WS

30、T4041-2012WST4041-2012临床常用生化检验项目参考区间临床常用生化检验项目参考区间IVDIVD厂商厂商CLSICLSI推荐参考区间推荐参考区间评价方法评价方法C28-A3,C28-A3,Defining,Establishing,and Verifying Defining,Establishing,and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved GuidelineThird

31、 EditionGuidelineThird Edition方法概要：方法概要：样本：样本：120120份表观健康者样本，如果参考区间有男女区别需各份表观健康者样本，如果参考区间有男女区别需各120120个。个。数据分析。数据分析。参考区间转换参考区间转换EP-28A3(C-28)EP-28A3(C-28)新概念新概念转换参考区间（转换参考区间（transferring a reference transferring a reference intervalinterval）将以往确定的参考区间改变适应某新分析方法将以往确定的参考区间改变适应某新分析方法或用于新场所的过程。或用于新场所的过程

32、。转换参考区间的前提转换参考区间的前提分析系统的可比性；和分析系统的可比性；和检测对象群体的可比性。检测对象群体的可比性。参考区间转换参考区间转换按照按照CLSI EP09CLSI EP09比对获得线性回归：比对获得线性回归：y=1.004x 0.628 y=1.004x 0.628，r r2 2=0.99=0.99假设现有方法的参考区间为假设现有方法的参考区间为5015050150。依据上述。依据上述等式，新的参考区间依然为等式，新的参考区间依然为5015050150：因此，证实了新方法的参考区间依然为：因此，证实了新方法的参考区间依然为：50150.50150.参考区间转换参考区间转换假设

33、新的回归公式为：假设新的回归公式为：，r r2 2=0.990=0.990。即使现在斜率的偏倚十分大，相关系数依然很好，即使现在斜率的偏倚十分大，相关系数依然很好，截距也不大。所以，参考范围可转换为：截距也不大。所以，参考范围可转换为：7823578235。参考区间转换注意点参考区间转换注意点应该完全按照应该完全按照EP09EP09文件的方案进行比对。文件的方案进行比对。比对数值比对数值的分布范围的分布范围有有足够的代表足够的代表性性，相关，相关要反应真实的要反应真实的分布，且比对范围要与参考区间大小相应。分布，且比对范围要与参考区间大小相应。截距不大于参考区间，否则实验室需建立参考区间。截距

34、不大于参考区间，否则实验室需建立参考区间。在检测范围较小的情况下，如钠，不可使用线性回归分析。在检测范围较小的情况下，如钠，不可使用线性回归分析。允许使用两个方法的均值差异去纠正方法间均值偏倚来设允许使用两个方法的均值差异去纠正方法间均值偏倚来设定参考区间。定参考区间。转换的参考区间，仍然推荐用小样本（转换的参考区间，仍然推荐用小样本（n=20n=20）验证参考）验证参考区间。区间。如果验证了参考区间的某个亚类（部分），则不需要去验如果验证了参考区间的某个亚类（部分），则不需要去验证所有其他的亚类（部分）。证所有其他的亚类（部分）。参考区间转换问题参考区间转换问题一客户使用的国家标准的一客户使

35、用的国家标准的NANA参考范围，该标准和参考范围，该标准和我们仪器说明书只高一个单位，但是操作老师反我们仪器说明书只高一个单位，但是操作老师反映有不小一定数量的样本都低于该标准映有不小一定数量的样本都低于该标准3-43-4单位，单位，该仪器质控结果和卫生部室间质评结果都良好，该仪器质控结果和卫生部室间质评结果都良好，这是不是代表这个参考范围不适用？要重新做这是不是代表这个参考范围不适用？要重新做该室参考范围？（南）该室参考范围？（南）是否考虑过分析系统的可比性；和检测对象群体是否考虑过分析系统的可比性；和检测对象群体的可比性。的可比性。是否通过比对获得的公式进行转换解决？是否通过比对获得的公式

36、进行转换解决？如果仍然存在问题则需考虑建立参考区间如果仍然存在问题则需考虑建立参考区间。参考区间转换问题参考区间转换问题由于性激素参考范围涉及到不同怀孕时期，如黄由于性激素参考范围涉及到不同怀孕时期，如黄体期等不同孕期的参考范围如何验证？（西）体期等不同孕期的参考范围如何验证？（西）如果验证了参考区间的某个亚类（部分），则不如果验证了参考区间的某个亚类（部分），则不需要去验证所有其他的亚类（部分）。需要去验证所有其他的亚类（部分）。EP-28A3 EP-28A3，p30p30只要进行比对并进行一个分组的验证，证明参考只要进行比对并进行一个分组的验证，证明参考范围是适用的，其他部分就不需要逐个验

37、证。范围是适用的，其他部分就不需要逐个验证。CLSICLSI推荐参考区间推荐参考区间验证方法验证方法C28-A3,C28-A3,Defining,Establishing,and Verifying Defining,Establishing,and Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved Reference Intervals in the Clinical Laboratory;Approved GuidelineThird EditionGuidelineThird Edition方法概要：参考区

38、间转换法方法概要：参考区间转换法 样本：样本：2020份表观健康者样本，如果参考区间有男女区别需各份表观健康者样本，如果参考区间有男女区别需各2020个。个。数据分析：至少有数据分析：至少有1818个结果在参考区间之内。个结果在参考区间之内。贝克曼贝克曼IgGIgG参考区间声明参考区间声明参考区间验证参考区间验证参考区间引用需权威；参考区间引用需权威；表观健康人群需定义；表观健康人群需定义；方法间有一致性；方法间有一致性；有离群值需剔除。有离群值需剔除。问题问题由于我们免疫的项目是使用多点定标，根据我们公由于我们免疫的项目是使用多点定标，根据我们公司提供的文件是可以不用做线性验证的，详见附件，

39、司提供的文件是可以不用做线性验证的，详见附件，对于实验室认证的用户在评审时，提供这两份文件对于实验室认证的用户在评审时，提供这两份文件是否足够证明不做线性验证是可以接受的。支持文是否足够证明不做线性验证是可以接受的。支持文件见件见Calibration Verification and Linearity Calibration Verification and Linearity LetterLetter和和calibration and calibrtaion calibration and calibrtaion verificationverification（兴）（兴）问题解析问题解

40、析-依据依据校准验证校准验证 即用测定患者样本同样的方式检测已知浓度的样品以确保即用测定患者样本同样的方式检测已知浓度的样品以确保检测系统能准确检测分布于可报告范围（浓度）内的样本。检测系统能准确检测分布于可报告范围（浓度）内的样本。如果检测系统的校准程序包含如果检测系统的校准程序包含3 3个或个或3 3个以上水平的校准品，个以上水平的校准品，并且包含低、中、高值，并且至少每并且包含低、中、高值，并且至少每6 6个月校准一次，那么个月校准一次，那么也符合校准验证的要求也符合校准验证的要求问题解析问题解析-含义含义校准验证校准验证 即用测定患者样本同样的方式检测已知浓度的样品以确保即用测定患者样

41、本同样的方式检测已知浓度的样品以确保检测系统能检测系统能准确准确检测分布于检测分布于可报告范围可报告范围（浓度）内的样本。（浓度）内的样本。校准校准验证的目的验证的目的：2003 2003年年1 1月月CLIA88CLIA88中的定义中的定义方法校准方法校准准确与否的准确与否的验证验证可报告范围的适用性可报告范围的适用性的验证的验证？问题问题当免疫检测项目可以稀释时，延伸的浓度范围是否可靠？当免疫检测项目可以稀释时，延伸的浓度范围是否可靠？是否需要验证？是否需要验证？分析测量范围和可报告范围的概念分析测量范围和可报告范围的概念分析测量范围和分析测量范围和临床可报告范围临床可报告范围分析测量范围

42、分析测量范围(Analytical Measurement Range Analytical Measurement Range，AMRAMR)或线性或线性(Linearity Linearity)指样本没有经过任何预处理指样本没有经过任何预处理(浓缩或稀释浓缩或稀释)检测方法能够直检测方法能够直接测定出待测物的范围。接测定出待测物的范围。临床可报告范围（临床可报告范围（Clinically Reportable Clinically Reportable RangeRange，CRR)CRR)；又称可报告范围（；又称可报告范围（Reportable Reportable Range)Rang

43、e)指检测方法指检测方法/检测程序可采用对标本的稀释、浓缩或者其检测程序可采用对标本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接分析测量下的分析物值的范围。他预处理用于扩展直接分析测量下的分析物值的范围。分析测量范围和分析测量范围和临床可报告范围关系临床可报告范围关系检测灵敏度检测灵敏度/检测下限检测下限/CRR下限下限分析测量范围分析测量范围最大稀释度最大稀释度可报告范围的上限可报告范围的上限问题问题-建议建议即使不做即使不做AMRAMR的验证，但是对于可稀释项目仍然的验证，但是对于可稀释项目仍然要做最大稀释度的验证，以验证可报告范围上限。要做最大稀释度的验证，以验证可报告范围上限。不做不做AMR

44、AMR验证是基于验证是基于CLIACLIA，是美国国内法，对于，是美国国内法，对于中国中国/ISO/ISO认可并不适用，评审员通常不会接受。认可并不适用，评审员通常不会接受。即使美国也并非所有多点校准就不做即使美国也并非所有多点校准就不做AMRAMR验证，验证，CAPCAP就提供很多检测项目的线性验证品，包括多就提供很多检测项目的线性验证品，包括多点校准的免疫检测，并以此为特色服务。点校准的免疫检测，并以此为特色服务。CLSICLSI推荐分析测量范围推荐分析测量范围验证方法验证方法EP06-A,EP06-A,Evaluation of the Linearity of Quantitative

45、 Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Statistical Approach;Approved Measurement Procedures:A Statistical Approach;Approved GuidelineGuideline方法概要：方法概要：样本：样本：5 5份样本份样本,浓度为浓度为L,0.75L+0.25HL,0.75L+0.25H，0.5L+0.5H,0.5L+0.5H,0.25L+0.75H,H0.25L+0.75H,H。检测：检测：每个样本测定每个样本测定3 3

46、次。次。统计分析：统计分析：多项式回归分析多项式回归分析，或简单估计法。或简单估计法。简单估计：简单估计：r r 0.9750.975，0.970.97 斜率斜率 1.031.03，截距与零无统，截距与零无统计学差异。计学差异。罗氏罗氏 NSE AMR NSE AMR 声明声明AMR为为0.050-370ng/ml最大稀释度为最大稀释度为1:2可报告范围为可报告范围为0.050-740ng/ml分析测量范围验证分析测量范围验证本方案严格而言，只是本方案严格而言，只是使用了使用了EP-6文件的实验文件的实验方案，实验结果统计和方案，实验结果统计和分析使用的是平均斜率分析使用的是平均斜率法。法。平

47、均斜率法要求较为严平均斜率法要求较为严格，对于校准曲线为直格，对于校准曲线为直线的方法，如生化中服线的方法，如生化中服从朗伯比尔定律的方法从朗伯比尔定律的方法较为适宜。较为适宜。如果平均斜率统计分析如果平均斜率统计分析法未能通过，可采用多法未能通过，可采用多项式回归分析、量化误项式回归分析、量化误差法。差法。贝克曼贝克曼 IgG AMRIgG AMR声明声明贝克曼贝克曼IgG测定已经测定已经过预稀释，非严格的过预稀释，非严格的分析测量范围。分析测量范围。可报告范围验证方法可报告范围验证方法量化误差法量化误差法方法概要：方法概要：样本：样本：选择患者高值及低值新鲜血清，将高值与低值按比例进行选择

48、患者高值及低值新鲜血清，将高值与低值按比例进行稀释，比例为：稀释，比例为：L,3L+1H,2L+2H.1L+3H,HL,3L+1H,2L+2H.1L+3H,H。检测：检测：每个浓度测定每个浓度测定3 3次，所有实验应在一天内完成。收集实验数次，所有实验应在一天内完成。收集实验数据进行统计分析。据进行统计分析。统计分析：计算实测均值和理论值之间的偏倚，偏倚符统计分析：计算实测均值和理论值之间的偏倚，偏倚符合质量目标。合质量目标。临床检验方法确认与性能验证临床检验方法确认与性能验证王治国主编王治国主编第第16章方法可报告范围的确定章方法可报告范围的确定可报告范围验证方法可报告范围验证方法量化误差法

49、量化误差法最大稀释度验证方法最大稀释度验证方法方法概要：方法概要：样本：样本：浓度为接近分析范围上限（浓度为接近分析范围上限（20%20%以内）的标本进行系列稀释，回收以内）的标本进行系列稀释，回收率符合质量标准的最大稀释度的浓度范围即为可报告范围上限。率符合质量标准的最大稀释度的浓度范围即为可报告范围上限。检测：检测：每个样本测定每个样本测定3 3次。次。统计分析：统计分析：计算回收率，回收率符合质量标准。回收率通常定为计算回收率，回收率符合质量标准。回收率通常定为100%100%10%-20%10%-20%或计算偏倚，偏倚符合质量目标。或计算偏倚，偏倚符合质量目标。最大稀释度验证最大稀释度

50、验证最大稀释度并非越高越好，最大稀释度的确定通过最大稀释度并非越高越好，最大稀释度的确定通过2种途径：种途径：1、技术途径：最大稀释度实验、厂商说明，比如罗氏、技术途径：最大稀释度实验、厂商说明，比如罗氏NSE说明说明书推荐书推荐1:2稀释，故只需验证稀释，故只需验证1:2的稀释度即可。的稀释度即可。2、临床评审：在技术可达到条件下，请临床医生确定报告上限。、临床评审：在技术可达到条件下，请临床医生确定报告上限。比如：临床医生认可比如：临床医生认可NSE的报告范围上限超过的报告范围上限超过740ng/ml无实际无实际临床意义临床意义问题问题生化项目的灵敏度到底要求做那些：空白灵敏度还是检测生化