最低检测限与幻灯片.ppt

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1、最低检测限与第1页，共30页，编辑于2022年，星期六教学要求与目的教学要求与目的掌握：掌握：1.1.线性试验的原理、用途。线性试验的原理、用途。2.2.最低检测限的定义及其评价方法。最低检测限的定义及其评价方法。3.3.血清总蛋白的测定原理及操作方法。血清总蛋白的测定原理及操作方法。熟悉：熟悉：1.1.可报告范围、分析测量范围的概念。可报告范围、分析测量范围的概念。2.2.生物检测限与功能灵敏度的概念。生物检测限与功能灵敏度的概念。3.3.血清总蛋白测定的临床意义。血清总蛋白测定的临床意义。第2页，共30页，编辑于2022年，星期六一、血清总蛋白测定一、血清总蛋白测定凯氏定氮法凯氏定氮法 参

2、考方法参考方法 双缩脲法双缩脲法 常规测定方法常规测定方法酚试剂法酚试剂法染料结合法染料结合法浊度法、紫外光谱法浊度法、紫外光谱法第3页，共30页，编辑于2022年，星期六（一）实验原理（一）实验原理 蛋白质蛋白质 +Cu在在540nm540nm波长处有吸收峰，在一定浓度范围波长处有吸收峰，在一定浓度范围内其吸光度增加与蛋白含量成正比，由此内其吸光度增加与蛋白含量成正比，由此可求得蛋白质含量。可求得蛋白质含量。OH2+紫红色络合物紫红色络合物第4页，共30页，编辑于2022年，星期六（二）实验试剂（二）实验试剂 1 1、双缩脲试剂、双缩脲试剂2 2、标准液、标准液本试剂盒为总蛋白本试剂盒为总蛋

3、白50g/L50g/L氢氧化钠氢氧化钠 酒石酸钾钠酒石酸钾钠 硫酸铜硫酸铜 碘化钾碘化钾 第5页，共30页，编辑于2022年，星期六（三）操作方法（三）操作方法 1 1、操作参数：、操作参数：波长：波长：540nm540nm温度：温度：3737测定模式：终点法测定模式：终点法 第6页，共30页，编辑于2022年，星期六2.2.操作步骤操作步骤（ul）BSUDH2O20标准液20血清20双缩脲试剂100010001000 混匀，37水浴10分钟，在540nm波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。第7页，共30页，编辑于2022年，星期六3 3、计算、计算血清总蛋白血清总蛋白(g/L)(g/L)=

4、测定管吸光度测定管吸光度标准管吸光度标准管吸光度蛋白标准液浓度蛋白标准液浓度（50g/L）参考值参考值：6083g/L第8页，共30页，编辑于2022年，星期六（四）注意事项（四）注意事项 1.1.严重溶血和黄疸可使测定结果偏高严重溶血和黄疸可使测定结果偏高,可可2.2.作标本空白管消除。作标本空白管消除。2.2.脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。脂肪乳糜干扰比色，可加丙酮离心。3.3.右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。右旋糖酐可使测定产生混浊影响结果。第9页，共30页，编辑于2022年，星期六4.4.灵敏度较低。灵敏度较低。1.1.精密度较好、准确度较高，精密度较好、准确度较高，WHO推荐方法

5、。推荐方法。（五）方法学评价（五）方法学评价3.3.操作简便你、快速，成本低廉。操作简便你、快速，成本低廉。2.2.线性范围宽（线性范围宽（10-120g/L10-120g/L）。）。第10页，共30页，编辑于2022年，星期六（六）临床意义（六）临床意义1.1.蛋白浓度升高蛋白浓度升高（1 1）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。）血液浓缩：脱水、外伤性休克等。（2 2）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、免）蛋白质合成增加：多发性骨髓瘤、免疫增殖病等。疫增殖病等。第11页，共30页，编辑于2022年，星期六（3 3）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。）蛋白质合成障碍：如肝脏疾病。（1 1）蛋白丢失：如肾病综

6、合征。）蛋白丢失：如肾病综合征。2.2.蛋白浓度降低蛋白浓度降低（2 2）摄入不足：营养不良。）摄入不足：营养不良。第12页，共30页，编辑于2022年，星期六二、检测低限试验二、检测低限试验 检测低限（检测低限（LLD）：指当标本中不含有待测分）：指当标本中不含有待测分析物时，反应响应量可能出现的数值范围，即单析物时，反应响应量可能出现的数值范围，即单次测量可达到的非空白检测响应量对应的分析物次测量可达到的非空白检测响应量对应的分析物量。量。第13页，共30页，编辑于2022年，星期六 生物检测限（生物检测限（BLD）：某样品单次检测可能具有）：某样品单次检测可能具有的最小响应量刚大于空白检

7、测低限响的最小响应量刚大于空白检测低限响 应量时，该样应量时，该样品内含有的分析物浓度或其它量值。品内含有的分析物浓度或其它量值。第14页，共30页，编辑于2022年，星期六 功能灵敏度（功能灵敏度（FS）：以日间重复）：以日间重复CV为为20%时对时对应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或应检测限样品具有的平均浓度确定为检测系统或方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值方法可定量报告的分析物的最低浓度或其它量值。第15页，共30页，编辑于2022年，星期六（一）原理（一）原理 选择合适的空白标本，该标本与待测标本的区别选择合适的空白标本，该标本与待测标本的区别在于不含有待测物质，一般用

8、处理过的标本或一般在于不含有待测物质，一般用处理过的标本或一般标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。本次实标本，在分析步骤中省去关键试剂或操作。本次实验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进行多验采用蒸馏水作为空白标本，采用双缩脲法进行多次测定，求出吸光度的均值及标准差，计算最低检次测定，求出吸光度的均值及标准差，计算最低检测限。测限。第16页，共30页，编辑于2022年，星期六（二）操作步骤（二）操作步骤（ul）BSU（1-10）DH2O20标准液标准液20双缩脲试剂双缩脲试剂100010001000 混匀，混匀，3737水浴水浴1010分钟，在分钟，在540nm540nm波长处，波长处，用

9、空白管调零，读取各管吸光度。用空白管调零，读取各管吸光度。第17页，共30页，编辑于2022年，星期六（三）计算（三）计算 1.计算计算10次测定的平均吸光度及标准差。次测定的平均吸光度及标准差。2.计算最低检测限：平均吸光度计算最低检测限：平均吸光度+3S 3.将吸光度值转换成浓度单位。将吸光度值转换成浓度单位。LLD=A低低/A标标C标标第18页，共30页，编辑于2022年，星期六 可报告范围（可报告范围（RR）：指可以报告的所有结果的）：指可以报告的所有结果的范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。床可报告范围。三、线性范围试

10、验三、线性范围试验第19页，共30页，编辑于2022年，星期六 分析测量范围（分析测量范围（AMR）：指对没有进行任何预）：指对没有进行任何预处理（稀释、浓度等）的标本，由检测系统直接处理（稀释、浓度等）的标本，由检测系统直接测量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内测量得到的待测物的可靠结果范围，在此范围内一系列不同样本分析物的测量值与其实际浓度一系列不同样本分析物的测量值与其实际浓度（真值）呈线性比例关系。也即线性范围。（真值）呈线性比例关系。也即线性范围。第20页，共30页，编辑于2022年，星期六 临床可报告范围（临床可报告范围（CRR）：指定量检测项目向）：指定量检测项目向临床能报告

11、的检测范围，患者样本可经稀释、浓临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其它缩或其它预处理。预处理。第21页，共30页，编辑于2022年，星期六（一）原理（一）原理 线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性）与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它围的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映整个系统的输出特征。反映整个系统的输出特征。第22页，共30页，编辑于2022年，星期六 本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶液，用双缩本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶液，用双缩脲试剂测定

12、各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐脲试剂测定各自的浓度，以标准液预期浓度为横坐标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘标，测得浓度为纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出一条直线，即计量反应曲线。制出一条直线，即计量反应曲线。第23页，共30页，编辑于2022年，星期六（二）试剂（二）试剂 1.蛋白质标准液（蛋白质标准液（50g/L）2.混合血清（混合血清（100g/L）3.双缩脲试剂双缩脲试剂第24页，共30页，编辑于2022年，星期六（三）操作步骤（三）操作步骤 各测定管均测定双份，混匀，各测定管均测定双份，混匀，3737水浴水浴1010分分钟，在钟，在540nm540nm波长处，用空白管

13、调零，读取各波长处，用空白管调零，读取各管吸光度。管吸光度。（ul）BSU1U2U3U4U5DH2O20161284标准液标准液20血清血清48121620试剂试剂1000100010001000100010001000第25页，共30页，编辑于2022年，星期六（四）记录实验数据（四）记录实验数据（五）评价（五）评价 1.1.目测法：是评估几个不同浓度样本的多目测法：是评估几个不同浓度样本的多次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上的直次测量均值与实际值之间是否具有肉眼上的直线关系。没有用到统计学方法来验证线性。线关系。没有用到统计学方法来验证线性。第26页，共30页，编辑于2022年，星期六2

14、.平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统平均斜率法：是采用最小二乘法直线回归作统计分析方法。计分析方法。以总蛋白浓度预期值为横坐标，测以总蛋白浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若所有实验点定值为纵坐标，在坐标纸上作图，若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，建立回归方程在坐标纸上呈明显直线趋势，建立回归方程y=a+bx，要求，要求a a接近于接近于0 0，b b在在0.971.03之间，若满之间，若满足此条件，则可直接判断该测定方法是否在所要足此条件，则可直接判断该测定方法是否在所要求的线性范围。求的线性范围。第27页，共30页，编辑于2022年，星期六 若若a较大，较大，b1.03或或0.97则认为在高浓度或低则认为在高浓度或低浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。试着舍去浓度处的实测值和预期值间有较大偏差。试着舍去某组数据，另作回归分析，直到某组数据，另作回归分析，直到a接近于接近于0，b在在0.971.03之间，此时缩小的分析范围是真实的可报之间，此时缩小的分析范围是真实的可报告范围。告范围。第28页，共30页，编辑于2022年，星期六下次课预习内容下次课预习内容标准曲线制作（赖氏法测定标准曲线制作（赖氏法测定ALT)第29页，共30页，编辑于2022年，星期六第30页，共30页，编辑于2022年，星期六